Количественный метод |
|
Ультрацентрифугирование |
определения |
|
|
|
|
ретровирусных частиц |
|
|
|
Тонкосрезная ТЭМ |
|
|
|
|
|
|
o Данные по трем сериям нерасфасованного необработанного продукта в опытно-промышленном или промышленном масштабе при регистрации
o Известные эндогенные вирусы нужно определить количественно
o Необходимо учитывать вариабельность процесса
oСобранный материал с активным вирусом не должен использоваться для производства.
In vivo тесты являются дополнительными тестами для обнаружения вирусов, для выявления которых методы in vitro не эффективны
In vivo тесты правило 3R
Replacement Reduction Refinement
Замена |
Сокращение |
Улучшение |
•Необходимо руководствоваться правилом 3R
•Правильный выбор организма хозяина
•Выбор путей введения образца
•Выбор методов для выявления и объяснения ответа
Тестовые
животные
•Мыши сосунки
•Взрослые мыши
•Морские свинки
•Куриные
эмбрионы
Тесты на животных
|
|
Специфические |
Скрининг |
|
тесты |
|
вирусы |
|
|
|
|
|
|
•Мониторинг состояния животного
•Гемагглютинация (куриные эмбрионы)
•Тесты выработки антител (особенно к ретровирусам)
RESPIRATORY VIRUSES
https://slideplayer.com/slide/3383543/
25
Ограничения и недостатки тестирования
•Тестировать на все известные дорого, да и не возможно
•Риск пропустить новый вирус
•Риск ложноположительного результата
•Риск ошибки во время теста и оценки результатов
•Этические соображения для тестов in vivo
Цели:
•продемонстрировать, что вирусы, которые были обнаружены на этапе тестирования будут удалены/инактивированы в процессе очистки
•продемонстрировать, что привнесенные извне вирусы, которые не обнаруживаются на этапе тестирования, будут также удалены/инактивированы в процессе очистки
Результаты испытания клеточных линий и необработанного нерасфасованного продукта
Ситуация A
Case A
Ситуация B
Case B
Ситуация C
Case C
Ситуация D
Case D
Ситуация E
Case E
•Нет вирусов и вирусоподобных частиц
•Ретровирусы грызунов; A, C и R частицы
•Не инфицирующие человека вирусы
•Инфицирующие человека вирусы
•Неизвестные вирусы
Общая информация
•В ходе таких исследований в полупродукты с различных стадий добавляются выбранные “живые” модельный вирусы и оценивается их удаление/инактивация после стадии.
•Исследования проводятся не на производстве, а в специализированной лаборатории.
•Полнота исследования должна быть обоснована результатами тестирования клеточных банков и другими соображениями.
План действий исходя из разных случаев
Ситуация A
Case A
Ситуация B
Case B
Ситуация C
Case C
•Оценка противовирусной очистки с модельными вирусами
•Оценка противовирусной очистки с включением “специфического” модельного вируса (ретровируса)
•Тестирование 3-х серий очищенного нерасфасованного продукта на обнаруженный вирус (частицу).
Не обязательно для хорошо описанных частиц (для клеточных
линий CHO, BHK и т.п.
•Желательна оценка противовирусной очистки с включением
обнаруженного вируса
•Подробное исследование инактивации обнаруженного вируса.
•Обязательное тестирование 3-х серий очищенного нерасфасованного продукта на обнаруженный вирус (частицу)
