Материалы и методы

Измерение флуоресценции исследуемых растворов осуществляется с помощью спектрофлуориметра. Прибор снабжён монохроматорами для выделения отдельной длины волны как возбуждающего, так и испускаемого света. Флуоресценция попадает на фотоумножители и затем количественно измеряется с помощью соответствующих электронных устройств. Схема использованной установки представлена на рисунке 2.

1

Были приготовлены растворы триптофана (210^-5 М), тирозина (10^-4 М), БСА (10^-5 М) в двух средах – растворе NaOH и фосфатном буфере. Условия регистрации флуоресценции растворов: диапазон съемки – 285-450 нм для _возб = 275 нм, 305-450 нм для _возб = 295 нм, шаг -1 нм, спектральная ширина щелей – 4 нм.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Были сняты спектры флуоресценции триптофана (210^-5 М), тирозина (10^-4 М), белка (10^-5 М) при двух длинах волн возбуждения – 275 и 295 нм и в двух средах – растворе NaOH и фосфатном буфере.

Рис. 2 – спектры флуоресценции растворов NAOH при длине волны возбуждения _возб = 295 нм

Рис. 3 – спектры флуоресценции растворов, приготовленных в фосфатном буфере при длине волны возбуждения _возб = 295 нм

Рис. 4 – спектры флуоресценции растворов NAOH при длине волны возбуждения _возб = 275 нм

Рис. 5 – спектры флуоресценции растворов, приготовленных в фосфатном буфере при длине волны возбуждения _возб = 275 нм

Таблица 1 ­— максимумы интенсивности флуоресценции триптофана (210^-5 М), тирозина (10^-4 М), белка (10^-5 М) при двух длинах волн возбуждения – 275 и 295 нм и в двух средах – растворе NaOH и фосфатном буфере.

№	Образец	Растворитель	Спектр испускания				Q, о.е		Стоксов сдвиг, нм
			lвозб , нм	l max , нм	I max, о.е
1	Трп	КФБ	275	346	78,1424	-		71
2			295	347	35,3475	-		52
3		NaOH	275	359	30,0731	-		84
4			295	357	19,7857	-		62
5	Тир	КФБ	275	299	90,6315	-		24
6			295	305	2,81484	-		10
7		NaOH	275	343	1,03304	-		68
8			295	339	0,364318	-		44
9	БСА	КФБ	275	336	81,303	-		61
10			295	339	23,4634	-		44
11		NaOH	275	335	6,16577	-		60
12			295	333	2,32607	-		38
13	Equiv	КФБ	275	345	55,0222	-		70
14			295	349	26,6971	-		54
15		NaOH	275	355	0,560127	-		80
16			295	327	0,145509	-		32

ВЫВОДЫ

В ходе выполнения работы обнаружено, что БСА и триптофан имею схожие спектры флуоресценции в некоторых растворителях, однако у БСА наблюдается спектр со сдвигом влево (коротковолновую область), что можно объяснить экранированием триптофановых остатков и неполярным положением триптофана внутри молекулы белка.

В ходе выполнения работы обнаружено, что БСА и триптофан имеют схожие спектры флуоресценции в некоторых растворителях, однако у БСА наблюдается спектр со сдвигом влево (коротковолновую область), что можно объяснить экранированием триптофановых остатков и неполярным положением триптофана внутри молекулы белка.

Стоксов сдвиг у Тир при длине волны 295, 10. Форма спектра узкая, что говорит о слабом взаимодействии молекулы с растворителем, так же не прописан целый спектр и на графике показан только край.

Эквивалентная смесь не совпадает с теоретическими данными из-за наложения с доминированием триптофана, т.к. у триптофана квантовый выход флуоресценции выше, нивелирование добавлением тирозина не произвело должного эффекта. Так же графики выгладят так, будто бы концентрация тирозина была занижена, что мы не можем проверить из-за отсутствия протокола эксперимента.