Все лк фарм бт

Ионообменная хроматография (IEX)

•Наиболее распространенная методика, может использоваться на разных этапах

•Низкая специфичность (множество молекул близких по заряду)

•Высокая емкость, разрешение, скорость

•При очистке происходит концентрирование образца

•CF – хроматофокусировка, редко используемая разновидность IEX ,

при которой элюция достигается изменением pH буфера.

Проблема в возможной агрегации белка в растворе на матрицу в случае приближения рН буфера к pI-точке молекулы

Ионообменная хроматография (IEX)

Взаимодействие зарядов молекул разделяемых веществ и противоположных зарядов лигандов, связанных с хроматографической матрицей

•Неподвижная фаза, заряженная положительно = анионообменник, анионит

(захватывает отрицательно заряженные молекулы, анионы)

•Неподвижная фаза, заряженная отрицательно = катионообменник, катионит

(захватывает положительно заряженные молекулы, катионы)

Q - Сильный анионит, рН 2-12

DEAE - Слабый анионит, рН 2-9

SP – Сильный катионит, рН 2-12

S – Сильный катионит, рН 2-12

CM - Слабый катионит, рН 6-10

Ion exchange chromatography columns and resins Selection Guide

Изоэлектрическая точка белка (pI)

Изоэлектрическая точка белка (pI)

•pI белка (изоэлектрическая точка) – значение рН буфера, при котором заряд белка равен нулю

•Определение pI-точки выполняется теоретически по аминокислотному составу белка, или экспериментально методом изоэлектрофокусирования

Буфер с низким рН – кислотный буфер, в нем присутствует много ионов H+

pH буфера < pI белка – заряд белка положительный

Буфер с высоким рН – щелочной буфер, в нем присутствует много ионов OH-

pH буфера > pI белка – заряд белка отрицательный