Все лк ген инжа
.pdf
RPA: преимущества и недостатки
•Преимущества: высокая чувствительность, возможность одновременной детекции и количественного определения множества мишеней мРНК в одном образце РНК.
•Недостатки: отсутствие информации о размере стенограммы, а также возможности обнаружения
PDF Editor альтернативно сплайсированных транскриптов.
чтобы убрать водяной знак.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
Регуляторная последовательность ДНК
Регуляторная последовательность представляет собой сегмент нуклеиновой кислоты молекулы , которая способна увеличивать или уменьшать экспрессию специфических генов внутри организма.
Промотор – последовательность, с которой связывается полимераза в процессе инициации транскрипции.
Оператор – область, с которой связываются белки-репрессоры, подавляющие эксперссию данного гена.
PDF Editor
чтобы убрать водяной знак.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
Анализ структуры регуляторных последовательностей ДНК при помощи биоинформатики
Цис-регуляторные элементы: Промотор, Энхансер, Сайленсер, IRES, TATA-бокс, Прибнов-бокс и др.
PDF Editor
Multiple sequence alignment: BLAST, CLUSTAL
чтобы убрать водяной знак.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
Анализ активности регуляторной последовательности ДНК при помощи репортёрного гена
Репортёры — гены, которые присоединяют к регуляторным последовательностям других генов для исследования проявлений генов в культурах клеток.
Репортёрные гены состоят из 2 функциональных частей: область кодирования (ДНКпоследовательность, дающая информация о производимом белке) и промотор (специфичная
PDF EditorДНК-последовательность, связанная с областью кодирования, регулирует транскрипцию гена).
Их вводят в культивируемые клетки и наблюдают за изменением уровня экспрессии.
чтобы убратьВажноводяной,знакчтобы. ген-репортёр в норме не экспрессировался в клетке, только тогда через экспрессию гена-репортёра можно увидеть, что
Этот документ былинтересующийотредактирован с ген попал в клетку. Активируйте
Репортёрные гены
|
Ген |
Источник |
Результат экспрессии |
Проявление |
|
|
|
|
|
|
LacZ |
Escherichia coli |
β-галактозидазы |
Появление синей |
|
|
|
|
окраски на среде, |
|
|
|
|
содержащей субстрат |
|
|
|
|
X-gal |
|
САТ |
Escherichia coli |
Хлорамфениколацетилтрансфе |
Ацетилирование |
|
|
|
раза |
хлорамфеникола |
|
|
|
|
|
|
GFP |
Медуза Aequorea victoria и |
Зелёный флуоресцентный |
Флуоресценция; |
|
|
некоторые морские виды |
белок |
клетки, которые его |
Editor |
животных |
|
экспрессируют, |
|
|
|
светятся зелёным при |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
голубом свете |
|
LUC/LU |
Светлячок Photinini Photinus |
Катализирует реакцию с |
Биолюминесценция |
|
X |
pyralis, морские животные: |
люциферином с образованием |
|
чтобы |
|
некоторые виды |
света |
|
убрать водяной знак. |
|
|
||
|
|
ракообразных, медузы и |
|
|
|
|
морские анютины глазки |
|
|
Этот документ был отредактирован с |
|
|
||
Активируйте |
|
|
|
|
Микрочипы и матрицы ДНК
ДНК-микрочип (англ. DNA microarray или DNA chip, Gene chip, DNA chip) —
миниатюрная пластина с нанесенными на неё в определенном порядке фрагментами ДНК известной последовательности для проведения генетического анализа: изменения экспрессии генов, выявления однонуклеотидных полиморфизмов, генотипирования или повторного секвенирования мутантных геномов.
Микрочип изготавливается из стекла, силикона или пластика. ДНК наносится на него методом машинной микропечати и
химпришивки в виде
PDF Editor
множества точек, каждая из которых содержит равное количество синтезированных ДНК-
чтобы убратьфрагментовводяной знак. , имеющих
уникальную последовательность.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
Принцип работы микрочипа
Активная работа гена в данной ткани выражается в накоплении его матричной РНК (мРНК). Все мРНК экстрагируются из образца ткани, и с помощью фермента обратной транскриптазы на них синтезируется кДНК. Полученный набор кДНК метят с помощью флуоресцентных или
радиоизотопных меток. Смесь кДНК наносят на
микрочип, в каждой точке которого пришиты ДНКфрагменты. кДНК находят «свои» точки и комплиментарно связываются с ними. Затем специальный сканер определяет содержание
кДНК в каждой точке
PDF Editor
микрочипа, а программа соотносит его с названием гена, представленного данной точкой. Результат: матрица из
чтобы убратьточекводяной, интенсивностьзнак. которых прямо пропорциональна
активности соответствующих
Этот документ былгеновотредактирован с Активируйте .
Микрочип ДНК
Микрочип для 40000 проб, в котором каждая точка отображена псевдоцветом в соответствии с уровнем экспрессии соответствующего ей гена.
PDF Editor
чтобы убрать водяной знак.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
Метод вычитающей гибридизации
Схема вычитающей гибридизации геномной ДНК, предложенная Палмером и Ламаром, основана на клонировании гибридов трейсер-трейсер при помощи уникальных
рестриктных сайтов
PDF Editor
чтобы убрать водяной знак.
Этот документ был отредактирован с Активируйте
PDF Editor
чтобы убрать водяной знак.
Схема вычитания кДНК/мРНК, использующая щелочную
Этот документ был отредактировандеградациюс РНК на стадии 2. Активируйте