24. Что такое «чистые культуры» микроорганизмов и для чего их выделяют из объектов окружающей среды?

Чистой культурой микроорганизма называют культуру микроорганизмов одного вида, представленную потомством одной клетки. Для выделения чистой культуры используют, как правило, плотные питательные среды, на которых каждая клетка вырастает в виде изолированной колонии – потомства микроорганизмов, образовавшееся из одной клетки.

Выделение чистой культуры микроорганизма является основой бактериологической работы, т.к. чаще всего исследуемый материал содержит смесь различных видов микробов. Чистые культуры нужны для изучения свойств микроорганизмов и установления их видовой принадлежности. Кроме того, чистые культуры микроорганизмов (дрожжей, микроскопических грибов, молочнокислых, уксуснокислых, пропионовокислых и других бактерий) обладают промышленно ценными свойствами.

25. Каким образом создаются элективные условия при выделении накопительных культур микроорганизмов? Какие микроорганизмы можно выделить методом нагревания?

Элективные условия – условия, способствующие развитию одной культуры и ограничивающих развитие сопутствующих микроорганизмов. Обеспечить элективные условия для микроорганизмов можно только в том случае, если известны особенности обмена веществ выделяемого микроорганизма. Так как различные микроорганизмы используют разные источники питания, то элективные условия легче всего обеспечить, подбирая определенный состав питательных сред. Можно создать элективные условия, обеспечивая соответствующую температуру, рН, освещение и др.

Метод нагревания.

Применяют для выделения чистых культур споровых форм бактерий (бацилл, клостридий). В этом случае перед посевом исследуемый материал прогревают на водяной бане при температуре +75+85 0С в течение 20-30 мин. Вегетативные формы погибают во время прогревания, а споры микробов остаются живыми и при последующих высевах на плотную среду прорастают, формируя колонии.

26. По каким признакам описывают культуральные свойства микроорганизмов, выросших на плотных средах в чашках Петри?

1. Величина колонии: точечные (D – меньше 1 мм), мелкие (D – 1-2 мм), средние (D – 2-4 мм) и крупные (D – 4-6 мм и более).

2. Форма колонии – округлая, амебовидная, ризоидная.

3. Оптические свойства – прозрачная, матовая, флуоресцирующая, полупрозрачная (просвечивает), непрозрачная, блестящая.

4. Цвет – отмечают цвет колонии и выделение пигмента в среду.

5. Поверхность – гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая.

6. Профиль – плоский, выпуклый, кратерообразный, врастающий в агар и т.д.

7. Край колонии – ровный, волнистый, лопастной, ризоидный и др.

8. Структура колонии – однородная, мелко или крупнозернистая.

9. Консистенция – маслянистая, тестообразная, вязкая, пленчатая.

27. Перечислите основные этапы пересева микроорганизмов из пробирки в пробирку.

Пересев на плотные питательные среды в пробирках

• Пробирки с культурой и питательной средой помещают на два пальца левой руки в наклонном положении. В правой руке большим и указательным пальцем держат бактериальную петлю и стерилизуют в пламени горелки;

• Вынимают ватные пробки из обеих пробирок, прижимают их к ладони мизинцем и безымянным пальцами правой руки и обжигают края пробирок. Следят за тем, чтобы пробки не касались посторонних предметов;

• Петлю вводят в пробирку с пересеваемой микробной культурой. Осторожно, не касаясь стенок, отбирают каплю жидкой культуры. Если производят, пересев с косого слоя агара, то для охлаждения петли вначале следует прикоснуться к поверхности агара, где нет культуры, после чего берут небольшое количество микробной массы со скошенной питательной среды;

• Вводят петлю с материалом в пробирку со стерильной жидкой средой, стараясь не задевать стенок пробирки. При посеве на скошенные питательные среды петлю с клетками микроорганизмов опускают почти до дна, где скапливается небольшое количество конденсационной воды. Слегка касаясь петлей поверхности плотной среды, но не разрыхляя ее, проводят от дна вверх штрих;

• Петлю вынимают, обжигают края пробирок и внутренние концы пробок, после чего пробирки закрывают;

• Петлю вновь прокаливают в пламени горелки.