Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Все лк фарм бт

.pdf
Скачиваний:
19
Добавлен:
03.02.2025
Размер:
62.68 Mб
Скачать

Типы сорбентов для различных модальностей

FPLC (Fast protein liquid chromatography)

Аффинная

Ионообменная

Хроматография

Мультимодальная

Обращенно-фазовая

Хроматография (AC)

хроматография (IEX)

гидрофобных взаимодействий

хроматография (MM)

хроматография

 

 

(HIC)

 

 

Высокая специфичность

«Рабочая лошадка», широко

Тип хроматографии,

Несколько видов

Высокоразрешающая

взаимодействий – чистота в

применимый, классический и

ортогональный ионообменному

взаимодействий в одном

хроматография в

одну стадию

стабильный тип

 

сорбенте

 

неполярных растворителях

 

 

 

 

Лекция 3. Гидрофобная, мультимодальная и обращеннофазовая хроматография

Cytiva

Гидрофобная хроматография, HIC

Метод основан на обратимом взаимодействии белков с гидрофобными лигандами на поверхности сорбента

Гидрофобность / гидрофильность – свойство белков

сворачиваться в глобулу в воде (низкосолевом буфере) так,

чтобы на поверхности молекулы оказались полярные гидрофильные группы аминокислот, а неполярные гидрофобные группы оказались внутри глобулы изолированными от водного раствора

При высокой концентрации соли в растворе глобула белка разворачивается, обеспечивая контакт неполярных групп с гидрофобным сорбентом

Гидрофобность применительно к Hydrophobic Interaction Chromatography – обеспечиваемая свойствами белка/сорбента

прочность связывания молекулы с гидрофобным сорбентом в высокосолевом буфере

Гидрофобная хроматография, HIC

Загрузка образца и связывание происходят в буферах с высокой

ионной силой (концентрацией соли)

Перед загрузкой необходима подготовка материала –

увеличение концентрации соли в наносимом образце

Этап удобен после ионообменной хроматографии, когда материал уже находится в высокосолевом буфере

Элюция осуществляется в обратном градиенте ионной силы - при

понижении концентрации соли буфера

Первым всегда элюируется наименее гидрофобный компонент

Основное назначение метода – полировочная стадия очистки mAb, очистка от агрегатов (высокомолекулярных примесей)

Cytiva

Гидрофобная хроматография

Гидрофобная хроматография

 

 

 

Cytiva

https://www.youtube.com/watch?v=d8P04atG9Fs

 

 

 

 

 

Сорбенты для гидрофобной хроматографии

Cytiva

Hydrophobic Interaction Chromatography Selection Guide

Hydrophobic Interaction Chromatography (HIC)

Сорбенты для гидрофобной хроматографии Capto Phenyl,

Phenyl Sepharose 6 FF

https://cdn.cytivalifesciences.com/dmm3bwsv3/AssetStream.aspx?mediaformatid=10061&destinationid=10016&assetid=14385

Increasing productivity in hydrophobic interaction chromatography (HIC) using Capto resins