Добавил:

cantacuzene Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Предмет:

Санитарная и медицинская микробиология

Файл:

Опера о чуме (учебник)

Скачиваний:

Добавлен:

21.05.2024

Размер:

34.29 Mб

Скачать

☆

<<< < Предыдущая 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 5051 / 6251 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 > Следующая >>>

	– определение чувствительно-
	сти к антибиотикам (диско-
	диффузионный метод).
72–96 ч	Патологоанатомическое					иссле-	Наличие	характер-
	дование		павших	биопробных			ных для чумы из-
	животных (подкожное зараже-						менений	у живот-
	ние)*, приготовление и про-						ных, характерные Г-
	смотр мазков-отпечатков. Посев						бактерии в мазках-
	из органов и крови на чашки с						отпечатках → пред-
	сульфитом натрия и генциан-						варительный		поло-
	виолетом		(и	в	бульон).		жительный		ответ
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-						(подтверждение).
	ганов и его учёт.
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
5 сутки	Просмотр посевов из органов.						Наличие типичных
	Учёт	результатов		идентифика-			признаков чумного
	ции	культур (ферментативная					микроба. Если та-
	активность и т. д.).						ковых нет, то за-
							ключение	не	дают
							(дожидаются		ре-
							зультатов	следую-
							щего этапа).
5–	Патологоанатомическое					иссле-	Наличие	характер-
8 сутки	дование		павших	биопробных			ных для чумы из-
	животных (накожное зараже-						менений	у живот-
	ние)*, приготовление и про-						ных, характерные Г-
	смотр мазков-отпечатков. Посев						бактерии в мазках-
	из органов и крови на чашки с						отпечатках → пред-
	сульфитом натрия и генциан-						варительный		поло-
	виолетом		(и	в	бульон).		жительный		ответ
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-						(подтверждение).
	ганов и его учёт.
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
8 сутки	Эвтаназия и патологоанатоми-						Положительный
или	ческое исследование не павших						ответ.
позднее	биопробных животных, приго-
	товление		и просмотр			мазков-

500

отпечатков. Посев из органов и крови на чашки (и в бульон). ПЦР/LAMP с суспензиями органов и его учёт.

Суммарные критерии отрицательного ответа:

1.отсутствие специфического роста культуры на питательных средах при посеве нативного материала и органов от биопробных животных;

2.отрицательные тесты;

3.отсутствие сероконверсии в парных сыворотках больного (в случае живого человека)

Материал от трупов с признаками разложения (в том числе трупы грызунов, обнаруженные в очаге)

1–2 ч Микроскопия образца.

Посев на плотные питательные среды с сульфитом натрия и генцианвиолетом* или селективные среды;

*Костный мозг сеют отдельно; целесообразно дублировать пробы (использовать среды с различным содержанием генцианвиолета).

Биопроба (подкожно, накожно).

ПЦР/LAMP (в том числе с бактериофагом).

МФА.

РНГА с антительным и РНАт с антигенным диагностикумами / ИФА на обнаружение антигена

(FI/FV).

Наличие в мазках Г- палочек типичных для чумного мик-

роба* → подозрение на чуму (исследование продолжается).

*Следует учитывать склонность кишечных микроорганизмов к биполярному окрашиванию!

Наличие специфического свечения на МФА → предварительный положительный ответ.

Положительный результат ИХА →

предварительный

положительный

501

ответ

(подтвержде-

ние).

3–6 ч

Учёт

результатов

ПЦР, РНГА,

Положительный

РНАт, РНАг, ИФА.

результат → предва-

рительный

положи-

тельный

ответ

(подтверждение).

18–48 ч

Просмотр

посевов,

микроско-

Наличие типичных

пия подозрительных колоний и

для чумного

мик-

их

пересев

обязательно

на

роба колоний, ха-

плотные

питательные среды

рактерного роста на

сульфитом натрия и генциан-

бульоне,

положи-

виолетом, а также без них для

тельного результата

выделения

чистой

культуры,

ИХА → сообщение о

постановка ИХА, пробы с бак-

росте

культуры

териофагом

определение

чумного

микроба

чувствительности к антибиоти-

(исследование

про-

кам*.

должается).

*Если культуры мало, то ограничи-

ваются только её накоплением.

Подтверждение

Постановка пробы с бактерио-

антигенурии

→

фагом,

также

определение

предварительный

чувствительности к антибиоти-

положительный

кам.

ответ

(подтвержде-

Определение

антигенурии

ние).

биопробных животных.

Просмотр посевов во флаконы,

их микроскопия*.

*Если культуры на чашках мало, то

осуществляют

высев

культуры

из

флакона на чашки.

48-72 ч

Учёт пробы с бактериофагом, а

Положительный

также чувствительности к анти-

результат → предва-

биотикам (последнее к 72 часу).

рительный

положи-

После накопления чистой куль-

тельный

ответ

туры:

(подтверждение).

–морфология роста колоний и в бульоне;

–микроскопия + МФА;

502

–ИХА;

–тест на подвижность;

–проба с бактериофагом;

–реакция агглютинации;

–тест на ферментативную активность;

–тест на синтез FI (при 37°С);

–ПЦР/LAMP (в том числе с бактериофагом);

–определение чувствительности к антибиотикам (дискодиффузионный метод).

72–96 ч	Патологоанатомическое					иссле-	Наличие	характер-
	дование		павших	биопробных			ных для чумы из-
	животных (подкожное зараже-						менений	у живот-
	ние)*, приготовление и про-						ных, характерные Г-
	смотр мазков-отпечатков. Посев						бактерии в мазках-
	из органов и крови на чашки с						отпечатках → пред-
	сульфитом натрия и генциан-						варительный		поло-
	виолетом		(и	в	бульон).		жительный		ответ
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-						(подтверждение).
	ганов и его учёт.
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
5 сутки	Просмотр посевов из органов.						Наличие типичных
	Учёт	результатов		идентифика-			признаков чумного
	ции	культур (ферментативная					микроба. Если та-
	активность и т. д.).						ковых нет, то за-
							ключение	не	дают
							(дожидаются		ре-
							зультатов	следую-
							щего этапа).
5–	Патологоанатомическое					иссле-	Наличие	характер-
8 сутки	дование		павших	биопробных			ных для чумы из-
	животных (накожное зараже-						менений	у живот-
	ние)*, приготовление и про-						ных, характерные Г-
	смотр мазков-отпечатков. Посев						бактерии в мазках-
	из органов и крови на чашки с						отпечатках → пред-

503

	сульфитом натрия и генциан-				варительный	поло-
	виолетом	(и	в	бульон).	жительный	ответ
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-				(подтверждение).
	ганов и его учёт.
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
8 сутки	Эвтаназия	и патологоанатоми-			Положительный
или	ческое исследование не павших				ответ.
позднее	биопробных животных, приго-
	товление и просмотр мазков-
	отпечатков. Посев из органов и
	крови на чашки (и в бульон).
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-
	ганов и его учёт.

Суммарные критерии отрицательного ответа:

2.отрицательные тесты.

Трупы грызунов (отловленные и умерщвлённые) с выраженным комплексом патологоанатомических изменений, характерных для чумы

1–2 ч	Микроскопия	мазков-
	отпечатков.
	Посев паренхиматозных орга-
	нов, лимфатических узлов и
	костного мозга на плотные пи-
	тательные среды	с сульфитом
	натрия и генцианвиолетом или
	селективные среды;
	*Кровь из сердца во	флакон (5 мл в
	50 мл бульона).
	Биопроба (подкожное и на-
	кожное заражение мыши или
	дикого грызуна того же вида,

504

Наличие в мазках Г- палочек типичных для чумного мик-

роба → подозрение на чуму (исследование продолжается).

Наличие специфического свечения на МФА → предварительный положительный ответ.

	пойманных на данной террито-							Положительный
	рии и прошедших 30-дневный							результат		ИХА	→
	карантин).							предварительный
	ПЦР/LAMP (в том числе с бак-							положительный
	териофагом).							ответ	(подтвержде-
	МФА.							ние).
	РНГА с антительным и РНАт с
	антигенным диагностикумами /
	ИФА на обнаружение антигена
	(FI/FV).
2–6 ч	Учёт	результатов			ПЦР, РНГА,			Положительный
	РНАт, РНАг, ИФА.							результат → предва-
								рительный		положи-
								тельный		ответ
								(подтверждение).
18–48 ч	Просмотр		посевов,			микроско-		Наличие типичных
	пия подозрительных колоний и							для чумного мик-
	их	пересев		обязательно			на	роба колоний, ха-
	плотные питательные среды						с	рактерного роста на
	сульфитом натрия и генциан-							бульоне,		положи-
	виолетом, а также без них для							тельного результата
	выделения		чистой			культуры,		ИХА → сообщение о
	постановка ИХА, пробы с бак-							росте		культуры
	териофагом			и	определение			чумного		микроба
	чувствительности к антибиоти-							(исследование			про-
	кам*.							должается).
	*Если культуры мало, то ограничи-
	ваются только её накоплением.							Подтверждение
	Постановка пробы с бактерио-							антигенурии			→
								антигенурии			→
	фагом, а		также		определение			предварительный
								предварительный
	чувствительности к антибиоти-							положительный
								положительный
	кам.							ответ	(подтвержде-
								ответ	(подтвержде-
	Определение			антигенурии			у	ние).
								ние).
	биопробных животных.
	Просмотр посевов во флаконы,
	их микроскопия*.
	*Если культуры на чашках мало, то
	осуществляют			высев		культуры	из

505

	флакона на чашки.
48–72 ч	Учёт пробы с бактериофагом, а			Положительный
	также чувствительности к анти-			результат → предва-
	биотикам (последнее к 72 часу).			рительный	положи-
	После накопления чистой куль-			тельный		ответ
	туры:			(подтверждение).
	– морфология роста колоний и
	в бульоне;
	– микроскопия + МФА;
	– ИХА;
	– тест на подвижность;
	– проба с бактериофагом;
	– реакция агглютинации;
	– тест на ферментативную ак-
	тивность;
	– тест на синтез FI (при 37°С);
	– ПЦР/LAMP (в том числе с
	бактериофагом);
	– определение чувствительно-
	сти к антибиотикам (диско-
	диффузионный метод).
72–96 ч	Патологоанатомическое иссле-			Наличие характер-
	дование павших		животных	ных для чумы из-
	(подкожное заражение)*, при-			менений у	живот-
	готовление и просмотр мазков-			ных, характерные Г-
	отпечатков. Посев из органов и			бактерии в мазках-
	крови на чашки с сульфитом			отпечатках → пред-
	натрия и генцианвиолетом (и в			варительный		поло-
	бульон). ПЦР/LAMP с суспен-			жительный		ответ
	зиями органов и его учёт.			(подтверждение).
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
5 сутки	Просмотр посевов из органов.			Наличие типичных
	Учёт	результатов	идентифика-	признаков	чумного
	ции	культур (ферментативная		микроба. Если та-
	активность и т. д.).			ковых нет, то за-
				ключение не		дают
				(дожидаются		ре-
				зультатов	следую-

506

					щего этапа).
5–	Патологоанатомическое иссле-				Наличие характер-
8 сутки	дование	павших	биопробных		ных для чумы из-
	животных (накожное зараже-				менений у	живот-
	ние)*, приготовление и про-				ных, характерные Г-
	смотр мазков-отпечатков. Посев				бактерии в мазках-
	из органов и крови на чашки с				отпечатках → пред-
	сульфитом натрия и генциан-				варительный	поло-
	виолетом	(и	в	бульон).	жительный	ответ
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-				(подтверждение).
	ганов и его учёт.
	*Если животное пало раньше, то его
	вскрывают немедленно.
8 сутки	Эвтаназия и патологоанатоми-				Положительный
или	ческое исследование не павших				ответ.
позднее	биопробных животных, приго-
	товление и просмотр мазков-
	отпечатков. Посев из органов и
	крови на чашки (и в бульон).
	ПЦР/LAMP с суспензиями ор-
	ганов и его учёт.

Суммарные критерии отрицательного ответа:

2.отрицательные тесты

Трупы грызунов (отловленные и умерщвлённые) без патологоанатомических изменений, характерных для чумы, исследуют индивиду-

ально, в соответствии с конкретной эпидемиологической обстановкой и поставленными задачами. Это могут быть как исследование селезёнки с микроскопией отпечатков органов, их посевом и ПЦР/LAMP (а также постановкой иных молекулярно-генетических методов), так и полномасштабное обследование по приведённой выше схеме, в том числе постановка групповой биопробы.

507

Эктопаразитов и объекты окружающей среды, как правило, иссле-

дуют по схеме материала, свободного от посторонней микрофлоры.

38		ПОСЛЕСЛОВИЕ

	Продолжая	разговор о дифференциации Y. pestis от

Y. pseudotuberculosis, нельзя не упомянуть о таком методе, как время-

пролётная масс-спектрометрия с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS; matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry). Данный ме-

тод, предложенный1 в 1987 году Танáка Кóити2 (с колл.), заключается в воздействии импульсами лазерного излучения на смесь анализируемого вещества и матрицы – вещества, которое подбирается таким образом, чтобы понижать деструктивные свойства лазерного излучения на анализируемое вещество и способствовать его ионизации. После воздействия лазера матрица поглощает его энергию и передаёт веществу, в результате чего последнее десорбируется и ионизируется. Над поверхностью образуется так называемый факел (plume), состоящий из различных частиц (MALDI), из которых ионы далее, под действием электромагнитного тока, поднимаются к датчику по вакуумной трубке (TOF). Поскольку ионы имеют разное отношение массы к заряду (m/z), они регистрируются датчиком в разное время и с разной интенсивностью, что выражают графически. Обычно идентификацию бактерий проводят по белковым структурам путём исследования бактериальных колоний, однако в случае возбудителей особо опасных бактериальных инфекций используют инактивированные клетки или их белковые экстракты. Культуру чумного микроба культивируют на агаре Хоттингера в течение 24–48 часов при 28°С. Исследование проводят чаще всего на

1Tanaka K., Waki H., et al. Protein and polymer analyses up to m/z 100 000 by laser ionization time-of-flight mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 1988; 2(8):151– 153; DOI: 10.1002/rcm.1290020802.

2(Танака Коичи), р. 1959; японский инженер, электрик. Лауреат Нобелевской премии по химии (2002).

508

матрице из насыщенного раствора α-циано-4-гидроксикоричной кислоты (α-НССА) с 50%-ным содержанием ацетонитрила и 2,5%- ной трифторуксусной кислоты, применяя 40 импульсов лазера частотой 60 Гц (анализируемый диапазон m/z составляет 2000– 20000 Да). Полученные масс-спектры (Рис. 38.1) сравнивают с существующими в базе данных.

Рис. 38.1. Масс-спектры белковых экстрактов штамма Y. pestis (по Спицын А. Н., 2016)

509

<<< < Предыдущая 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 5051 / 6251 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 > Следующая >>>