Конспекты / Сводки по темам / культивирование вирусов

I. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСОВ

Вирусы - облигатные внутриклеточные паразиты, способные существовать только в живых клетках. Клетки, потенциально чувствительные к вирусу называются пермиссивные. Для культивирования вирусов используют чувствительных лабораторных животных, куриные эмбрионы и клеточные культуры.

Лабораторные животные. Заражение чувствительных к данному вирусу животных приводит к их гибели или появлениям определенных признаков вирусного заболевания.

Куриные эмбрионы. Исследуемый материал вносят в хорион - аллантоисную мембрану, аллантоисную, амниотическую полость, в воздушный мешок. Некоторые вакцины (например, против гриппа, желтой лихорадки) созданы с использованием куриных эмбрионов.

Клеточные культуры - наиболее распространенный объект для культивирования вирусов. Кусочки ткани обрабатывают протеолитическими ферментами (как правило, трипсином), получая суспензию изолированных клеток, которую взвешивают в жидкой питательной среде. При оседании они довольно прочно прикрепляются к стенке пробирки или флакона, по которой распространяются в виде пласта, состоящего из одного слоя клеток (монослоя). После формирования монослоя, клеточная культура может быть заражена материалом, содержащим вирусы.

Клеточные культуры могут перевиваться, или субкультивироваться, несколько раз (т.е., выдерживают несколько пассажей). Пассажем называют процесс, при котором клетки однослойной культуры переносят в новые контейнеры со свежей питательной средой (обычно пассаж производят каждые 3-4 дня). По способности перевиваться in vitro различают три типа клеточных культур.

Первичные (неперевиваемые, первично-трипсинизированные) клеточные культуры - нормальные клетки тканей животного или человека, обычно выдерживают не более 5- 10 пассажей (субкультивирований).

Полуперевиваемые культуры - это диплоидные слабоспециализирован-ные клетки человека (чаще эмбриональных тканей), способные сохранять свои свойства в течение 50 пассажей (до 1 года). Данные клеточные линии часто используются при производстве вирусных вакцин.

Перевиваемые клеточные культуры обычно получают из злокачественных клеток, с измененной генетической информацией (поэтому эти клетки не используют при получении вирусных вакцин), обладающих способностью длительно размножаться in vitro при определенных условиях. Наиболее известна из перевиваемых культур HeLa линия, первоначально выделенная из карциномы шейки матки пациентки Helen Lambert в 1951 году и используемая для научных экспериментов во всем мире.