9. Сведения о безопасности использования штамма

Штаммы вида K. pneumoniae известны как возбудители заболеваний дыхательных путей: пневмонии, озены (поражение и атрофия слизистой оболочки носа и его придаточных пазух, сопровождающиеся выделением вязкого зловонного секрета), риносклеромы (поражение не только слизистой оболочки носа, но и трахеи, бронхов, глотки, гортани, при этом в пораженной ткани развиваются специфические гранулемы с последующим склерозированием и развитием хрящевых инфильтратов). Кроме того, клебсиеллы вызывают заболевания суставов, мозговых оболочек, позвоночника, глаз, мочеполовых органов, а также желудочно-кишечные заболевания, сепсис и гнойные послеоперационные осложнения. Клебсиеллы – возбудители внутрибольничных инфекций, заболеваний наворожденных. Они также вызывают маститы, сестицемии и пневмонии у крупного рогатого скота, свиней, лошадей и обезьян. Заражение клебсиеллами возможно как экзогенным, так и эндогенным путем. Наиболее частые пути передачи – пищевой, воздушнокапельный и контактно-бытовой. Факторами передачи чаще всего являются пищевые продукты (особенно мясные и молочные), вода, воздух.

10. Генетические особенности штамма:

Устойчивость (чувствительность) к антибиотикам, фагам и т.д: большая часть штаммов была нечувствительна к комбинациям ампициллин / клавуланат, тикарциллин / клавуланат и пиперациллин / тазобакт, а также к фторхинолонам, цефалоспоринам III и IV поколения и гентамицину, треть культур проявляла нечувствительность к амикацину

Паспорт штамма микроорганизма

(LACTOCOCCUS LACTIS)

1. Родовое и видовое название культуры: Lactococcus lactis в чистой культуре выделил Джозеф Листер в 1873 г.

2. Родословная штамма:

Домен: Bacteria

Тип: Firmicutes

Класс: Bacilli

Порядок: Lactobacillales

Семейство: Streptococcaceae

Род: Lactococcus

Вид: Lactococcus lactis

3. Культурально-морфологические особенности: Клетки сферические или овальные, 0,5 – 1,2х0,5 – 1,5 мкм, грамположительные, эндоспор не образуют, неподвижные, капсул не имеют. Консистенция однородная, вязкая. Цвет белый или слегка кремовый оттенок. Факультативные-анаэробы, хемоорганотрофы, метаболизм бродильного типа. Сбраживают углеводы с образованием в основном молочной кислоты, но не газа. Каталазо- и оксидазоотрицательные. Оптимальная температура для роста 30 ^оС. Растут при 10 ^оС, но не при 45 ^оС , не растут в присутствии 0,5% NaCl.

4. Способ получения: Обнаружены в молочных и растительных продуктах.

5. Область применения: Использование в процессе производства кисломолочных продуктов. входят в состав заквасок для кисломолочных напитков, творога, сметаны, кислосливочного масла, сыров с низкой температурой второго нагревания.

6. Продукт, синтезируемый бактериями: Молочная кислота.

7. Способ, условия и состав сред для длительного хранения: Питательная среда (на 1 л): 250 мл (100 г) молочная сыворотка (творожная, осветленная), 250 мл концентрированное гидролизованное молоко, 2 г КН₂РО₄, 2,5 г Na₂HPO₄, 0,12 г MgSO₄, 6 г лимоннокислый натрий, дистиллированная вода (до 1 л). Сухую сыворотку восстанавливают, раскисляют (25% NH₄OH) до рН=6,5, выдерживают в течение 20 минут. Затем фильтруют и вносят другие компоненты, размешивают, разливают в емкости и стерилизуют при t=117 °C (0,8 атм) в течение 40 минут, затем охлаждают до температуры 22 °С. В приготовленную питательную среду, находящуюся в ферментере в количестве 1 л, вносят 50 мл активизированной культуры Lactococcus lactis. После чего начинают процесс наращивания бактериальной биомассы, осуществляемый при температуре 22 °С, рН=7,0 в течение 14 часов. Затем биомассу центрифугируют, смешивают с защитной средой (обезжиренное молоко с желатином в соотношении 1:1), замораживают при температуре минус 30°С и сушат методом сублимации до массовой доли влаги в сухой биомассе не более 4%. После сушки биомассу во флаконах стерильно укупоривают или расфасовывают в герметичные упаковочные материалы. Хранят сухую стартерную культуру при температуре минус 18±2°С не более 6 месяцев.

8. Способ, условия и состав сред для культивирования: Культивируют на обезжиренном стерильном молоке или на плотных и жидких искусственных питательных средах с использованием гидролизованного молока и других питательных веществ, получаемых из молока.

Гидролизованное молоко готовят следующим образом. Обычное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или стерилизуют при 121 °С 10-15 мин и охлаждают до 45 °С. Устанавливают рН 7,6-7,8. К 1 дм3 молока добавляют 0,5-1,0 г порошка панкреатина или 2-3 г поджелудочной железы, пропущенной несколько раз через мясорубку (порошок панкреатина предварительно разводят в небольшом количестве теплой воды). Затем к молоку добавляют 5 см3 хлороформа. Колбу закрывают корковой пробкой, тщательно перемешивают и выдерживают в термостате при 40 °С в течение 18-24 ч. В течение 2-3 ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через 18-24 ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят в 2 раза водой, устанавливают рН 7,0-7,2 и стерилизуют при 121 °С 15 мин. Агар с гидролизованным молоком и мелом представляет собой гидролизованное молоко (основа), к которому добавляют 2 % агара и 2-3 % мела в виде тонкоизмельченного порошка. Среду стерилизуют при 121 °С 15 мин.

Дифференциальный агар Редди. Колонии Lactococcus lactis в результате образования кислоты вначале окрашиваются в желтый цвет, но позже, по мере образования аммиака из аргинина, они приобретают лилово-фиолетовый цвет.

9. Оптимальные условия и состав среды для ферментации: Лактококки растут в средах с низким значением рН - от 5,5 до 8,8, некоторые - при рН 2,9-3,2. Характерным свойством молочнокислых стрептококков и палочек является высокая спиртоустойчивость. Они могут развиваться на питательных средах, содержащих 15-18 % этилового спирта, реже - 24 %.

10. Сведения о безопасности использования штамма: Штамм является генетически модифицированным. Lactococcus lactis считается оппортунистическим патогеном низкой вирулентности. Тем не менее, его заболеваемость среди людей и животных в последние годы увеличивается.

11. Генетические особенности штамма: Отдельные штаммы Lac. lactis синтезируют бактериоцин низин, обладающий антагонистической активностью по отношению к большинству грамположительных бактерий (стафилококков, микрококков, бацилл, клостридий, лактобактерий и др.). На грам отрицательные бактерии низин не оказывает ингибирующего влияния. Низин используется в консервной промышленности для подавления развития спорообразующих бактерий.