Бут вірус лаб 13

Лабораторна робота №13

Тема: реакція дифузійної преципітації у агаровому гелі.

Мета: опанувати методику  проведення реакції дифузійної преципітації у агаровому гелі.

Хід роботи:

1. Опанування методику  проведення реакції дифузійної преципітації у агаровому гелі.

РДП заснована на здатності до дифузії в гелях антитіл і розчинних антигенів і відсутності такої здатності у комплексу антиген + антитіло. Комплекс антиген + антитіло утворюється при контакті диффундирующих назустріч один одному гомологічних антигену і антитіла, Він осідає на місці освіти в товщі гелю у вигляді смуги преципітації.

Дифузією називається проникнення молекул однієї речовини між молекулами іншого, обумовлене тепловими рухами молекул. Дифузія можлива в газах, рідинах, твердих тілах і гелях. У лабораторній практиці дуже часто використовують агаровий гель.

Білки вірусів можуть бути і у вигляді вільних молекул, що утворюються в результаті деструкції віріонів і (або) руйнування клітин, в яких вони утворилися. Це так звані розчинні антигени. Вони здатні до дифузії в агарових гелі.

Методика постановки РДП в гелі полягає в тому, що в шарі агарного гелю роблять кілька поглиблень (лунок) і в них наливають антигени і сироватки так, щоб антиген і сироватка були в сусідніх лунках. З лунок антигени і сироватки починають дифундувати в шар гелю. Дифузія направлена на всі боки від кожної лунки. У просторі між лунками, що містять антиген і сироватку, останні дифундують назустріч один одному (подвійна дифузія і гелі). Якщо вони виявляться гомологічними, то утворюється комплекс антиген + антитіло, який до дифузії не здатний внаслідок більших розмірів. Він осідає на місці утворення у вигляді білуватої смуги преципітації, яка добре помітна на тлі прозорого гелю. Якщо ж дифундуючі один одному назустріч антиген і сироватка будуть негомологічних, смуги преципітації не утворюється.

У ветеринарній практиці РДП часто використовують для діагностики лейкозу великої рогатої худоби та інфекційної анемії коней. В обох випадках завдання зводиться до виявлення в сироватках крові антитіл до відповідних вірусів.

РДП може бути поставлена в чашках Петрі, на предметних стеклах і в капілярах. Найбільш широке застосування в практиці знайшов метод постановки РДП на предметних стеклах. Для його здійснення необхідно мати знежирені предметні скельця, градуйовані піпетки на 2-5 мл і пастерівські піпетки; трубку діаметром близько 5 мм з гострими краями або спеціальний штамп, вологу камеру, учнівське перо або інший інструмент, придатний для вилучення агарного гелю з лунки, 1,0-1,5% -ний агар на фізіологічному розчині або фосфатному буфері з рН 7,2 -7,4, антигени, сироватки.