ЯГТУ / Профессиональная подготовка специалистов для производства иммунобиологических лекарственных препаратов (вакцин). Направление «Biotechnical» / Презентация лекции 2 Промышленное культивирование клеточных культур
.pdf
УСЛОВИЯ ПРОИЗВОДСТВА АДЕНОВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ |
41 |
•Используемые оптимизированные культуры: HEK293 или PER.C6
•Питательные среды: синтетические, не содержащие продуктов животного происхождения.
•MOI = от 1 ( для инфицирования всех клеток 5-10), t = 37 ͦC, DO ≥ 30%.
•Прекращение культивирования происходит примерно через 48 часов после инфицирования (жизнеспособность клеток 80-40%, оптимальная плотность клеток –
1-2 *106 кл/мл).
•После 24 часов после инфицирования происходит замена 90% объёма питательной среды.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОЦЕССА |
42 |
|
ФЕРМЕНТАЦИИ И ПРОДУКЦИИ ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦ |
||
|
Инфекционность вируса (MOI)
Процент инфицированных клеток для определения
оптимального MOI определяется на этапах отработки технологии, по зеленому флуоресцирующему белку, при помощи метода проточной цитофлуметрии
Вирусный титр
Количественная ПЦР( qPCR) Аналитическая ВЭЖХ (ВЭЖХ) Иммуноферментный анализ (ELISA) Анализ траекторий наночастиц (NTA)
Пятидесятипроцентная инфекционная доза культуры ткани (TCID 50 ) Biacore анализ
Оценка загрязнений продукта и полупродуктов
Оценка тотальной ДНКPicoGreen анализ
ДНК клеток продуцентов – количественная ПЦР Тотальный белок – калориметрические методы определения белка
Белки клеток продуцентов – Иммуноферментный анализ и Вестерн Блоттинг Загрязнения, связанные с процессами – Иммуноферментный анализ, ВЭЖХ, массректрометрия
Характеризация по форме и размеру – электронная микроскопия
ПРОЦЕНТ ИНФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОК |
43 |
Определение MOI
Проточная цитофлуориметрия — метод исследования дисперсных сред в режиме поштучного анализа элементов дисперсной фазы по сигналам светорассеяния и флуоресценции.
ВИРУСНЫЙ ТИТР |
44 |
|
3 |
Вирусный титр - количественная оценка вирусов содержания вируса в исследуемом материале
Вирусный титр
Количественная ПЦР( qPCR) Аналитическая ВЭЖХ (ВЭЖХ) Иммуноферментный анализ (ELISA) Анализ траекторий наночастиц (NTA) Пятидесятипроцентная инфекционная доза культуры ткани (TCID 50 )
Biacore анализ
КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЗЕПНАЯ РЕАКЦИЯ |
45 |
ПЦР в реальном времени (или количественная ПЦР, англ. Real-time PCR, qPCR, qRT-PCR) —
метод, основанный на методе полимеразной цепной реакции (множественной амплификации целевого гена), используется для одновременной амплификации и измерения количества участка молекулы ДНК.
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ |
46 |
Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) —
лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных низкомолекулярных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело.
ВЭЖХ |
47 |
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), аналитический вариант классической колоночной хроматографии высокого давления. ВЭЖХ позволяет проводить одновременное разделение сложных проб на составляющие их компоненты, детектирование большинства компонентов, а также измерение концентрации одного или нескольких соединений.
ПЯТИДЕСЯТИПРОЦЕНТНАЯ ИНФЕКЦИОННАЯ ДОЗА КУЛЬТУРЫ |
48 |
|
ТКАНИ (TCID 50 ) |
||
|
Пятидесятипроцентная инфекционная доза культуры ткани (TCID 50 ) является мерой
титра инфекционного вируса . Этот анализ конечного разведения определяет количество вируса, необходимое для уничтожения 50% инфицированных хозяев или для создания цитопатического эффекта в 50% инокулированных клеток тканевой культуры.
BIACORE АНАЛИЗАТОР |
49 |
Анализатор может применяться для измерения концентрации различных белковых конъюгатов, нуклеиновых кислот, вирусов и целых клеток по аттестованным методикам.
Принцип действия анализатора основан на анализе
https://all-pribors.ru/
биомолекулярного взаимодействия в реальном времени с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (ПНР).
ЧИСТОТА ПРОБ |
50 |
•Количественная ПЦР
•Иммуноферментный анализ
•Вестерн-блоттинг
•Электрофорез в полиакриламидном геле
biolegend.com