Глава 7. МЕТОДЫ АРАХНО-ЭНТОМОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
На человеке и животных паразитирует большое количество членистоногих. Сбор их может быть осуществлен как с живого организма, так и с трупа. Кровососущих членистоногих можно также найти в природе.
Сбор наружных паразитов (клещей, блох, вшей, власоедов и др.)
чаще всего проводят с трупов. С диагностической целью осматривают и живых животных. Для сбора эктопаразитов внимательно осматривают наружный покров животного (шерсть, перья, чешую, кожу). Следует помнить, что такие насекомые, как блохи, быстро покидают остывающий труп животного. Поэтому при полевых сборах каждое добытое животное нужно помещать в плотные матерчатые мешки и прочно завязывать. Перед изучением животного нужно внимательно осмотреть упаковочный материал, обращая внимание в первую очередь на швы и углы мешков. Можно даже подержать мешок в парах хлороформа или эфира несколько минут и потом хорошо вытряхнуть ткань на белый лист бумаги. Всех паразитов помещают в 70 % спирт. Только после этого, вооружившись тонким пинцетом, приступают к исследованию покровов животных. Вши, власоеды и клещи не обладают значительной подвижностью, поэтому их легко снять с покровов животных. Блох и мух-кровососок приходится разыскивать, раздвигая перья или шерсть. Клещей, присосавшихся к коже, нужно осторожно извлечь, стараясь не повредить хоботка. После этого шерсть рекомендуется тщательно вычесать частым гребнем. На лошадях в районе путового сустава хорошо заметны яйцекладки желудочных оводов. Собранные яйца паразитов, прикрепленные к перу или шерсти, а также самих паразитов следует поместить в пробирку с 70 % спиртом. На коже иногда имеются расчесы. Это может быть последствием паразитирования различных клещей. Струпья и корочки с расчесов также необходимо собирать в спирт. В пробирку кладут этикетку с обозначением вида хозяина, даты и места сборов.
Сбор эндопаразитов. Во время вскрытия можно обнаружить личинок двукрылых насекомых — желудочных, полостных и подкожных оводов, вольфартовых мух. Их осторожно, по возможности вместе с субстратом нужно перенести в спирт или 4 % формалин. В последнем случае препарат необходимо фиксировать в расправленном состоянии. На внутренних органах птиц могут быть найдены паразитарные узелки, содержащие клещей. В носовой полости хищников можно обнаружить пятиусток. Их так же помещают в спирт.
Сбор кровососущих клещей в природе. Иксодовые клещи в природе встречаются все теплое время года. С наступлением теплых весенних дней голодные клещи выбираются из зимних убежищ и начинают нападать на человека и животных. На зимовку они уходят поздней осенью. Пик напа-
170
дения на людей и животных приходится на весну – начало лета. В более южных регионах это происходит еще и осенью. Для сборов используют приспособления — флажок, волокуша, пропашник.
Флажок — кусок светлой ткани (марля, фланель), размером 80 × 40 см, прикрепленный к метровой палке узкой стороной. Полотнище протаскивают по земле и периодически осматривают и собирают прицепившихся клещей. Если к такому полотнищу прибивают две палки по узким сторонам, проводя затем сбор двумя руками, то количество собираемых клещей увеличивается.
Волокуша — кусок светлой фланели длиной 1 м и более, к узкой стороне которого прикрепляется палка, к концам которой привязывают веревки. Волокушу тянут за веревку по местности и периодически осматривают.
Пропашник — кусок фанеры 50 на 35 см; его обтягивают марлей и прибивают косо к ручке. Пропашник проводят по траве вертикально, касаясь ребром почвы. Этим способом собираются также нимфы и личинки. Собранных клещей либо сохраняют живыми, либо помещают в 70 % спирт, не забывая об этикетках. Аргасовых клещей собирают в местах их обитания (норах, курятниках, хлевах). Эти клещи могут долго голодать, поэтому они хорошо сохраняются живыми в пробирках или колбочках.
Сбор кровососущих насекомых в природе. В теплое время года со-
брать кровососов не составляет труда. Комары, слепни, мухи жигалки, мокрецы, мошки иногда сильно досаждают человеку и животным. Поэтому на такую экскурсию необходимо вооружиться сачком и эксгаустером. Эксгаустер — небольшая баночка, которая закрывается корковой или резиновой пробкой. В пробку вставляют 2 стеклянные трубочки, а к трубочкам присоединяют пластиковые трубки (особенно удобно от капельниц). При сборе мелких насекомых такой прибор незаменим. Конец одной пластиковой трубки подносят к сидящему насекомому, а через другую трубку резко всасывают ртом воздух и добыча оказывается в банке. Зимой комаров можно обнаружить в подвалах, пещерах и других укрытиях. Личинки кровососов по большей части живут в воде. Личинки комаров находятся у поверхности стоячих водоемов, мошек — на дне быстрых речек, слепней — в почве около водоемов. Мухи кровососки иногда нападают и на человека, но большую часть сборов этих насекомых дает наружный осмотр теплокровных животных. Всех мелких кровососов лучше сразу помещать в 70 % спирт, а крупных лучше накалывать на энтомологические булавки.
ПРЕПАРИРОВАНИЕ ЧЛЕНИСТОНОГИХ
Для изготовления пригодных к определению препаратов применяют специальные методики. Членистоногих хранят либо в спирте, либо в сухом виде (на булавках и вате), либо в виде микропрепаратов (тотальных или анатомических).
171
Обработка щелочью. Все членистоногие, из которых предполагается изготовить микропрепараты, должны быть обработаны щелочью. Этим достигается их прозрачность. Исключение составляют мелкие клещи. Есть два способа обработки — горячий и холодный. Во всех случаях используют 10 % КОН. Перед обработкой членистоногое обязательно отмывают от спирта в воде около 15 минут. Затем под увеличением бинокуляра прокалывают или осторожно прорезают брюшко для лучшего проникновения реактивов в тело объекта. Прокол или надрез нужно делать так, чтобы не повредить систематически важные признаки. При горячем способе подготовленных членистоногих переносят в небольшой тигель с раствором щелочи и кипятят до тех пор, пока покровы не станут прозрачными. Иксодовых клещей варят дольше, чем насекомых. Во многих руководствах кипячение рекомендуют проводить в пробирке, однако, как показывает опыт, из пробирки щелочь часто выплескивается. Кроме того, для кипячения лучше использовать электроплитку, а не спиртовку. В общем, кипячение длится от 2 до 10 минут. После кипячения членистоногих отмывают в 2–3 сменах воды. Воду можно даже слегка подкислить. Холодным способом обрабатывают более нежных членистоногих — мелких двукрылых, их личинок, власоедов, клещей. Обработка проводится в растворе щелочи той же концентрации, только без нагрева. Время обработки увеличивается и занимает от 2 часов до 2 суток. Объекты так же отмываются в воде.
Обезвоживание и просветление, заключение в канадский бальзам.
В результате обработки щелочью получается прозрачная хитиновая оболочка. Ее после промывания переносят в 96 % спирт на 10 минут, в 100 % на 5 минут для обезвоживания и в карбол-ксилол для просветления на 3–5 минут. После карбол-ксилола членистоногих до заделки в бальзам можно держать в иммерсионном (гвоздичном) масле. В масло объекты можно переносить и из абсолютного спирта. Заделка в бальзам проводится обычным способом.
Для обезвоживания и просветления мелких членистоногих иногда используют хлорал-фенол, который представляет собой смесь двух весовых частей хлоралгидрата и одной части фенола, выдержанную в термостате до расплавления. В этот состав можно помещать свежий материал, а так же спиртовой, сухой, без обработки щелочью. Через час членистоногие просветляются и их обычным способом заделывают в канадский бальзам.
Использование гуммиарабиковой смеси. При работе с мелкими клещами используют смесь Фора–Берлизе. В нее входит 200 г хлоралгидрата, 30 г гуммиарабика (растертого в порошок), 50 мл воды, 20 г глицерина. Измельченный гуммиарабик высыпается в воду и помещается в термостат до полного растворения. Далее прибавляют хлоралгидрат и глицерин. Состав выдерживают около суток в термостате и фильтруют. В литературе приводятся и другие прописи гуммиарабиковых смесей. На предметное
172
стекло наносят каплю этой смеси и в нее помещают живых или отмытых от спирта клещей. Препарат накрывают покровным стеклом. Через некоторое время клещи хорошо просветляются и становятся пригодными для определения.
Использование глицерин-желатина. Для препаратов членистоногих можно использовать и глицерин-желатин (о его приготовлении см. выше). Для этого объект, обработанный щелочью и отмытый в воде, переносят на 1–2 дня в глицерин, а затем расправляют его на покровном стекле. На предметное стекло наносят небольшой кусочек глицерин-желатина, расплавляют над электроплиткой и накрывают покровным стеклом с объектом. После застывания покровное стекло нужно окантовать лаком или канадским бальзамом.
ХРАНЕНИЕ МИКРОПРЕПАРАТОВ
Все микропрепараты нужно хранить в защищенном от пыли месте. Глицерин-желатиновые препараты обычно хранят в коробках. Там они располагаются вертикально (на ребре). Такой способ хранения абсолютно недопустим для бальзамных препаратов. Со временем бальзам начнет вытекать из-под покровного стекла и переделка такого препарата не всегда удается. Поэтому препараты, приготовленные на канадском бальзаме, нужно хранить в горизонтальном положении в специальных папках или на препаратных подносах в коробках. Гуммиарабиковые препараты нужно хранить в горизонтальном положении. Все препараты обязательно должны иметь этикетки.
173