
- •1. Мембранные технологии, их использование в биотехнологии.
- •1. Пластинчатый диализатор
- •2. Диализатор типа «фильтр-пресс»
- •2. Роль мембранных технологий в очистке генно-инженерных белков.
- •1. Ультрафильтрация
- •2. Диализ
- •3. Электродиализ
- •3. Предложить вариант мембранной технологии для концентрирования большого количества раствора генно-инженерного белка
- •1. Ультрафильтрация: Первичный этап концентрирования
- •2. Диализ: Удаление остаточных солей и буферных компонентов
- •3. Электродиализ: Регулировка ионного состава
- •4. Центрифугирование, основные методы.
- •1. Этапы применения центрифугирования
- •1.1. Удаление клеточного мусора (клеточный лизат)
- •1.2. Концентрация белка
- •Тип ротора:
- •Условия центрифугирования:
- •Особенности
- •Виды колориметрии
- •Пример работы фотоколориметра
- •Строение и принцип работы спектрофотометра на диодной матрице:
- •Преимущества и особенности:
- •1. Поглощение белков в уф-области
- •2. Поглощение нуклеиновых кислот (нк) в уф-области
- •3. Изобестическая точка
- •Применение в бт:
- •1. Ультрафиолетовая видимая спектроскопия (uv-Vis)
- •1. Источник инфракрасного излучения
- •2. Монохроматор
- •3. Оптическая система
- •4. Образец
- •5. Приемники излучения
- •Принцип работы
- •Особенности и преимущества Фурье-ик-спектрометра
- •1. Инфракрасная (ик) спектроскопия Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •Применение:
- •2. Раман-спектроскопия (спектроскопия комбинационного рассеяния) Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •3. Спектроскопия комбинационного рассеяния ближнего ик-диапазона (nir-спектроскопия)
- •Применение флуоресценции в биотехнологии
- •Тушение флуоресценции
- •Иммунофлуоресценция
- •Основные элементы устройства
- •Импульсные спектрометры с преобразованием Фурье (ft-nmr)
- •Основные этапы maldi масс-спектрометрии:
- •1. Время удерживания:
- •2. Время удерживания несорбируемого компонента или мертвое время:
- •3. Мертвый объём
- •4. Фактор удерживания к (коэффициент ёмкости)
- •5. Селективность (α):
- •6. Эффективность - число теоретических тарелок
- •7. Высота теоретической тарелки (h):
- •8. Пиковая емкость колонки
- •9. Разрешение Rs:
- •10. Фактор асимметрии для Асимметричные пики («с хвостом»)
- •1. Экстракция водорастворимых биологически активных соединений
- •2. Экстракция жирорастворимых биологически активных соединений
- •1. Лиофильные сушилки (фриз-драйеры)
- •Принцип действия:
- •2. Ротационные испарители
- •3. Сушильные шкафы
- •2. Спрей-сушилки (распылительные сушилки)
- •3. Вакуумные сушилки Принцип действия:
- •Применение:
- •1) Источники питания
- •38.Сравнительный анализ хроматографических и электрофоретических задач в биотехнологии.
- •2. Типы анализируемых веществ:
- •5. Оборудование и сложность:
- •40. Капиллярный электрофорез, особенности и достоинства метода в сравнении с планарным электрофорезом.
5. Селективность (α):
Определение: Показывает способность системы разделять два компонента.
Значение: Чем больше α, тем лучше разделение двух компонентов. Значение α > 1 указывает на разделение.
Зависит от: сорбента, элюента, аналита; температуры (если есть физико-химические взаимодействия. В эксклюзионной – НЕТ)
Не зависит от: размеров колонки; скорости подачи элюента Имеет смысл только для изократики!
В общем смысле - способность хроматографической системы разделять некую смесь аналитов. Под системой здесь понимается конкретная колонка и элюент (или метод градиента)
6. Эффективность - число теоретических тарелок
Определение: Характеризует размывание пика в колонке. Выражается числом теоретических тарелок (N)
Значение: Чем больше N, тем уже пик и тем эффективнее колонка. Высокая эффективность указывает на хорошее разделение компонентов.
Под эффективностью хроматографической системы понимают её способность препятствовать размыванию пиков.
Теория теоретических тарелок основана на допущениях:
1. колонка содержит некое число теоретических тарелок;
2. на каждой тарелке мгновенно достигается равновесие (равновесное отношение доли сорбированного вещества к доле, оставшейся в подвижной фазе), причём до того, как подвижная фаза переместится на следующую тарелку;
3. вводимая проба должна быть малой и обеспечивать линейную изотерму сорбции;
4. все протекающие в колонке процессы рассматриваются как взаимозависимые.
Теоретическая тарелка – это гипотетическая зона, высота которой соответствует достижению равновесия между двумя фазами. Чем больше теоретических тарелок в колонке, чем большее число раз устанавливается равновесие, тем эффективнее колонка. Количественной мерой эффективности колонки служат высота Н, эквивалентная теоретической тарелке, (ВЭТТ), и число теоретических тарелок N.
Эффективность колонки тем выше, чем уже пик при том же времени удерживания
Имеет смысл только в приложении к конкретному аналиту в конкретных условиях (колонка, элюент, скорость потока, температура и т.д.). Используется для сравнения разных колонок или сравнения тестов одной колонки в разное время. Новую колонку обязательно надо протестировать в условиях, максимально близких к фирменным тестовым. Позволяет сделать вывод о работоспособности и применимости конкретной колонки. Важный параметр пригодности колонки к работе по данной методике. При изократическом разделении выходящие позже пики уширяются больше.
Эффективность efficiency, термин с большим числом значений, в общем смысле: безразмерный параметр, характеризующий размывание зоны вещества в колонке. Обозначается №. Нередко эффективности приписывают формальную единицу "количество теоретических тарелок", "т.т.", "тыс. т.т." и тому подобное, что лишено какого-либо физического смысла. Зона вещества может размываться как внутри колонки, так и вне ее (экстраколоночное размывание). Размывание внутри колонки определяется множеством факторов, в том числе качеством упаковки колонки при ее производстве.Эффективность колонки, измеренная таким образом, чтобы выявить качество ее упаковки, часто называют паспортной эффективностью. Сам процесс измерения называют тестированием колонки. Параметр "эффективность колонки" часто критикуют за его формализм, что чревато возможностью манипулирования им в коммерческих целях. На практике следует постоянно помнить, что разрешение пропорционально всего лишь квадратному корню эффективности, что, к тому же, выполняется лишь в области высоких удерживаний.