
- •1. Мембранные технологии, их использование в биотехнологии.
- •1. Пластинчатый диализатор
- •2. Диализатор типа «фильтр-пресс»
- •2. Роль мембранных технологий в очистке генно-инженерных белков.
- •1. Ультрафильтрация
- •2. Диализ
- •3. Электродиализ
- •3. Предложить вариант мембранной технологии для концентрирования большого количества раствора генно-инженерного белка
- •1. Ультрафильтрация: Первичный этап концентрирования
- •2. Диализ: Удаление остаточных солей и буферных компонентов
- •3. Электродиализ: Регулировка ионного состава
- •4. Центрифугирование, основные методы.
- •1. Этапы применения центрифугирования
- •1.1. Удаление клеточного мусора (клеточный лизат)
- •1.2. Концентрация белка
- •Тип ротора:
- •Условия центрифугирования:
- •Особенности
- •Виды колориметрии
- •Пример работы фотоколориметра
- •Строение и принцип работы спектрофотометра на диодной матрице:
- •Преимущества и особенности:
- •1. Поглощение белков в уф-области
- •2. Поглощение нуклеиновых кислот (нк) в уф-области
- •3. Изобестическая точка
- •Применение в бт:
- •1. Ультрафиолетовая видимая спектроскопия (uv-Vis)
- •1. Источник инфракрасного излучения
- •2. Монохроматор
- •3. Оптическая система
- •4. Образец
- •5. Приемники излучения
- •Принцип работы
- •Особенности и преимущества Фурье-ик-спектрометра
- •1. Инфракрасная (ик) спектроскопия Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •Применение:
- •2. Раман-спектроскопия (спектроскопия комбинационного рассеяния) Описание метода:
- •Применяемые техники:
- •3. Спектроскопия комбинационного рассеяния ближнего ик-диапазона (nir-спектроскопия)
- •Применение флуоресценции в биотехнологии
- •Тушение флуоресценции
- •Иммунофлуоресценция
- •Основные элементы устройства
- •Импульсные спектрометры с преобразованием Фурье (ft-nmr)
- •Основные этапы maldi масс-спектрометрии:
- •1. Время удерживания:
- •2. Время удерживания несорбируемого компонента или мертвое время:
- •3. Мертвый объём
- •4. Фактор удерживания к (коэффициент ёмкости)
- •5. Селективность (α):
- •6. Эффективность - число теоретических тарелок
- •7. Высота теоретической тарелки (h):
- •8. Пиковая емкость колонки
- •9. Разрешение Rs:
- •10. Фактор асимметрии для Асимметричные пики («с хвостом»)
- •1. Экстракция водорастворимых биологически активных соединений
- •2. Экстракция жирорастворимых биологически активных соединений
- •1. Лиофильные сушилки (фриз-драйеры)
- •Принцип действия:
- •2. Ротационные испарители
- •3. Сушильные шкафы
- •2. Спрей-сушилки (распылительные сушилки)
- •3. Вакуумные сушилки Принцип действия:
- •Применение:
- •1) Источники питания
- •38.Сравнительный анализ хроматографических и электрофоретических задач в биотехнологии.
- •2. Типы анализируемых веществ:
- •5. Оборудование и сложность:
- •40. Капиллярный электрофорез, особенности и достоинства метода в сравнении с планарным электрофорезом.
Особенности и преимущества Фурье-ик-спектрометра
Получение спектра через интерферограмму
В отличие от классических приборов, Фурье-ИК-спектрометр регистрирует интерферограмму, которая затем преобразуется в спектр.
Одновременная регистрация всего спектра
Это достигается благодаря выигрышу Фелжета (мультиплекс-фактору):
Прибор регистрирует информацию обо всем исследуемом диапазоне одновременно.
Соотношение сигнал/шум значительно выше, чем у диспергирующих приборов.
Высокое спектральное разрешение
Разрешение Фурье-ИК-спектрометра не ограничено размерами оптических элементов.
Достигается разрешение < 0,001 см⁻¹, что несравнимо с ~0,02 см⁻¹ у приборов с дифракционными решетками.
Выигрыш Жакино (геометрический фактор)
Позволяет эффективно снизить телесный угол, увеличивая энергию, проходящую через прибор.
Это дает возможность повысить качество спектра и сделать прибор компактным.
Постоянное разрешение во всем спектре
В отличие от классических приборов, где разрешение может зависеть от длины волны, здесь оно остается неизменным.
Исследование пространственно-неоднородных объектов
Интерферометр может использоваться как диспергирующий элемент, а сигнал регистрируется фотодиодной матрицей для анализа неоднородностей.
Принцип работы Фурье-ИК-спектрометра
Полихроматическое излучение от источника направляется в интерферометр.
В интерферометре излучение разделяется на два пучка, которые интерферируют при изменении длины пути одного из них.
Полученная интерферограмма отражает распределение энергии в зависимости от частоты.
Приемник фиксирует интерферограмму, а компьютер выполняет обратное Фурье-преобразование, вычисляя спектр.
Результат выводится в виде графика зависимости интенсивности поглощения от частоты (или длины волны).
Применение Фурье-ИК-спектрометров
Анализ химического состава веществ.
Исследование сложных молекулярных структур.
Определение пространственно-неоднородных объектов.
Высокоточный контроль качества в фармацевтике, химической и пищевой промышленности.
Опять же не знаю, про образцы, мне кажется нет смысла повторять…
Спектроскопия КР (рамановская)
По сравнению с другими методами вибрационной спектроскопии, например, ИК-Фурье и спектроскопии ближнего ИК, спектроскопия комбинационного рассеяния (рамановская) имеет ряд преимуществ. Они являются следствием того, что рамановский эффект наблюдается в рассеянном свете от образца, а не в спектре поглощения образцом света. Поэтому рамановская спектроскопия не требует специальной подготовки образца и нечувствительна к полосам поглощения. Это свойство рамановской (КР) спектроскопии облегчает процесс непосредственного измерения в твердых, жидких и газообразных средах, а также измерения через прозрачные материалы, например, стекло, кварц, пластмассу. Можно снимать спектры в воде.
Чтобы колебание было активным в спектроскопии КР, при молекулярных колебаниях должна меняться поляризуемость. Чтобы молекула поглощала энергию инфракрасного излучения, при колебаниях молекулы должен меняться дипольный момент.
Аппаратура для Раман -спектрометрии
Раман спектрометр может быть реализован для как для исследования макро- так и микрообразцов. Решение для макрообразцов конструктивно напоминает спектрофлюориметр, отличаясь от него отсутствием монохроматора возбуждения. В качестве источника излучения обычно используют лазер. Рассеянное излучение собирают под прямым углом к лучу лазера для уменьшения паразитной засветки. Детектор рассеянного излучения может быть построен по классической схеме – монохроматор с дифракционной решеткой и одним датчиком. Другой вариант – полихроматор и линейка фотодиодов (или ПЗС матрица). В таком варианте жидкий образец помещается в кювету.
Другой подход основана на разделении падающего и рассеянного излучения с помощью полупрозрачных зеркал. Луч возбуждения и рассеянный свет проходит через один объектив. Подобные конструкции могут использоваться как для макро-образцов (твердых, жидких – см. следующий слайд), так и для микрообразцов (раман микроскопы – конструктивно похожи на конфокальные микроскопы – часто это один прибор)
10. Применение колебательной спектроскопии в БТ.