Этапы подготовки и проведения исследований
1.Выбор релевантных и “модельных” вирусов
2.Выбор и демасштабирование исследуемых стадий очистки белка
3.Проведение стадий в лабораторном масштабе с добавлением вирусов
4.Обработка результатов и расчет логарифмического фактора снижения вирусной нагрузки для стадий
5.Объединение результатов и анализ рисков
Правила проведения исследований биологических лекарственных средств на территории Евразийского экономического союза
Общие рекомендации
•Возможность наработки высокого титра вируса (106 - 109 на мл).
•Эффективная и надежная система детекции выбранного вируса
•Безопасность выбранного вируса для исследователей
Регуляторные аспекты для клеточных культур грызунов
•До начала 1-й фазы клинических исследований: исследования с двумя вирусами из которых один – модельный ретровирус MuLV.
•До начала 3-й фазы клинических исследований исследования с не менее чем c тремя вирусами из которых один – модельный ретровирус MuLV.
Принципиальная схема очистки на примере рекомбинантного моноклонального антитела
КЖ
Захват на Prot A сорбенте
Инактивация при низком pH
Анионообменная
фильтрация
Противовирусная
нанофильтрация
Диафильтрация и приготовление ГЛФ
Добавление модельного вируса
Анализ кол-ва вируса после стадии
Регуляторные требования к стадиям
•Две направленные противовирусные стадии для релевантного вируса
•Корректное демасштабирование процесса
•Понимание механизма работы стадии (удаление или инактивация? и т.п.)
•Исследуемые образцы должны быть оценены на цитотоксичность и влияние на тестовые систему
•Изучить распределение вирусной нагрузки по различным фракциям (проскок нанесения; промывки; элюат)
•Оценка эффективности «старого» сорбента
•Оценка регенерации сорбента (carry over)
•Корректная статистическая обработка
•Корректное суммирование отдельных логарифмических факторов и
Принципиальная схема очистки на примере рекомбинантного моноклонального антитела
КЖ
Захват на Prot A сорбенте
Инактивация при низком pH
Анионообменная
фильтрация
Противовирусная
нанофильтрация
Диафильтрация и приготовление ГЛФ
Добавление модельного вируса
Анализ кол-ва вируса после стадии
Блок-схема одного этапа исследования
Исходный
материал
Вирусный
материал
“Spike”
Исследуемая
стадия
Параллельный
контроль
Зараженный стартовый материал
|
Дополнительные |
Фактор |
|
снижения |
|
образцы |
|
вирусной |
|
|
|
|
нагрузки |
|
|
|
Материал после стадии
Нанофильтрация Инактивация
задержка на фильтре по |
разрушение оболочки вируса |
размеру (поры~ 20 нм) |
|
|
|
Понижение |
Растворитель/ |
|
детергент |
|
|
|
pH до 3-4 |
Triton X-100; Tween 80 |
|
|
Трибутил фосфат |
•Выявить параметры процесса, которые могут влиять на эффективность стадии
•По возможности сохранить параметры, как в производственном процессе, или обосновать
худший случай для них.
QbD
• |
Дорого |
• |
Возможно |
• |
Долго |
• |
Желательно |
• |
Трудно |
• |
Полезно |
