Все лк фарм бт
.pdf
Лекция 2. Аффинная хроматография. Ионообменная хроматография. Принципы, сорбенты, применение
Аффинная хроматография (Affinity Chromatography)
•Метод основан на обратимом взаимодействии целевого белка с лигандом, иммобилизированным на поверхности сорбента
•Взаимодействие может быть «биоспецифичным» (типа Protein А – антитело) или «небиоспецифичным (типа Ni2+ - His-tag – металл-аффинная хроматография)
•Типичная схема включает классические этапы: нанесение образца / связывание, отмывка, элюирование, регенерация
•При элюции происходит концентрирование образца
•Элюирование может осуществляться с помощью изменения свойств буфера или добавления конкурентного лиганда
Типы хроматографии - AC
Основные характеристики:
•Является первой стадией при очистке (Capture step) в случае, если целевой белок имеет специфические аффинные группы
•Возможна одностадийная очистка (как правило, для теговых белков)
•Высокая емкость, специфичность, разрешение, скорость
•При очистке происходит концентрирование образца
•Возможно элюирование в «мягких» условиях, оказывающих минимальное влияние на активность белка.
Affinity chromatography columns and media Selection Guide
Аффинная хроматография на Protein A для захвата mAb
Матрица (основа) из |
Лиганд, избирательно |
агарозного полимера |
связывающий антитело – |
|
Protein A |
Моноклональные антитела
(Monoclonal Antibodies)