Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Ответы_к_экзамену_структурная_биохимия.docx
Скачиваний:
11
Добавлен:
03.11.2024
Размер:
9.86 Mб
Скачать

9. Методы изучения структуры белков.

Изучение структуры белков — это понимание их функций и роли в живых системах. Для этой цели используется широкий спектр методов, которые позволяют определить как первичную, так и пространственную структуру белковых молекул.

Секвенирование белка (определить последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи. основан на химическом расщеплении белка на отдельные аминокислоты и их последующем анализе с помощью хроматографии или масс-спектрометрии)

Генетическое секвенирование( использует информацию о генетическом коде для определения последовательности аминокислот в белке. Он основан на секвенировании ДНК или РНК, кодирующих белок.)

Рентгеноструктурный анализ (основан на дифракции рентгеновских лучей на кристаллах белка. Полученные дифракционные картины анализируются для восстановления трехмерной структуры белка.)

ЯМР-спектроскопия (использует ядерный магнитный резонанс (ЯМР) для изучения взаимодействий между атомами в белке. Данные ЯМР-спектроскопии могут быть использованы для определения трехмерной структуры белка в растворе)

Криоэлектронная микроскопия (использует электронную микроскопию для получения изображений белковых молекул, замороженных при низких температурах. Затем эти изображения используются для восстановления трехмерной структуры белка.)

Моделирование (использует компьютерные программы для предсказания трехмерной структуры белка на основе его первичной структуры и известных структур похожих белков)

Гомология моделирования (использует известные структуры похожих белков для построения модели нового белка.)

Спектроскопия в видимой и ультрафиолетовой областях (используется для изучения характеристик поглощения света белковыми молекулами)

Электрофорез ( использует электрическое поле для разделения белков по размеру и заряду)

Комбинация методов используется комбинация экспериментальных и вычислительных методов для более полного и точного изучения структуры белка.

10. Методы очистки и идентификации белков.

Очистка и идентификация белков — выделение изучаемого белка из сложной смеси и определение его свойства.

Дифференциальное центрифугировани (разделении белков по размеру и плотности с помощью центрифугирования)

Хроматография (разделении белков по различным свойствам, таким как размер, заряд, гидрофобность и сродство к специфическим лигандам.) Существуют разные типы хроматографии:

Электрофорез (разделении белков по размеру и заряду с помощью электрического поля.)

Иммунопреципитация (использовании специфических антител для выделения желаемого белка из смеси)

Идентификация белков — это процесс определения типа белка, выделенного из смеси. Основные методы идентификации белков:

Масс-спектрометрия ( измерении отношения массы к заряду белковых ионов. По полученным данным можно определить молекулярную массу белка и сопоставить ее с базами данных для идентификации белка.)

Секвенирование пептидов (определении последовательности аминокислот в пептидах, полученных в результате расщепления белка. Полученная последовательность аминокислот сравнивается с базами данных для идентификации белка.)

Иммуноблотинг (использовании специфических антител для обнаружения и идентификации белка на мембране после электрофореза.)

Иммунофлюоресцентная микроскопия (использует флуоресцентные антитела для визуализации белка в клетках или тканях.)