Методические материалы для врачей и студентов / Преаналитический этап

гемолиз, что может негативно сказаться на результатах лабораторных исследований. При выполнении гематологических исследований на значительном удалении от места взятия крови неизбежно возникают проблемы, связанные с условиями транспортировки. При перевозках пробирок с кровью рекомендовано использовать герметично закрытые пластиковые пробирки и специальные транспортные изотермические контейнеры.

Получение сыворотки и плазмы крови. Основные закономерности при взятии крови для получения сыворотки и плазмы.

Сыворотка. В сыворотке проводят исследование биохимических показателей, гормонов, антител к инфекционным агентам. Используют

пробирки с красной или желтой крышкой. При получении сыворотки основная тенденция – ускорить свертывание крови без повреждения клеток.

Для этого кровь пускают по стенке пробирки, чтобы контакт со стенкой уже активировал свертывание. В коммерческих пробирках внутрь помещают полистироловые гранулы для усиления контактной активации свертывания.

В лабораторию может отдаваться как цельная кровь, так и отобранная сыворотка. Венозная кровь после взятия отстаивается в пробирке при комнатной температуре (18-25°С) в течение 30-60 минут (до полного образования сгустка). Пробирки для исследования сыворотки следует центрифугировать не ранее чем через 30 минут после взятия крови, чтобы гарантировать свертывание крови. Сыворотка должна быть отделена от кровяного сгустка не позднее двух часов после взятия крови. Для отделения сыворотки от форменных элементов необходимо: центрифугировать кровь после образования сгустка при 1300g в течение 10 минут; в пробирках с гелем

– центрифугировать кровь при 1500-2000g в течение 10 минут, а затем отобрать сыворотку в одноразовую пластиковую пробирку. Гель обеспечивает стабильный барьер между сывороткой и форменными элементами на 48 часов.

Повторное центрифугирование пробирок с гелем не разрешается. Полученная

21

сыворотка до передачи курьеру должна храниться в холодильнике (от +2°С до

+4°С) или в контейнере с хладогеном. Отобранную сыворотку можно хранить в холодильнике в течение 1-2 дней. Для более длительного хранения (что не желательно), сыворотку необходимо заморозить. После размораживания сыворотку необходимо тщательно перемешать. Повторное замораживание недопустимо.

Плазма крови. При взятии крови в пробирку следует обеспечить первичное взаимодействие крови с антикоаулянтом, избегая контактного активирования системы свертывания.

На коагулологические исследования взятие крови осуществляется только из вены в пробирку с голубой крышкой, содержащей а качестве антикоагулянта цитрат натрия. Кровь пациента для определения протромбинового времени и других тестов на его основе до передачи курьеру должна храниться при комнатной температуре (от +20°С до +24°С),

центрифугировать не позднее, чем через 45 минут после взятия, само исследование должно быть проведено в течение 2-х часов с момента взятия крови. Хранение в холодильнике или в контейнере с хладогеном категорически запрещено. Для проведения всех прочих тестов плазму следует хранить при температуре от +2°С до +8°С не более 4 часов. Допускается однократное замораживание бедной тромбоцитами плазмы при температуре от – 20°С до – 40°С на срок до нескольких недель без значительной потери активности факторов свертывания. Размораживание плазмы следует осуществлять при температуре +37°С, повторная заморозка недопустима.

Кровь отправляется в лабораторию в день взятия. До следующего дня хранить кровь нельзя! Транспортировка крови на большие расстояния и ее частое встряхивание искажает результаты анализов.

На иммунологический анализы (витамины, иммунный статус,

электролиты) используются пробирки с лития гепарином – пробирка с зеленой крышкой (в т.ч. для исследования ионов кальция и магния) или натрия гепарином. При комнатной температуре плазму необходимо

22

использовать для анализа в период от 2 до 6 часов после взятия образца.

Плазма отделяется центрифугированием (1000-1500g, 15 минут). Если доставка в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре от +4°С до +8°С в холодильнике и доставляется в лабораторию в специальных транспортных контейнерах с хладогеном, время доставки плазмы в лабораторию не должно превышать 24 часа. Для более длительного хранения плазма может быть заморожена при температуре – 20°С, при этом она может храниться до 4 недель. При быстром замораживании до – 70°С срок хранения может быть продлен до 6 месяцев.

На глюкозу применяются пробирки с фторидом натрия + оксалат калия

(пробирка с серой крышкой) или фторидом натрия + К2ЭДТА в том случае,

если кровь хранится более 2 часов. Считается, что эритроциты, даже в осадке отцентрифугированной крови, способны потреблять за 1 час до 10% глюкозы плазмы. Натрия фторид ингибирует процесс распада глюкозы в образце до 6

часов при комнатной температуре. Следует принимать во внимание, что содержание глюкозы в цельной крови на 10% ниже, чем в плазме. Допускается хранение пробы до 24 часов в холодильнике при температуре от +4°С до +8°С

в вертикальном положении.

При взятии крови из вены необходимо соблюдать правильную последовательность пробирок. Первой пробиркой всегда должна быть пробирка с красной или желтой крышкой, поскольку в первых каплях крови содержится тканевой тромбопластин, попавший в иглу из окружающих вену тканей. Тканевой тромбопластин активирует свертывание крови в первой пробирке. Если это будет голубая или сиреневая пробирки, в них кровь под действием попавшего тканевого тромбопластина частично свернется, что исказит результаты исследования плазмы. Голубая пробирка должна предшествовать сиреневой, так как при взятии крови сначала с сиреневую пробирку через иглу в голубую пробирку может попасть небольшое количество ЭДТА, что исказит результаты коагулологических исследований.

Поэтому правильной последовательностью пробирок будет следующая:

23

красная крышка, голубая крышка, зеленая крышка, сиреневая крышка, серая крышка, черная крышка.

Стабилизация, транспортировка, хранение материала и проб. Порядок транспортировки биоматериала.

Одной из главных проблем является игнорирование влияния сроков постановки лабораторных тестов и правил транспортировки проб в лабораторию. К примеру, значительная часть расхождений между автоматизированным и микроскопическим подсчетом клеточных элементов вызвана несоблюдением сроков постановки тестов. Стандартизация сроков доставки и жесткое соблюдение стандартов позволит избежать ошибочных результатов. Перевозка крови в стеклянных пробирках с ватными пробками приводит к впитыванию крови в ватный тампон, гемолизу. Перевозка проб,

предназначенных для биохимического или иммунологического анализа без предварительного центрифугирования, приводит к искажению результатов за счет влияния клеточных элементов. Одним из решений, позволяющих облегчить транспортировку и увеличить сроки постановки реакций, является применение стабилизаторов и разделительных элементов, например гелей и гранул.

Общее правило – доставить материал как можно быстрее, для некоторых исследований в короткие сроки 15-30-45 минут. Доставка пробирок должна проводиться в вертикальном положении, в штативе, избегая встряхивания.

Транспортировка биологического материала в лабораторные подразделения должна осуществляться в специальных закрытых от внешнего воздействия пластиковых контейнерах-укладках с крышками, которые подвергаются дезинфекции. Недопустимо доставлять биоматериал в карманах, бумажных пакетах или сумках. Пробирки, контейнеры с мочой и другим биоматериалом выставляются на стол регистратора в перчатках. В зимнее время транспортировка биоматериала по улице при минусовых температурах должна быть максимально сокращена.

24

Вакуумные системы. Для стандартизации условий взятия,

транспортировки и хранения биологических проб пациента были разработаны вакуумные системы. Плотно закрытые пробирки предотвращают контакт биологического материала с воздухом, испарение пробы, повышения концентрации всех нелетучих компонентов. Строго дозированные в заводских условиях наполнители обеспечивают необходимое соотношение крови и реагента для каждого вида исследований. Добавленный в пробирки с оксалатом или ЭДТА калия ингибитор (фторид натрия) сохраняет стабильность глюкозы в пробе до 24 часов. Гель обеспечивает стойкий барьер,

максимально эффективно отделяя форменные элементы от плазмы или сыворотки. Проба находится в одной пробирке при взятии, транспортировке,

анализе, хранении, что исключает необходимость переливания, уменьшает возможность возникновения гемолиза и вспенивания образца. Вакуум исключает воздействие давления поршня шприца на форменные элементы.

Хранение проб. Пробы, хранившиеся в холодильнике, перед проведением анализа необходимо нагреть до комнатной температуры. В

процессе хранения и транспортировки проб крови существенное влияние на стабильность аналитов оказывают свет и сильная вибрация. Неосторожное обращение с контейнерами с кровью (сильная тряска, удары) может привести к гемолизу. Под воздействием прямого солнечного света в образце разрушаются билирубин, витамин С, порфирины, креатинкиназа, фолиевая кислота. На этапе получения, хранения и транспортировки биоматериала в рамках оценки качества контролю подлежат: время взятия материала,

правильный выбор типа пробирки (антикоагулянт, стабилизатор), время отделения форменных элементов, длительность и условия хранения образца,

время доставки материала в лабораторию, целостность контейнера с образцом,

соблюдение соотношения крови и антикоагулянта. После взятия материала пробирки маркируются и передаются курьеру вместе с направлениями.

Номера на пробирках должны соответствовать номерам на направлениях.

25

26