ЯГТУ / Профессиональная подготовка специалистов для производства иммунобиологических лекарственных препаратов (вакцин). Направление «Biotechnical» / Презентация лекции 3 Выделение и очистка биологически активных субстанций

Расходные материалы Process scale

Схема процесса основные стадии

1.Упаковка и уравновешивание колонки

2.Нанесение образца

3.Промывка (удаление не связавшихся компонентов)

4.Элюирование

5.Регенерация

https://www.thermofisher.com/uk/en/home/industrial/chromatography/chromatography-sample-preparation/sample-preparation- consumables/solid-phase-extraction-consumables/spe-guide.html

Устройство хроматографической системы

Хроматограмма — результат регистрирования зависимости концентрации компонентов на выходе из колонки от времени Базовая линия – сигнал от подвижной фазы

Пик – часть хроматограммы, регистрирующая отклик детектора. Пик отображает постепенное нарастание концентрации вещества и последующее ее уменьшение. В случае линейной изотермы сорбции кривая, описывающая пик, приближается к кривой гауссова распределения Основание пика — продолжение базовой линии, соединяющее начало и конец пика

Площадь пика (S) – площадь хроматограммы, заключенная между кривой, описывающей пик, и его основанием

Высота пика (H) – расстояние от максимума пика до его основания, измеренное параллельно оси отклика детектора

Время удерживания (tR или t) – время, необходимое для элюирования вещества. Соответствует времени появления максимума пика на хроматограмме

Объем удерживания (VR) – объем подвижной фазы, необходимый для элюирования вещества. Может быть вычислен по времени удерживания и скорости потока (F)

Время удерживания несорбирующегося вещества (t0 или tм) – время,

необходимое для элюирования неудерживаемого на сорбенте вещества. В эксклюзионной хроматографии t0 соответствует времени удерживания веществ, размер молекул которых больше, чем наибольшие поры сорбента

Объем удерживания несорбирующегося вещества (V0) – объем подвижной фазы, необходимый для элюирования неудерживаемого вещества. Может быть вычислен по времени удерживания неудерживаемого вещества и скорости потока (F)

Объект выделения

Типичная молекула белка

Заряженные группы, гидрофобные сайты, активные центры, размер, растворимость – определяют химические и биофизические свойства и прямо влияют на поведение молекулы при очистке.

Объект выделения – аминокислоты

Карбоксильная группа (карбоксил) -СООН — функциональная одновалентная группа, входящая в состав карбоновых кислот и определяющая их кислотные свойства.

Аминогруппа — функциональная химическая одновалентная группа -NH2, органический радикал, содержащий один атом азота и два атома водорода.

Общая структура α-аминокислот, составляющих белки (кроме пролина). Составные части молекулы аминокислоты — аминогруппа NH2, карбоксильная группа COOH, радикал (различается у всех α-аминокислот), α-атом углерода (в центре).

Объект выделения – аминокислоты