2. Реакция нейтрализации в геле по Оухтерлони.

Эту реакцию ставят для выявления токсигенности чистых культур дифтерийных бактерий (Corynebacterium diphtheriae), выделяемых от больных и бактерионосителей.

Для реакции необходимы:

• антитоксической противодифтерийной сыворотка (АТ);

• предположительно экзотоксин С. diphtheriae (неизвестный АГ).

Методика реакции:

- диск или полоску, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой (АТ) накладывают на поверхность агара, залитого в чашку Петри;

- с одной стороны засевают штамм, токсигенности которого необходимо проверить;

- с другой стороны засевают чистую культуру, которая не выделяет экзотоксин (то есть в лабораториях изначально хранятся чистые культуры, о которых знают, что они не синтезируют экзотоксины);

- посев оставляют в термостате на сутки; проводят учёт результатов.

Если культура является токсигенной, то между полоской бумаги и растущей культурой образуются белые линии преципитации в результате встречной диффузии антител-антитоксинов и продуцируемого культурой токсина.

3. Реакция обратной непрямой гемагглютинации (ронга).

Для реакции необходимы:

• эритроцитарный диагностикум, содержащий:

- взвесь эритроцитов;

- известные антитела, адсорбированные на эритроцитах.

• исследуемый материал - культуральная жидкость.

• физ. раствор

Реакцию ставят на 96-луночном полистероловых планшете. В лунки вносят двукратные разведения культуральной жидкости от 1:8 до 1:512 в объеме 0,1 мл, а затем в каждую лунку добавляют эритроцитарный диагностикум. Далее инкубируют в течение 2 часов.

Контроли:

- культуральная жидкость токсигенного штамма (положительный контроль 1);

- культуральная жидкость нетоксигенного штамма (отрицательный контроль 2);

- контроль 3 - контроль эритроцитарного антительного диагностикума.

Интерпретация результатов аналогична РНГА. Определяют титр токсина - максимальное разведение культуральной жидкости, которое вызывает формирование "зонтика".

4. Реакция нейтрализации антител (рнат) - разновидность ронга.

Для реакции необходимы:

• исследуемый материал - культуральная жидкость, которая, возможно, содержит дифтерийный токсин (определяемый антиген);

• противодифтерийная антитоксическая стандартная сыворотка (известные антитела);

• эритроцитарный антигенный диагностикум, нагруженный дифтерийным токсином.

Культуральную жидкость двукратно разводят в физиологическом растворе и добавляют в лунки. Далее в каждую лунку вносят противодифтерийную сыворотку. После получасовой инкубации в лунки вносят эритроцитарный диагностикум и инкубируют ещё 2 часа. В РНАТ ставят контроли: положительный и отрицательный контроли с культуральной жидкостью заведомо токсигенного и нетоксигенного штаммов, контроль эритроцитарного антигенного диагностикума и контроль антитоксической сыворотки совместно с эритроцитарный антигенным диагностикумом.

Если культуральная жидкость содержит токсин, то он связывает специфические антитела антитоксической сыворотки, и добавленный позже эритроцитарный диагностикум, нагруженный тем же токсином, не вступит в реакцию и гемагглютинация не произойдёт - "пуговка". Определяют титр токсина - максимальное разведение изучаемой культуральной жидкости, которое вызывает формирование "пуговки".

🦠РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА.