Все лк ген инжа

Ген lасZ в качестве селектируемого маркера

В качестве селектируемых маркеров часто применяется 5’-концевая часть гена b-галактозидазы E. coli – lacZ’, кодирущая N-концевую часть b- галактозидазы, которая путем объединения с недостающей С-концевой частью полипептида без образования пептидной связи восстанавливает ферментативную активность b-галактозидазы. b-Галактозидаза обладает способностью расщеплять искусственный субстрат Xgal с образованием окрашенного в голубой цвет продукта реакции. В том случае, когда в бактериальных клетках, которые содержат в хромосоме недостающую экспрессирующуюся 3’-концевую часть гена lacZ и выращиваются на среде с Xgal, в результате комплементации a-пептидом вектора появляется активность b-галактозидазы, образованные этими

клетками бактериальные колонии окрашиваются в

PDF Editor

голубой цвет. Уникальные сайты рестрикции для клонирования ДНК локализованы в начале гена b- галактозидазы в составе полилинкера, который не нарушает функциональной целостности последовательности нуклеотидов a-пептида.

чтобыВставкаубрать водянойрекомбинантнойзнак. ДНК в эти векторы разрывает структурную часть гена b-галактозидазы и инактивирует его, в связи с чем колонии бактерий с подобными рекомбинантными плазмидами,

Этот документвыросшиебыл отредактированна спитательной среде с Xgal, не Активируйте окрашены.

Вектор Bluescript M13+

Вектор Bluescript M13+ представляет собой кольцевую ковалентно замкнутую молекулу ДНК длиной около 3 т.п.о. Он включает в себя ген устойчивости к ампициллину Ampr, ген b-галактозидазы lacZ, в N- концевую часть которого встроен полилинкер, содержащий уникальные сайты рестрикции для 21 рестриктазы, промоторно-операторную область lacZ, а также ген lac-репрессора lacI.

Полилинкер в векторной плазмиде содержит на одном конце промотор для Т7-, а на другом – для Т3-РНК- полимераз, которые ориентированы навстречу друг

PDF Editorдругу.

Кроме того, вектор Bluescript M13+ обладает межгенной областью (IG) фага f1, родственного фагу M13. В присутствии фага-помощника M13 происходит чтобы убратьпреимущественнаяводяной знак. упаковка образовавшейся в результате репликации одноцепочечной плазмиды в

фаговые частицы M13.

Этот документ был отредактирован с Активируйте

Карта векторной ДНК бактериофага λ-EMBL

PDF•Editorа – расположение генов на хромосоме; б – шкала длины хромосомной ДНК в процентах от длины l-ДНК и т.п.о.; в – участок генома, замещаемый на клонируемый чтобы убратьфрагментводяной знак. ДНК соответствующего размера. S, B и R – сайты рестрикции SalGI, BamHI и EcoRI

соответственно

Этот документ был отредактирован с Активируйте

Космиды

Космиды представляют собой небольшие плазмиды, в которые in vitro введены cos-сайты ДНК фага λ;

Это означает, что последовательность нуклеотидов λ- ДНК, расположенная между двумя cos-сайтами, может быть замещена in vitro на аналогичный по длине (38–52 т.п.о.) фрагмент чужеродной ДНК и эффективно упакована в фаговые частицы;

Колонии выращиваются на среде с антибиотиком, к которому у

чтобы убрать водяной знак.

бактерий имеется ген резистентности.

Этот документ был отредактирован с Активируйте

Фазмиды

Фазмиды представляют собой векторные молекулы ДНК, которые содержат в себе генетические элементы плазмид и хромосом бактериофагов. Они могут обладать емкостью в отношении клонируемой ДНК, характерной для λ-векторов, и существовать в определенных условиях в бактериальных клетках в

PDF Editor виде плазмиды или же упаковываться в фаговые частицы in vivo при изменении этих условий.

Примером фазмиды, как уже было сказано, является

чтобы убрать водяной знак.

вектор Bluescript M13+.

Этот документ был отредактирован с Активируйте