Микра (экз)

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

−кишечные;

−воздушно-капельные, или респираторные;

−трансмиссивные;

−инфекции кожных покровов

2. По биологической природе возбудителя все инфекционные заболевания:

–бактериальные инфекции;

–вирусные инфекции;

–грибковые инфекции;

–протозойные инфекции.

3. По числу возбудителей, вызывающих инфекционное заболевание:

–моноинфекции;

–смешанные (ассоциированные)

–микст инфекции.

4. По длительности течения инфекционные заболевания:

–острые;

–хронические;

5. По происхождению возбудителя инфекционные заболевания:

−экзогенные;

−эндогенные, включая аутоинфекцию

Экзогенная инфекция – это инфекция, возбудителями которой являются микроорганизмы, поступающие из окружающей среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека или микробоносителя

Эндогенная инфекция − инфекция, возбудителями которой являются микроорганизмы − представители собственной нормальной микрофлоры человека. Она часто возникает на фоне иммунодефицитного состояния человека.

Аутоинфекция − разновидность эндогенной инфекции, которая возникает в результате самозаражения путем переноса возбудителя из одного биотопа в другой. Например, из полости рта или носа руками самого больного на раневую поверхность.

6. В зависимости от источника, т.е. резервуара возбудителя:

–Сапронозные инфекции − заболевания, основным местом обитания и размножения возбудителей которых являются объекты окружающей среды, откуда они и попадают в организм человека.

*К таким инфекциям можно отнести заболевания, вызванные легионеллами, синегнойной палочкой и др.

–Антропонозные инфекции − заболевания, при которых единственным источником возбудителя является человек.

*К ним относятся менингококковая инфекция, дизентерия, холера, дифтерия, гонорея, сифилис, гепатит B, эпидемический сыпной тиф, эпидемический возвратный тиф и др.

–Зоонозные инфекции − заболевания, при которых единственным источником возбудителя являются животные

*К ним относятся туляремия, бруцеллез, бешенство.

–Зооантропонозные инфекции − заболевания, при которых источником являются животное и больной человек (в том числе и трупы умерших).

*К ним относятся чума, сибирская язва, туберкулез, риккетсиозы.

7. По распространенности различают

–эндемические заболевания (регистрируются на строго определенных территориях)

–эпидемические заболевания, распространенные на различных территориях.

8. По тяжести течения инфекционного заболевания

–легкие

–средней тяжести

–тяжелые

9. По локализации возбудителя в макроорганизме:

–очаговые – микроорганизмы локализуются в местном очаге и не распространяются по организму (например, ангина, фурункулез);

–генерализованные – возбудитель распространяется по организму лимфогенным или гематогенным путем (например, сепсис)

61

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

Наиболее тяжелой формой генерализованной инфекции является сепсис, который характеризуется размножением возбудителя в крови, и как правило, тяжелым течением заболевания, т.к. почти всегда развивается на фоне резкого угнетения основных механизмов защиты. Сепсис отличается от бактериемии, тем, что при бактериемии кровь выполняет только транспортную роль, а размножения в ней возбудителя, как при сепсисе, не происходит. При сепсисе, как правило, происходит возникновение вторичных очагов гнойного воспаления в органах. Это состояние часто называют септико-

пиемия.

ИСМП – инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи

•В период госпитализации пациента (ВБИ)

•В амбулаторно-поликлинических учреждениях

•В других организациях, осуществляющих медицинскую деятельность, в т.ч. на дому, СМП

•Инфекции у медперсонала, связанные с проф. деятельностью

Возникает только при наличии 3 звеньев инфекционного процесса:

▪Источник – пациенты, персонал, инструментарий, аппаратура, предметы ухода, медикаменты

▪Пути передачи – контактный, фекально-оральный, воздушно-капельный, воздушно-пылевой.

▪Входные ворота инфекции – дыхательные пути, пищеварительный тракт, мочеполовые пути, кожа и слизистые, кровь

▪Восприимчивый хозяин – организм, имеющий слабую сопротивляемость

Причины возникновения ИСМП:

▪Недостаток стерилизационного оборудования

▪Дефицит моющих и дезинфицирующих средств

▪Не соблюдение правил асептики и антисептики

▪Не соблюдение гигиены рук

▪Нарушение правил дезинфекции и стерилизации

▪Несвоевременная изоляция больных и долечивание в стационаре

33. Патогенность, вирулентность бактерий, факторы вирулентности. Экзо- и эндотоксины.

Известно, что подавляющее большинство микроорганизмов не может вызвать инфекцию.

По способности вызывать инфекцию микроорганизмы делят на 3 группы:

—сапрофиты – это те, которые не способны вызывать инфекцию;

—патогенные микроорганизмы — это те, которые всегда вызывают инфекцию;

—условно патогенные микроорганизмы – это те, которые способны вызывать инфекцию, но только при определенных условиях, и, в первую очередь, при снижении антимикробной резистентности макроорганизма.

Патогенные и условно-патогенные микроорганизмы в отличие от сапрофитов обладают патогенностью, т.е. потенциальной, генетически обусловленной способностью проникать в макроорганизм, размножаться в нем и вызывать ответную реакцию организма.

*Патогенность — это видовой признак, т.е. признак, присущий всем бактериям данного вида. Это качественная характеристика, стойкий признак.

Для того, чтобы патогенный микроорганизм мог вызвать инфекционную болезнь, он должен обладать еще одной характеристикой − вирулентностью − способностью не только проникать в макроорганизм, размножаться в нем, но и подавлять его защитные механизмы, следствием чего и является развитие инфекционной болезни.

*Вирулентность − признак не видовой, как патогенность, а штаммовый, т.е. присущ не всему виду, а конкретным штаммам.

Вирулентность можно также определить, как фенотипическое проявление патогенного генотипа микроорганизмов. Как количественный признак вирулентность, в отличие от качественного − патогенности, имеет единицы измерения. Она измеряется количеством, т.е. дозой микроорганизмов, вызывающих определенный биологический эффект. Это могут быть:

▪ DCL (dosis certae letalis) — это абсолютно летальная доза − минимальное количество возбудителя, которое вызывает гибель 100% взятых в опыт лабораторных животных

62

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

DLM (dosis letalis minima) — это минимальная летальная доза − минимальное количество возбудителя, вызывающее гибель 95% взятых в опыт лабораторных животных

LD 50 — это минимальное количество возбудителя, вызывающее гибель 50% взятых в опыт

лабораторных животных (используется для измерения вирулентности наиболее часто) Вирулентность является лабильным признаком. Она может изменяться как в сторону повышения,

так и снижения, как in vitro, так и in vivo. При максимальном снижении вирулентности патогенные микроорганизмы могут стать авирулентными, т.е. невирулентными, но вирулентные микроорганизмы − всегда патогенны.

*Вирулентность реализуется через ряд последовательных процессов взаимодействия микробных клеток с клетками и тканями макроорганизма. Это:

•адгезия − способность прикрепляться к клеткам;

•колонизация − способность размножаться на их поверхности;

•инвазия − способность проникать в клетки и подлежащие ткани; и образование биологически активных продуктов, в том числе токсинов

Для осуществления колонизации и инвазии, многие бактерии выделяют ферменты агрессии и защиты:

1)нуклеазы;

2)протеазы – разрушение антител;

3)лецитовителлаза - лецитиназа, разрушает клеточные мембраны;

4)плазмокоагулаза - способствует образованию фибриновых барьеров;

5)антифагин - липополисахарид, оказывающий токсическое действие на фагоциты;

6)фибринолизин (стрептокиназа) - протеолитический фермент, растворяющий коагулированную плазму;

7)гиалуронидаза - фермент, гидролизующий гиалур. кислоту (основной компонент соединительной ткани)

8)нейраминидаза - отщепляет от различных гликопротеидов, гликолипидов, полисахаридов сиаловую (нейраминовую) кислоту, повышая проницаемость различных тканей

Кроме ферментов агрессии и защиты, микроорганизмы, размножаясь, могут вырабатывать специфические биологически активные вещества, повреждающие клетки и ткани макроорганизма –

токсины.

По своим свойствам токсины условно делятся на 2 группы:

1.Эндотоксины – ЛПС, термостабильны, продуцируются Гр (-) бактериями, обладают общетоксическим действием, слабые АГ, не переходят в анатоксин

2.Экзотоксины – белки, термолабильны, продуцируются Гр (+) бактериями, обладают специфичностью действия, сильные АГ, при спец. обработке переходят в анатоксины.

Взависимости от прочности их связи с микробной клеткой подразделяют на:

•Полностью секретируемые в окр. среду – собственно экзотоксины

•Частично секретируемые (несекретируемые)

Наиболее значимыми для медицинской практики продуцентами экзотоксинов являются возбудители дифтерии, ботулизма, столбняка, газовой гангрены, некоторые виды стафилококков и стрептококков среди грамположительных бактерий, а среди грамотрицательных - холерный вибрион, некоторые виды псевдомонад (Ps.aeruginosa), шигелл (Григорьева-Шига).

34. Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, их характеристика.

Основной задачей микробиологической диагностики инфекционных заболеваний является установление их этиологической природы. Эта задача решается:

либо путем выделения из исследуемого материала микроба-возбудителя, или обнаружения его антигенов или нуклеотидных последовательностей в материале;

либо выявлением образующихся в ходе развития инфекционного заболевания иммунологических изменений или антител, или сенсибилизированных Т-лимфоцитов.

63

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

Результаты многих диагностических исследований по обнаружению возбудителей в исследуемом материале в значительной степени зависят от их вида, времени и способа взятия патологического материала. Характер этого материала определяется клиническими особенностями заболевания. Это должны быть те субстраты или биологические жидкости, в которых на данной стадии заболевания наиболее вероятно присутствие возбудителей. Собранный материал следует как можно быстрее доставить в лабораторию или сохранять его в таких условиях, которые в максимальной степени обеспечивали бы сохранение жизнеспособности возбудителей. При исследовании биологических субстратов, которые в норме не содержат микробов (кровь, спинномозговая, плевральная или синовиальная жидкости), обнаружение в них при первичной микроскопии нативных и окрашенных препаратов бактерий имеет большое диагностическое значение и порой играет решающую роль для предварительного диагноза, назначения и проведения адекватной терапии, следовательно, для более корректного лечения заболевания.

Несколько общих требований, касающихся любого вида исследуемого материала:

▪Его забирают в достаточном количестве, которое обеспечивало бы необходимый объем исследования;

▪Материал должен соответствовать заболеванию и взят из очага поражения (мазок со слизистой глубины носовых ходов, а не ноздрей; средняя, а не начальная порция мочи; мокрота, а не слюна; гной из расположенного в глубине тканей очага поражения, а не из отверстия свища (фистулы); отделяемое из глубины раны, а не с ее поверхности)

▪Его забирают, используя только стерильные инструменты и посуду, но не содержащую дезинфицирующие вещества, с соблюдением правил асептики, чтобы предупредить загрязнение исследуемого материала посторонней микрофлорой

▪Собранный материал доставляют в лабораторию и исследуют в максимально сжатые сроки. Если хранение и транспортировка длятся более 24 часов и в тех случаях, когда микроорганизмы не стабильны вне организма, для сохранения их жизнеспособности используют поддерживающие (транспортные) среды

▪Материал для исследования берут по возможности до начала лечения противомикробными препаратами.

Если взятие, хранение и транспортировка материала выполнены медперсоналом правильно, микроорганизмы в нем сохраняются, а их численность снижается незначительно.

Обнаружение возбудителя в исследуемом материале можно осуществить тремя группами мето-

дов

1.БАК-исследование

2.Серодиагностика

3.Аллергическая диагностика

Классическое бактериологическое (вирусологическое, микологическое) исследование

Это так называемый “золотой стандарт” микробиологической диагностики.

Алгоритм бактериологического (вирусологического, микологического) исследования складывается из следующих основных этапов:

первичная микроскопия (необязательный);

первичный посев для выделения чистой культуры;

накопление чистой культуры;

изучение комплекса биологических свойств выделенной культуры и ее идентификация. Целью БАК исследования является выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация

Первый день бак исследования:

Первичная микроскопия. Результат первичной микроскопии дает ориентировочное представле-

ние о наличии в клиническом материале различных морфологических форм микроорганизмов, а также позволяет провести их первичную идентификацию по морфологическим и тинкториальным свойствам и осуществить выбор сред для первичного посева.

Первичный посев. Исследуемый материал после первичной микроскопии ил без нее (фекалии, моча, мазок из носа и зева, кровь), засевают на соответствующие среды, для выделения чистой культуры:

1)сахарный бульон, кровяной агар – для стрептококков

2)ЖСА, кровяной агар – для стафилококков

3)среда Эндо – для бактерий семейства Enterobacteriaceae

64

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

4)МПА – для Гр(-) бактерий

5)МПА (посев по методу Шукевича) – для выделения протея

6)среда Китта-Тароцци – для выделения анаэробов

7)среда Сабуро – для выделения грибов

Посев является первым этапом бактериологического исследования (если не проводится первичная микроскопия).

Посев осуществляется следующим образом:

1)Посев штрихом с обжигом петли. Материал забирают прокаленной и остуженной бактериологической петлей и штрихом густо засевают верхнее поле чашки. Далее петлю опять прокаливают и вносят в густо засеянный сектор и проводят 2-3 вертикальные линии по всей чашке. После этого чашку переворачивают, густо засеянный сектор остается на нижнем поле чашки. Петлю опять прокаливают и посев разносят по чашке 2-3 горизонтальными штрихами.

2)Посев шпателем. Материал наносят на поверхность среды шпателем или пипеткой, а затем шпателем рассеивают по всей поверхности.

3)Посев тампоном. Для посева тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в питательную среду.

4)Посев по секторам. При таком посеве дно чашки расчерчивают на секторы, посев проводят штриховыми движениями от края чашки к центру и по секторам.

Второй день бак исследования:

1.Проводят учет роста на питательных средах (рост однородный; рост неоднородный);

2.Проводят описание культуральных свойств

Алгоритм описания колоний

В результате роста на питательной среде образуются колонии (потомки одной клетки). Отбирают изолированные колонии и изучают их – это второй этап исследования, направленный на изучение культуральных свойств бактерий. Эти свойства необходимы для идентификации полученной чистой культуры, так как каждому виду м/о при росте на определенной питательной среде соответствует определенные культуральные свойства.

Колонии изучают:

1)макроскопически – невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете

2)микроскопически – при малом увеличении сухой системы микроскопа

Впроходящем свете изучают:

•величину колоний (крупные, средние, мелкие, карликовые)

•форму колоний (правильная, неправильная, круглая)

•прозрачность колоний (прозрачная, непрозрачная)

•окраску колоний (желтые, красные, бесцветные и т.д.) – определяется способностью синтезировать пигмент.

Вотраженном свете:

•определяют цвет (бесцветные или окрашенные)

•характер поверхности (гладкая, бугристая, блестящая, шероховатая)

•высоту колоний над поверхностью среды (вдавленная, плоская, возвышающаяся)

Микроскопически:

•край (ровный, неровный);

•структура (гомогенная, негомогенная).

Изучение колоний заканчивается приготовлением мазка, окраской его по методу Грама и микроскопией. При взятии материала из колонии для приготовления мазка оценивается ее консистенция (мягкая, слизистая, сухая).

Если при микроскопии культура оказалась чистая, то ее пересевают на скошенный агар для накопления.

Третий день бак исследования:

1)Описание характера роста колоний на скошенном агаре

•однородный, неоднородный

•по штриху, сплошной, сливной

2)Подтверждение чистоты накопленной культуры

65

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

Готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Если накоплена чистая культура, то она подвергается дальнейшей идентификации. Идентификация бактерий до рода и вида основана на изучении особенностей метаболизма – биохимическая идентификация и антигенного строения – серологическая идентификация.

3) Изучение биохимических свойств Биохимические свойства – это способность бактерий расщеплять те или иные субстраты за

счет продукции соответствующих ферментов. Для изучения биохимических свойств используют дифференциально-диагностические среды, содержащие различные субстраты (пестрый ряд). В их состав входят среды Гисса с углеводами, лакмусовое молоко, желатин, среды с аминокислотами, МПБ с индикаторами на сероводород и индол.

Сахаролитические свойства изучают на средах Гисса. В их состав входит пептонная вода, субстрат – углевод (различные моно- и полисахариды), многоатомные спирты и индикатор.

Если у бактерий есть ферменты, расщепляющие субстрат-углевод, то они выделяют продукты метаболизма (кислоту или кислоту и газ) и индикатор меняет цвет среды. При образовании газа регистрируется разрыв среды.

Протеолитические свойства – изучаются при посеве на желатин и лакмусовое молоко. Если у бактерий есть протеазы, то желатин разжижается. В молоке появляется сгусток кремового цвета, а над ним жидкость – пептонизация молока (за счет того, что протеазы бактерий расщепляют казеин молока до пептона)

Пептолитические свойства. Чаще бактерии способны расщеплять промежуточные продукты распада белков – пептоны. Продукты этог процесса – амины (индол), аминокислоты, газы (сероводород, аммиак, углекислый газ). Их можно обнаружить индикаторной бумаги:

•лакмусовая (для выявления аммиака)

•смоченная щавелевоуксусной кислотой (для выявления индола)

•смоченная ацетатом свинца (для выявления сероводорода)

Продукты дезаминирования и декаробоксилирования аминокислот обнаруживают с помощью тест-полос, изменяющих свой цвет при изменении рН среды.

Четвертый день бак исследования:

1)Учет результатов биохимических тестов. После того, как культура идентифицирована до вида, у нее изучают ряд дополнительных признаков, таких как чувствительность к антибиотикам, токсигенность, наличие факторов вирулентности, плазмидный профиль, а также проводят внутривидовую дифференцировку.

2)Серологическая идентификация. Результаты биохимической идентификации являются основанием для проведения серологической идентификации. Серологическая идентификация выделенной культуры проводится в реакции агглютинации на стекле с помощью соответствующих иммунных адсорбированных сывороток, выбор которых определяется результатами биохимической идентификации.

Внутривидовая дифференцировка – это определение принадлежности штамма к тому или иному фаговару, бактериоциногеновару, бактериоциновару, биовару, резистовару и т.д. Она позволяет выявлять эпидемиологические связи между штаммами одного вида.

ПЦР (метод полимеразной цепной реакции)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы.

Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи

66

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С.

ПЦР — это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

ВПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д.

Впервую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧинфекция и т.д.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами иссле-

дований заключается в следующем:

▪возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в т.ч. и материале, получаемом при биопсии;

▪возможна диагностика инфекционных болезней на самых ранних стадиях заболевания;

▪возможность количественной оценки результатов исследований (сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);

▪высокая чувствительность метода; например, чувствительность ПЦР для выявления ДНК вируса гепатита В в крови составляет 0,001 пг/мл (приблизительно 4,0.102 копий/мл), в то время как метода гибридизации ДНК с использованием разветвленных зондов - 2,1 пг/мл (приблизительно 7,0.105 копий/мл).

Серодиагностика

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие АГ и АТ. Серологические реакции используются в 2х направлениях:

1. Обнаружение с диагностической целью АТ в сыворотке крови обследуемого. В этом случае из

2х компонентов реакции (АТ, АГ) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными АГ. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови АТ, гомологичных применяемому АГ; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых. Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой в начале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания АТ. При вирусных инфекциях лишь 4хкратное и большее повышение титра АТ во 2ой сыворотке имеет диагностическое значение.

С внедрением в практику метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных АТ, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (IgM и IgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики. При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно АТ, относящиеся к IgM. Лишь позднее, на 8-12 день после попадания АГ в организм, в крови начинают накапливаться АТ иммуноглобулинов класса G. При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и АТ класса А (IgA), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неиз-

вестным компонентом реакции является АГ. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.

Серологические исследования не обладают 100% чувствительностью и специфичностью в отношении диагностически инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с АТ, направленными к АГ других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, в также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.

В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических АТ к возбудителям различных инфекционных заболеваний.

67

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

Авидность – характеристика прочности связи специфических АТ с соответствующими АГ. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-АТ, а несколько позже и специфические IgG-АТ. IgG-АТ обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают АГ. Затем развитие иммунного процесса постепенно (это м/б недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgGАТ, более прочно связывающихся с соответствующими АГ. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-АТ при различных инфекционных заболеваниях. Высокая авидность специфических IgG-АТ позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности АТ класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информация, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или ее планировании.

ИЗ ШУБА (НИЖЕ)!!!

Это метод диагностики, целью которого является обнаружение в сыворотке обследуемого антител и нарастания их титра (количества).

▪Для его реализации используют различные реакции иммунитета как простые (агглютинация и ее разновидности), так и сложные (РСК, ИФА и др.).

Нарастание титра антител, т.е. их инфекционная природа, устанавливается при исследовании

парных сывороток.

* Так называют сыворотки, взятые от одного больного в разные сроки болезни с интервалом 5-7 дней.

При исследовании сыворотки любого человека в ней можно обнаружить антитела различного происхождения - инфекционные, постинфекционные, нормальные, поствакцинальные.

Концентрации трех последних различны, но на протяжении достаточно длительных промежутков времени титр их находится на одном и том же уровне или постепенно снижается. При инфекционных заболеваниях в связи с размножением возбудителей нарастает антигенное раздражение. В ответ на это в сыворотке возрастает количество инфекционных, связанных с заболеванием, антител. Таким образом, титр инфекционных антител нарастает в динамике заболевания, при этом абсолютно не важно, в каком количестве обнаруживаются специфические антитела при первом исследовании.

Серологический метод диагностики применяют с конца первой, начала второй недели заболе-

вания. Для осуществления серологических реакций, т.е. взаимодействия антител с антигеном, при серодиагностике для обнаружения искомого антитела к сыворотке прибавляют известный антиген - или микроорганизмы, вызвавшие их образование, или их компоненты, обладающие иммуногенностью. В качестве известного антигена для серодиагностики используются разнообразные анти-

генные диагностикумы.

▪обычные диагностикумы – представляют собой взвесь убитых микроорганизмов или их отдельных АГ

▪эритроцитарные диагностикумы – взвесь эритроцитов, на которых адсорбированы МО или их АГ.

Вдиагностическом варианте можно использовать почти все указанные для иммуноиндикации реакции иммунитета, но меченными радиоизотопами, флюорохромами должны быть антигены, а не антитела.

Отличие диагностического варианта ИФА будет также заключаться в использовании не антимикробной иммунной меченной ферментом сыворотки, а меченной ферментом антиглобулиновой сыворотки, воспринимающей человеческие антитела в исследуемой сыворотке как антигены.

Кроме того, для оценки напряженности антитоксического иммунитета при дифтерии и скарлатине раньше использовали реакция токсиннейтрализации in vivo (в организме здорового человека). Отсутствие гиперемии (местного действия токсина) через 24 часа после введения (в/к 1/40 DLM) токсина Шика (дифтерийный) или Дика (скарлатинозный) говорит о нейтрализации их антитоксинами, т.е. антителами против бактерийных и некоторых других токсинов, и в конечном счете о наличии антитоксического иммунитета. В настоящее время эти реакции не применяются, а для

68

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

оценки напряженности антитоксического иммунитета и отбора контингента для ревакцинации при дифтерии используется РПГА с дифтерийным антигенным анатоксическим диагностикумом.

Аллергическая диагностика

При многих инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности к повторному введению возбудителя или продуктов его жизнедеятельности. Такое состояние назы-

вается инфекционной аллергией.

▪Инфекционная аллергия развивается при туберкулезе, туляремии, бруцеллезе, сапе, сифилисе, сибирской язве, токсоплазмозе, паротите, простом герпесе и ряде других инфекций.

▪Она может длительно (годами) сохраняться и после выздоровления.

▪Для выявления инфекционной аллергии применяют аллергические диагностические пробы. При их постановке строго в/к вводят соответствующий аллерген. Наличие гиперемии и инфильтрата указывает на положительный результат реакции, т.е. наличии инфекционной аллергии.

▪Аллергические диагностические пробы используют для диагностики туберкулеза (реакция Манту), бруцеллеза (проба Бюрне), туляремии (проба с тулярином), сибирской язвы (проба с антраксином), мягкого шанкра (реакция Дюкрея), проказы (реакция Мицуды). Последняя позволяет даже дифференцировать туберкулоидную (лепромин-положительную) форму проказы от лепроматозной (лепромин-отрицательной).

▪Положительная кожная аллергическая проба указывает, что введение аллергена при поста-

новке пробы является повторным, т.е. индивидуум в прошлом имел контакт с микробным агентом.

▪Здесь сказывается основной недостаток диагностической ценности кожно-аллергических проб, т.к. они могут быть положительными не только у инфицированных, но и у привитых против этих болезней, а также у лиц, переболевших много лет назад, в том числе и у носителей, т.е. положительный тест у здоровых лиц указывает только на контакт, осуществленный в прошлом, с микробным антигеном.

▪Истинное диагностическое значение при определении природы заболевания имеет только переход от отрицательной кожной пробы к положительной, который происходит в течение болезни. Кроме того, вираж реакции, т.е. увеличение выраженности ее проявления при повторном исследовании, также служит основанием для более детального обследования на инфицированность данным возбудителем.

▪При приеме кортикостероидных гормонов, иммунодепрессантов, саркоидозе, болезни Ходжкина и других опухолях учет результатов постановки аллергических проб затруднен, потому что в этих случаях наблюдается явление называемое анергия, т.е. значительное снижение общей кожной реактивности.

*Более того, при появлении сыпи у детей, когда ребенок переносит одно из таких заболеваний как корь, ветряная оспа, также может наблюдаться состояние анергии, и при постановке в этот период пробы Манту туберкулиноположительный ребенок может стать временно туберкулиноотрица-

тельным, т.е. получается ложноотрицательный результат.

▪Наиболее широко используются в скрининг - обследовании широких слоев населения на инфицированность этими возбудителями следующие аллергические диагностические пробы.

Проба Манту с туберкулином при туберкулезе (положительна - 5 ТЕ ≥10мм)

Проба Бюрне с бруцеллином - появляется к концу 1 месяца и сохраняется годамиПроба с антраксином при сибирской язве - появляется с первых дней болезни и положительна

в течение многих лет после выздоровления

Проба с тулярином при туляремии - появляется с 3-5 дня после инфицирования и сохраняется годами

Положительная реакция Дюкрея при мягком шанкре появляется с 8 дня заболевания и может сохраняться годами

35. Острые кишечные заболевания. Характеристика. Классификация.

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа острых инфекционных заболеваний, которые характеризуются различными этиологическими факторами (вирусы, бактерии и т.д.), имеют сходный

69

Ответы на экзаменационные вопросы по Микробиологии

путь и механизм передачи, а также характеризуются общностью клинико-морфологических проявлений.

острые кишечные инфекции имеют широкое распространение.

путь передачи в основном фекально-оральный или контактно-бытовой.

они локализуются в основном в кишечнике.

это группа этиологически полиморфных заболеваний, возбудители которых принадлежат к различным группам микроорганизмов: бактериям, вирусам, простейшим.

все бактериальные и вирусные инфекции имеют сходные клинические формы в виде гастроэнтероколитов, но их специфика различна.

патогенные микроорганизмы дают отдельные характерные нозологические формы кишечных инфекций: холера, брюшной тиф. Условно-патогенные микроорганизмы обладают общей симптоматикой, и сходны по клиническим проявлениям.

1.Протозойные кишечные инфекции: лямблиоз, амебиаз, криптоспоридоз.

2.Вирусные кишечные инфекции: ротавирусы, вирус Норволка, некоторые серо-вары аденовирусов, энтеровирусы (семейства пикорнавирусов), в том числе вирус гепатита А и вирус гепатита

Е

3.Бактериальные кишечные инфекции:

Представители семейства Enterobacteriaceae – прямые, Гр (-), оксидазо (-), неспорообразующие палочки, факультативные анаэробы.

Род Shigella – антропонозное заболевание дизентерия

Род Salmonella – антропонозное заболевание тифы и паратифы, и зооантропонозное заболевание сальмонеллез.

Серогруппа Escherichia coli – эшерихиоз

Род Yersinia – иерсиниоз.

Условно-патогенные бактерии Род Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Citrobacter – вызы-

вают пищевые токсикоинфекции

Представители семейства Vibrionaceae – род Vibrio – слегка изогнутые Гр (-), оксидазоположительные палочки, неспорообразующие, аэробы.

Вид V.cholerae серогруппы О1, 0139 – возбудители холеры, другие условно-па-тогенные представители вызывают – диарею

Представители семейства Campylobacteraceae – род Campylobacter – извитые Грам «-»,

оксидазоположительные палочки, неспорообразующие, микроаэрофилы.

Вид Campylobacter jejuni, Campylobacter coli – зооантропонозное заболевание кампилобакетриоз.

Представители семейства Bacillaceae – род Bacillus – Грам «+», спорообразую-щие анаэробные палочки.

Вид B.cereus – вызывают диарею

Представители семейства Clostridiaceae – род Clostridium - Грам «+», спорооб-разующие анаэробные палочки.

Вид Clostridium botulinum – вызывает ботулизм

Условно-патогенный вид Clostridium difficile – антибиотикоиндуцированный эн-доген- ный псевдомембранозный колит.

Представители семейства Staphylococcaceae – род Staphylococcus – Грам «+»

S. aureus – стафилококковый пищевой токсикоз.

Антибиотикассоциированные диареи АБ-ассоциированное поражение кишечника – один или более эпизодов неоформленного стула,

развившихся на фоне применения АБ, т.е. ААПК можно рассматривать как проявление дисбактериоза, когда на фоне резкого уменьшения представителей НМ идет усиленные размножение других м\о.

Clostridium difficile – ведущий возбудитель нозокомиальных кишечных инфекций – энтеритов, колитов, псевдомембранозных колитов (ПМК), возникновение которых связано с неадекватным приемом антибиотиков.

Морфологические свойства:

Гр (+) спорообразующий анаэроб, продуцирующий два сильнодействующих токсина — токсин А-энтеротоксин и токсин В-цитотоксин; действие токсинов синергическое.

70