Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Все лк фарм бт

.pdf
Скачиваний:
19
Добавлен:
03.02.2025
Размер:
62.68 Mб
Скачать

Разновидности FPLC (Fast protein liquid chromatography)

Аффинная

Ионообменная

Хроматография

Мультимодальная

Эксклюзионная

Хроматография (AC)

хроматография (IEX)

гидрофобных

хроматография (MM)

хроматография

 

 

взаимодействий (HIC)

 

(SEC, gel filtration)

Высокая специфичность

«Рабочая лошадка»,

Тип хроматографии,

Несколько видов

Разделение по размеру

взаимодействий –

широко применимый,

ортогональный

взаимодействий в одном

 

чистота в одну стадию

классический и

ионообменному

сорбенте

 

 

стабильный тип

 

 

 

Эксклюзионная хроматография (гель-фильтрация)

Size Exclusion Chromatography Handbook

Метод основан на использовании сорбентов с определенной пористостью

Разделение происходит на основании размера молекул и различной скорости их прохождения через слой сорбента

Разделяемые молекулы не связываются с сорбентом

Элюирование изократическое

Состав буфера, как правило, не влияет на разрешение разделения

При очистке происходит разбавление образца

Ограничение метода – малая загрузка образца на цикл

(не более 10-12% от ОК, рекомендуется 1-2% от ОК)

Cytiva

Эксклюзионная хроматография (Gel-Filtration, Size Exclusion)

https://www.youtube.com/watch?v=aWtThd13I4I

Cytiva

Cytiva

Size exclusion chromatography columns and resins Selection Guide

Сорбенты для ГФ биополимеров c различными MW

Неподвижная фаза в гель-фильтрационных сорбентах

Матрицы низкого и среднего давления

1.Сефадекс (декстран, сшитый эпихлоргидрином)

2.Сефакрил (композит на основе перекрестносшитого аллил-декстрана) – до 1.5 бар

3.Супердекс (композит на основе перекрестносшитых агарозы и декстрана) – до 3 бар

4.Супероза (на основе перекрестносшитой агарозы) – до 3 бар

Матрицы высокого давления

1.PW – сорбенты, на основе полиметакрилата (давление до 30бар);

2.SOURCE – сорбенты, на основе полистирола, сшитого дивинилбензолом (давление до 100бар);

3.SW – сорбенты, на основе силикагеля, модифицированного гидрофильной группой (давление до 450бар)

ГФ – Определение молекулярной массы аналита

ГФ – Разделение по молекулярной массе, замена буфера

 

 

Пример группового разделения –

Пример хроматограммы при

 

разделении смеси белков по

 

замена буфера в препарате his-tag.

молекулярной массе

 

Нагрузка на колонку при замене

 

 

буфера – не более 30% от ОК

 

 

 

 

ГФ – Контроль качества препарата на базе mAb