9. Способ определения активности штамма с указанием метода:

Штамм Staphylococcus aureus 113 характеризуется наличием антилизоцимной активности (АЛА), равной 10 мкг/мл.

Наличие и уровень антилизоцимной активности определялся согласно известному способу определения антилизоцимной активности (Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Малышкин А.П., Немцева Н.В. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1984. №2. С.27).

Суточную культуру S. aureus 113 выращивали на 1,5% мясопептонном агаре (питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой; НПО «Питательные среды», г. Махачкала) при 37°С. Готовили раствор лизоцима (ФАО «Ферейн», г. Москва): делали навеску лизоцима (5 мг), помещали в пробирку и добавляли 5 мл стерильного изотонического (0,85%) раствора хлорида натрия, получая исходную концентрацию лизоцима 1000 мкг/мл. Затем переносили 0,5 мл раствора в другую пробирку и добавляли 9,5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия, что позволяло получить концентрацию лизоцима 50 мкг/мл.

Далее готовили 10 пробирок, в которые вносили от 0,1 до 1,0 мл раствора лизоцима и добавляли физиологический раствор, доводя общий объем до 1 мл (за исключением последней пробирки) и получая концентрацию лизоцима в пробирках от 5 до 50 мкг/мл.

Затем в каждую пробирку добавляли 4 мл остуженного 1,5% питательного агара (разводили лизоцим в 5 раз) и, разлив в чашки Петри, получали концентрацию лизоцима от 1 мкг/мл до 10 мкг/мл. Застывшие чашки подсушивали в термостате в течение 20 мин, и на их поверхность бактериологической петлей засевали исследуемый штамм.

Чашки инкубировали сутки при 37°С, после чего выросшие колонии обрабатывали парами хлороформа в течение 10 мин, с этой целью вкладывали в крышки чашек кусочки бумаги ватман площадью 8-10 см², пропитанные 0,3-0,5 мл хлороформа.

Затем сверху на колонии наслаивали 3-4 мл полужидкого (0,7%) агара, смешанного с 0,1 мл взвеси суточной агаровой индикаторной культуры Micrococcus luteus (lysodeikticus) АТСС 15307. Мутность взвеси соответствовала 10 единицам оптического стандарта мутности (ГИСК им. Л.А. Тарасевича).

Через сутки инкубации в термостате при температуре 37°С проводили учет результата опыта по наличию роста микрококка на поверхности и вокруг колоний исследуемой культуры, инактивировавшей известную концентрацию лизоцима, внесенного в питательную среду.

В соответствии с указанной методикой за уровень антилизоцимной активности исследуемой культуры приняли максимальное значение концентрации лизоцима в среде, при которой еще наблюдается рост индикаторного штамма микрококка, равное 10 мкг/мл, и установили, что антилизоцимная активность штамма Staphylococcus aureus 113 составила 10 мкг/мл. Уровень антилизоцимной активности определяется по следующим критериям: 3 мкг/мл и менее - низкий, 4-6 мкг/мл - средний, 7-8 мкг/мл - высокий).

Согласно данным критериям новый штамм Staphylococcus aureus 113 обладает высокой антилизоцимной активностью, что позволяет использовать его в качестве тест-культуры для отбора антибактериальных средств, пригодных для борьбы с персистирующими патогенными стафилококками.

10. Способ, условия и состав сред для длительного хранения штаммов: Лиофильно высушенная культура при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 60% в течение 2 лет или культура, выращенная в течение суток при 37°С в пробирках с 0,3% МПА (рН 7,2-7,6) и залитых сверху стерильным вазелиновым маслом, в условиях бытового холодильника при температуре 4±2°С в течение 6 месяцев.