40. Капиллярный электрофорез, особенности и достоинства метода в сравнении с планарным электрофорезом.
Капиллярный электрофорез белков — это современный и автоматизированный метод разделения смеси белков на фракции или индивидуальные белки с помощью электрического тока в проводящей среде в зависимости от их размера и заряда.
В основе метода лежат электрокинетические явления — электромиграция заряженных частиц и электроосмос. Если раствор находится в тонком капилляре, например, в кварцевом, то электрическое поле, наложенное вдоль капилляра, вызывает в нём движение заряженных частиц и пассивный поток жидкости, в результате чего проба разделяется на индивидуальные компоненты.
Некоторые преимущества капиллярного электрофореза:
полная автоматизация;
быстрая методика благодаря применению высокого напряжения;
отсутствие носителя, свободная миграция в жидкой среде;
высокая разрешающая способность и воспроизводимость результатов;
малый объём образца (высокая чувствительность).
Преимущества перед планарным электрофорезом
Методы капиллярного электрофореза
Капиллярный зонный электрофорез (КЗЭ)
КЗЭ – самая многофункциональная и универсальная разновидность КЭ
Разделение заряженных частиц по разности соотношений заряда к массе (q/m) в однородном буфере и при постоянном электрическом поле по всей длине капилляра.
Примеры использования:
• Ионы: неорганические анионы, катионы, органические кислоты
• Низкомолекулярные соединения: кислотные и основные лекарственные средства, нуклеотиды
• Крупные молекулы: пептиды, фрагменты пептидов, белки
НЕ разделяются:
• Нейтральные или сильно гидрофобные молекулы
• Гомологичные полимеры (например, олигонуклеотиды, ДНК)
• Их пригодность для разделения можно повысить с помощью производных (напр., сахаров) К
Модификации внутренней поверхности капилляра
Предотвращение взаимодействия аналита с внутренней стенкой капилляра Минимизация количества добавок в буферный раствор Управление электроосмотическим потоком
Примеры:
o Аминное покрытие
o Нейтральное покрытие (гидрофильное или гидрофобное)