Бут день 3
.docxНаціональний університет біоресурсів і природокористування України
Кафедра епізоотології, мікробіології і вірусології
Ессе з дисципліни “Вірусологія”
Тема: «Отримання клітинної культури та вивчення на ній ЦПД віруса»
Виконала: студентка 2 курсу 5 групи факультету ветеринарної медицини
Бут О.В.
Викладач:
Яблонська Оксана Валентинівна
Київ – 2021
Клітинна культура - система клітин, що отримується з тканини, знаходиться у вигляді шару клітин, прикріплених до скла, або у вигляді суспензії. Найбільш практичне застосування отримали одношарові культури
первинно-трипсинізованих клітин і ліній клітин, що перевиваються.
Суть методів при приготуванні первинних культур тканин полягає в
руйнуванні міжклітинної тканини і роз'єднуванні клітин для подальшого
отримання моношару. Роз'єднування клітин проводиться шляхом дії на
тканину протеолітичних ферментів (трипсину).
Для культивування культури клітин застосовують синтетичні живильні середовища - 199, Ігла, Хенкса, Ерла. Зміна живильного середовища
проводиться через 2-3 дні.
Первинні (трипсинізовані) культури клітин - у яких міжклітинні
зв'язки руйнують ферментами (трипсином, панкреатином) і отримують
моношар клітин на склі.
Що перевиваються (стабільні):
а) нормальні (ПКБ - нирки барана; СМЦ - серце мавпи циномольгус);
б) пухлинні - Hela - рак шийки матки; Hep - 1 - епідермоїдний рак гортані; Дейтройт 6 - кістковий мозок хворого на рак легені.
Про наявність вірусу в зараженій культурі клітин можна судити за цитопатичною дією (ЦПД) - патологічними змінами морфології клітин, аж до їх загибелі, що виникають в результаті репродукції вірусів, і спостерігаються під мікроскопом:
1. Дегенерація клітин (округлення, зміна форми, руйнування);
2. Поява включень (Ліпшются - вірус герпесу; Гварнієрі - вірус натуральної віспи і тілець Бабеша-Негрі - вірус сказу);
3. Руйнування пласта клітин (параміксовіруси);
4. Утворення гігантських багатоядерних клітин - симпластів (вірус
кору).
5. Утворення «негативних колоній», або «бляшкоутворення» - обмежені ділянки зруйнованих вірусами клітин у суцільному моношарі культури клітин. Вони видні неозброєним оком у вигляді світлих плям натлі забарвленого моношару живих клітин. Додавання агару в живильне середовище обмежує розповсюдження вірусів по всьому моношару після виходу їх із зруйнованої клітини і забезпечує взаємодію вірусів тільки з сусідніми клітинами. Кожна «бляшка» утворюється потомством одного віріона.
Віруси можуть викликати розвиток у клітині деструктивних
процесів двома шляхами.
1. Цитопатична дія ззовні. Цитотоксичну дію можуть викликати позаклітинні віріони чи навіть окремі їх компоненти.
2. Цитопатична дія зсередини. Деструкція клітин прямо чи
опосередковано пов'язана з проникненням і функціонуванням у ній
геному вірусу.
Причини ЦПД вірусів можна поділи на такі:
порушення нормальної життєдіяльності клітин у результаті механічного пошкодження клітинних структур вірусними компонентами (дефекти цитоплазматичної мембрани, які виникають у результаті проникнення чи виходу вірусів із клітини);
руйнування лізосом і вихід їх ферментів у цитоплазму (автоліз клітин);
виснаження білкових та енергетичних ресурсів клітин за рахунок переключення клітинних ферментів і білоксинтезуючого апарату на синтез вірусоспецифічних компонентів;
специфічне ушкодження вірусом клітинних молекул.
За терміном виникнення ЦПД поділяють на ранню та пізню. Рання ЦПД виявляється в перші години після інфікування (від 3 год після інфікування клітинних культур вірусом), спричиняється дією структурних елементів вірусів. У цей період ще не відбулося проникнення вірусу в клітину. Даний тип ЦПД морфологічно виявляється в порушенні клітинного моношару, заокругленні клітин, відокремленні їх від скла. Пізня ЦПД виявляється, коли вірус (чи його геном) потрапляє в клітину й зазвичай на кінцевих стадіях репродукції вірусів у клітині.
Список використаної літератури: 1) http://repo.knmu.edu.ua/bitstream/123456789/21533/1/%D0%9F%D0%A0%D0%9E%D0%A2%D0%9E%D0%9A%D0%9E%D0%9B%D0%AB_%D0%A3%D0%9A%D0%A0_%D0%92%D0%86%D0%A0%D0%A3%D0%A1%D0%9E%D0%9B%D0%9E%D0%93%D0%86%D0%AF_%D0%A72.pdf
2) https://biology.univ.kiev.ua/images/stories/Kafedry/Virusol/Library/ViralInfection.pdf
3) https://ela.kpi.ua/bitstream/123456789/22186/1/%D0%9B%D0%90%D0%91_%D0%A0%D0%9E%D0%91%D0%9E%D0%A2%D0%98_%D0%A7%D0%90%D0%A1%D0%A2%D0%98%D0%9D%D0%90_3.pdf