Все лк фарм бт
.pdf
Почему недостаточно тестирования целостности при многократном использовании ?
Износ и повреждения мембраны
Валидированная стерилизующая способность новой мембраны, подтвержденная тестами Целостности (ДП и ТП)
Повреждение, которое обнаруживается тестами целостности (ДП и ТП)
Износ, который можно обнаружить ДП определяет, ТП - бесполезна.
Износ, который не обнаруживается! ДП - бесполезен, ТП - бесполезна
Что же действительно влияет на барьерные функции мембраны?
Толщина мембраны
Геометрия пор
Заряд поверхности пор
Важные параметры при выборе стерилизующего фильтра
Документированная эффективность удаления микробов, стерилизующая квалификация
Химическая и физическая стойкость мембраны к компонентам препарата
Рабочая площадь мембраны, доступная для потока
Гидрофильность мембраны (для водных р-ров)
Наличие параметров и процедуры для тестирования целостности
Руководство по валидации!
Пирогены – что это и откуда берутся?
Структура внешней мембраны 
грам-отрицательной бактерии
Внешнее окружение |
|
клетки |
ЭНДОТОКСИН |
|
|
|
|
|
|
|
Молекула |
|
|
Внешняя мембрана |
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
Липополисахарида |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Периплазматическое |
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
Пептидогликановый слой |
||||
пространство |
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Внутренняя мембрана |
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
Внутренняя среда клетки |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Слайд заимствован из тренинга фирмы BioWittaker
Структура молекулы липополисахарида (ЛПС)
Антигенспецифическая Кор
цепь |
внешний внутренний |
Липид А |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Молекулярная масса 2,5– 70 кДа (в зависимости от длины цепи)
Единица эндотоксина EU (ЕЭ)
Определяется как количество химически чистого эндотоксина, вызывающего определенный биологический эффект
Например выделенные чистые препараты эндотоксинов имеют разные эффекты:
1 EЭ это для чистых препаратов EC-5 |
= |
100 пг |
EC-2 |
= |
200 пг |
EC-O111B4 |
= |
120 пг |
Для удобства принято, что 1 ЕЭ равна 100 пг эндотоксина
1пг = 1 Х 10-12 (одна триллионная часть грамма)
Это количество эндотоксинов (1EU) содержится примерно в 110 клетках грамотрицательных бактерий
Количественные и дозовые эффекты
Бактериальные эндотоксины являются исключительно активными (сильными) пирогенами. Для развития лихорадочного приступа достаточно присутствия бактериальных эндотоксинов в инфузионном растворе в концентрации 1 нг/мл (около 10 ЕЭ/мл)
(1000 пг/мл)
1 нг = 10-9 г (одна миллиардная часть грамма)
Пороговой дозой эндотоксинов при применении инфузионных растворов, установленной многими фармакопеями считается 5 ЕЭ на 1 кг веса тела в час
Другие пирогены менее активны, и для развития пирогенного ответа их концентрация должна быть в 100-1000 раз больше
Нормы содержания эндотоксинов
На западных предприятиях, как правило, существуют внутренние границы уровня пирогенности, максимальное допустимое содержание в ВДИ по гель-тромб тесту (LAL) 0,25 Ед/мл.
Уровень тревоги ≥0,03 Ед/мл в ВДИ (детектируемый)
Уровень немедленных корректирующих действий ≥0,125 Ед/мл
Что надо делать, чтобы не допустить появления пирогенов в препарате
Технологические подходы
Максимально сократить время технологического цикла
Исключить хранение препарата и вспомогательных растворов и жидкостей при температуре, допускающей рост м/о
Организовывать глубокую обеспложивающую/стерилизующую фильтрацию препарата, или полупродукта при невозможности избежать такого хранения
Обеспечить эффективную фильтрацию, регулярное обслуживание и тестирование целостности фильтров на линии компрессорного сжатого воздуха
Регулярная стерилизация и проверка на целостность фильтров на вентиляции емкостей (дыхательных фильтров)