Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
флуоресцентные+метки.pptx
Скачиваний:
3
Добавлен:
04.04.2025
Размер:
6.38 Mб
Скачать

• Правило Левшина:

• поскольку структура

спектры поглощения и

колебательных

флуоресценции

подуровней

зеркально

одинакова в

симметричны,

основном и

 

возбужденном

 

состояниях

11

12

Спектр фосфоресценции в соответствии с диаграммой Яблонского лежит в области более длинных волн, чем спектр флуоресценции

13

14

Характеристики

люминесцирующих молекул

Спектр возбуждения люминесценции - зависимости интенсивности люминесценции I от частоты (волнового числа) или длины волны возбуждающего света

Спектр эмиссии (испускания)- зависимость интенсивности люминесценции от ее длины волны I = f(λ); I = f(v)

Время жизни люминесценции – время, за которое интенсивность излучения уменьшится в е раз, поскольку затухание люминесценции происходит по закону:

It = I0 e-t/τ

15

Энергетический выход люминесценции Вэн. - отношение излучаемой энергии к поглощенной

Bэн Ефл

Епогл

Квантовый выход Вкв. - отношение числа

излучаемых квантов к числу поглощенных квантов светового потока

Bкв Nфл

N погл

16

змерения в люминесценци

17

Упрощенная схема спектрофлуориметра 18

В основе количественного анализа лежит зависимость интенсивности люминесценции от концентрации люминесцирующего вещества

Iфл К I0 Bкв c l

oгде К коэффициент пропорциональности

oВкв – квантовый выход люминесценции

oI0 – интенсивность возбуждающего света

oε - молярный коэффициент поглощения

ol – толщина слоя раствора

Это соотношение справедливо, если постоянны:

oквантовый выход

oинтенсивность возбуждающего света

I kC

20

Зависимость линейна в пределах 3-4 порядков величин концентрации (10 -7 -10 -4 М)

I ф л

c

Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества

При концентрациях >10 -4 М линейность графика нарушается из-за концентрационного тушения люминесценции , самопоглощения и др.

21