Бут вирус лаб 4

Лабораторна робота 4

Тема: виявлення віріонів і внутрішньоклітинних тілець-включень у патологічному матеріалі.

Мета: ознайомитись із внутрішньоклітинними тільцями-включеннями, методами їх виявлення, охарактеризувати їх значення у лабораторній діагностиці. Хід роботи: 1) Ознайомитися з природою тілець-включень.

У патологічному матеріалі хворих і загиблих тварин за багатьох вірусних хворобах виявляють тільця-включення, природа яких може бути різною залежно від виду вірусу:

1) скупчення віріонів потомства;

2) нагромадження вірусних білків, що не увійшли до складу віріонів потомства;

3) клітинний матеріал, змінений у результаті репродукції вірусу.

Здебільшого тільця-включення є вірусними «фабриками» – місцями синтезу вірусних білків і нуклеїнових кислот та складання віріонів потомства, включаючи клітинні структури (наприклад, рибосоми, осміофільні волокна). Значна частина ідентифікованих тілець-включень отримали назви на честь авторів, які вперше виявили їх: сказ – тільця Бабеша – Негрі, натуральна віспа – тільця Гварнієрі, віспа птиці – тільця Боллінгера, інфекційний ларинготрахеїт птиці – тільця Зейфреда (також МейГрюнвельд-Гімзе), чума м’ясоїдних – тільця Лентца, інфекційний гепатит м’ясоїдних – тільця Рубарта.

2) Опанувати методи виявлення тілець-включень за допомогою різних методів фарбування.

Для виявлення тілець-включень готують мазки або відбитки (посмертно або прижиттєво), фарбують різними спеціальними методами забарвлення і проводять мікроскопію. Крім спеціальних способів забарвлення для тілець-включень різних вірусів розроблені універсальні методи, наприклад, забарвлення гематоксилин- еозином. Здатність до фарбування, розміри, форма, структура і місце розташування в клітині тілець-включень специфічні у різних вірусів. Для деяких вірусних хвороб виявлення тілець-включень настільки специфічно, що дозволяє судити про вид інфекції і має значення для постановки діагнозу (сказ). У більшості випадків це лише допоміжний метод діагностики вірусних інфекцій. Існує багато методів забарвлення мазків, мазків-відбитків.

Найпоширенішим є метод забарвлення по Морозову. Мазки сушать на повітрі, поміщають в вертикальному положенні в дистильовану воду на 10-15 хвилин і фарбують. Для цього на фіксований мазок на 1-2 хвилини наносять рідину Руге, потім промивають дистильованою водою. Наносять протраву на 1-2 хвилини, нагріваючи до відходження парів, знову промивають. Дофарбовують розчином аміачного срібла при легкому підігріванні. Розглядають препарат в імерсійній системі. Елементарні тільця на світло - коричневому тлі препарату мають вигляд темно - чорних дрібних зерен, утворень.

Фарбування за Романовським—Гімзою. Цим методом забарвлюють елементарні тільця Пашена, Боллінгера та інші.

Мазки-відбитки висушують на повітрі, фіксують 3-5 хв. метиловим спиртом або 10-15 хв. в суміші ефіру зі спиртом (1: 1). Потім їх занурюють в розчин фарби Романовського. 1 краплю основного розчину фарби змішують з 1 мл дистильованої води. Фарбування проводять на предметному склі, в спеціальних ванночках або чашках Петрі методом підливання фарби під препарат, фарбують 30-40 хвилин, потім мазок промивають, висушують фільтрувальним папером, сполоскують спиртом, знову промивають і висушують. При мікроскопії на блакитному тлі препарату елементарні тільця Пашена будуть червоні, а тільця-включення - темно-фіолетові.

Фарбування за Муромцевим. Найчастіше застосовується для виявлення тілець-включень Бабеша-Негрі при сказі.

Мазки фіксують в метиловому спирті 3-5 хвилин, теплою сумішшю спирту з ефіром навпіл. Фіксуючі рідини не мають негативного впливу на якість фарбування протягом 2-3 тижнів, тому їх зберігають в фіксуючій рідині. Після фіксації мазок промивають в дистильованій воді і занурюють на 10 хвилин в синьку Мансона (100 мл дистильованої води додають 5-8г бури, 2 грами кристалічної метиленової сині, яку розбавляють дистильованою водою 1:40). Непромитий мазок витримують в 10% розчині таніну до переходу кольору мазка з синьо-фіолетового в світло-блакитний. Потім мазок промивають водою, висушують фільтрувальним папером. Мазок дивляться без покривного скла. Цитоплазма нервових клітин світло-блакитного кольору, ядра клітин сині, тільця Бабеша-Негрі рожево-фіолетові або червоні з темними включеннями.

Фарбування за Міхіним. Мазки фіксують в фіксуючій рідини, висушують фільтрувальної папером і забарвлюють 30-40 хвилин фарбою Романовського, розведеною 1:10. Потім мазки промивають підкисленим спиртом (1 крапля крижаної оцтової кислоти на 30 мл 96 спирту), а потім водою. Мазки висушують фільтрувальним папером і проводять мікроскопію. Фон мазка повинен бути фіолетово рожевий, нервові клітини блакитного кольору, ядра клітин темно-фіолетові, а тільця Бабеша-Негрі рожево-червоні з точковими включеннями темно-синього кольору.