
- •1. Мембранные технологии, их использование в биотехнологии.
- •1. Пластинчатый диализатор
- •2. Диализатор типа «фильтр-пресс»
- •2. Роль мембранных технологий в очистке генно-инженерных белков.
- •1. Ультрафильтрация
- •2. Диализ
- •3. Электродиализ
- •3. Предложить вариант мембранной технологии для концентрирования большого количества раствора генно-инженерного белка
- •1. Ультрафильтрация: Первичный этап концентрирования
- •2. Диализ: Удаление остаточных солей и буферных компонентов
- •3. Электродиализ: Регулировка ионного состава
- •4. Центрифугирование, основные методы.
- •1. Этапы применения центрифугирования
- •1.1. Удаление клеточного мусора (клеточный лизат)
- •1.2. Концентрация белка
- •Тип ротора:
- •Условия центрифугирования:
- •Особенности
- •Виды колориметрии
- •Пример работы фотоколориметра
- •Строение и принцип работы спектрофотометра на диодной матрице:
- •Преимущества и особенности:
- •1. Поглощение белков в уф-области
- •2. Поглощение нуклеиновых кислот (нк) в уф-области
- •3. Изобестическая точка
- •Применение в бт:
- •1. Ультрафиолетовая видимая спектроскопия (uv-Vis)
- •1. Источник инфракрасного излучения
- •2. Монохроматор
- •3. Оптическая система
- •4. Образец
- •5. Приемники излучения
- •Принцип работы
- •Особенности и преимущества Фурье-ик-спектрометра
- •1. Инфракрасная (ик) спектроскопия Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •Применение:
- •2. Раман-спектроскопия (спектроскопия комбинационного рассеяния) Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •3. Спектроскопия комбинационного рассеяния ближнего ик-диапазона (nir-спектроскопия)
- •Применение флуоресценции в биотехнологии
- •Тушение флуоресценции
- •Иммунофлуоресценция
- •Основные элементы устройства
- •Импульсные спектрометры с преобразованием Фурье (ft-nmr)
- •Основные этапы maldi масс-спектрометрии:
- •1. Время удерживания:
- •2. Время удерживания несорбируемого компонента или мертвое время:
- •3. Мертвый объём
- •4. Фактор удерживания к (коэффициент ёмкости)
- •5. Селективность (α):
- •6. Эффективность - число теоретических тарелок
- •7. Высота теоретической тарелки (h):
- •8. Пиковая емкость колонки
- •9. Разрешение Rs:
- •10. Фактор асимметрии для Асимметричные пики («с хвостом»)
- •1. Экстракция водорастворимых биологически активных соединений
- •2. Экстракция жирорастворимых биологически активных соединений
- •1. Лиофильные сушилки (фриз-драйеры)
- •Принцип действия:
- •2. Ротационные испарители
- •3. Сушильные шкафы
- •2. Спрей-сушилки (распылительные сушилки)
- •3. Вакуумные сушилки Принцип действия:
- •Применение:
- •1) Источники питания
- •38.Сравнительный анализ хроматографических и электрофоретических задач в биотехнологии.
- •2. Типы анализируемых веществ:
- •5. Оборудование и сложность:
- •40. Капиллярный электрофорез, особенности и достоинства метода в сравнении с планарным электрофорезом.
1. Источник инфракрасного излучения
Для генерации излучения в ИК-диапазоне используются следующие источники:
Силитовый стержень ("глобар") — штифт из карбида кремния, нагреваемый до температуры ~1300 °C. Максимум интенсивности излучения приходится на область ~5000 см⁻¹ (~2 мкм), однако в длинноволновой области интенсивность значительно снижается (например, на ~600 см⁻¹ она падает в 600 раз).
Штифт Нернста — стержень из оксидов редкоземельных элементов, также нагреваемый током.
Ртутная лампа высокого давления — используется в длинноволновой области ниже 200 см⁻¹. Ее излучение связано с тепловым излучением стенок и эмиссией ртутной дуги.
Источники излучения в длинноволновой области (400–200 см⁻¹) остаются слабым звеном, так как мощность теплового излучения здесь крайне низка. Например, дуговая лампа с общей мощностью 1 кВт генерирует только ~0.1 Вт в этой области.
Эти источники работают по принципу генерации теплового излучения, близкого к излучению абсолютно черного тела.
2. Монохроматор
Монохроматор отвечает за разделение полихроматического излучения на отдельные длины волн.
Диспергирующие элементы:
Призмы из прозрачных в ИК-области материалов: NaCl, KBr, LiF (для средней ИК-области), CsI (для длинноволновой области, 200–400 см⁻¹).
Дифракционные решетки (эшелетты), обеспечивающие высокую спектральную разрешающую способность.
Дисперсия материалов максимальна около длинноволнового предела их прозрачности и быстро падает в сторону коротких волн, поэтому для разных спектральных областей используются сменные призмы.
3. Оптическая система
Для направления и фокусировки излучения используются:
Зеркала с высоким коэффициентом отражения.
Линзы из материалов, прозрачных в ИК-области (например, из ZnSe, KBr, CaF₂).
4. Образец
Образец размещается на пути ИК-излучения и может находиться в различных состояниях:
Твердые вещества — таблетки с KBr, пасты или пленки.
Жидкости — кюветы с окнами из NaCl или KBr.
Газы — специальные кюветы с большим оптическим путем.
5. Приемники излучения
Для регистрации интенсивности излучения применяются:
Тепловые приемники:
Термопары (термостолбики).
Болометры, основанные на изменении сопротивления материала при нагреве.
Пневматические приемники (ячейка Голея): тепловое расширение газа в зачерненной камере вызывает движение гибкой стенки, фиксируемое фотоэлементом.
Квантовые (фотонные) приемники:
Основаны на фотопроводимости (например, детекторы на основе PbS, HgCdTe).
Используются преимущественно в длинноволновой ИК-области.
Принцип работы
Источник излучения генерирует полихроматическое ИК-излучение.
Излучение направляется на монохроматор, где выделяется определенная длина волны.
Монохроматическое излучение проходит через образец, где часть энергии поглощается.
Остаточное излучение фиксируется приемником.
Данные о поглощении анализируются и выводятся в виде спектра.
Классические ИК-спектрометры используют сканирующий принцип, однако современные Фурье-ИК-спектрометры (с интерферометром Майкельсона) значительно ускоряют процесс измерений.
ИК-спектрометр с фурье преобразованием
Интерферометр
Ключевой элемент современных спектрометров — интерферометр Майкельсона.
Принцип работы:
Входящий луч делится светоделительным зеркалом на два пучка.
Каждый пучок отражается от зеркал и возвращается к точке объединения.
Интерференционная картина, зависящая от изменения длины одного из плеч, позволяет анализировать длину волны излучения.
Этот метод основан на явлении интерференции когерентных волн.
Интерференция (физика) — взаимное увеличение или уменьшение результирующей амплитуды двух или нескольких когерентных волн при их наложении друг на друга.
Преимущества ИК-спектрометра с фурье преобразованием
1. Высокая точность определения волнового числа.
2. Преимущество пропускания - площадь круглой щели, значительно больше, чем у узкой щели дифракционных спектрометров, что позволяет получить на детекторе световые потоки большей мощности.
3. В процессе сканирования получается информация одновременно обо всем исследуемом спектральном диапазоне, а не как в обычном спектрометре в разные моменты времени получается информация только об узких спектральных полосах исследуемого диапазона, в следствии чего уменьшается время регистрации спектра.
4. Отсутствие ограничений в спектральном разрешении за счет размеров оптических элементов, в настоящее время производятся ИК Фурье спектрометры с разрешением до 0,002 см -1.