555. Грибы, классификация, основные структурные компоненты, методы индикации.

Грибы – это эукариотические организмы, сочетающие в себе свойства как животных, так и растений.

Грибы (Fungi, Mycetes) – разнородная группа эукариотических микроорганизмов. Грибы представлены как одноклеточными, так и многоклеточными микроорганизмами. К одноклеточным грибам относят дрожжи и дрожжеподобные клетки неправильной формы, значительно крупнее по размерам бактерий. Многоклеточные грибы-микроорганизмы – это плесневые, или мицелярные грибы. Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами (рибосомы, митохондрии, ЭПС, аппарат Гольджи, лизосомы, хитосомы), цитоплазматическую мембрану и мощную клеточную стенку, состоящую из гликана, целлюлозы, хитина, белка, липидов и др. Грибы состоят из длинных тонких нитей – гиф, сплетающихся в грибницу, или мицелий. Гифы низших грибов – фикомицетов – не имеют перегородок. У высших грибов – эумицетов – гифы разделены перегородками; их мицелий многоклеточный.

*хитосомы – органелл, содержание фермент хитинсинтетазу, необходимый для синтеза хитина.

Грибы размножаются спорами, половым и бесполым способами, вегетативным путем (почкованием или фрагментацией гиф). Грибы, которые размножаются половым и бесполым путем, относятся к совершенным. Несовершенными называются грибы, у которых отсутствует половой путь размножения. Бесполое размножение у низших грибов происходит с помощью эндогенных спор, которые созревают в головке – спорангии, и экзогенных спор – конидий, которые формируются на концах плодоносящих гиф.

По строению мицелия грибы классифицируют на низшие и высшие грибы. К низшим грибам относятся следующие виды: Chrytidiomycetes, Hyphochrytidiomycetes, Oomycetes, Zygomycetes. К высшим – Ascomycetes, Basidiomycetes и Deuteromycetes.

Зигомицеты представлены быстрорастущим видами, обычно обитающими в почве. При культивировании in vitro образуют обильный сероватый или белый воздушный мицелий. Их гифы не имеют перегородок. Размножаются половым и бесполым путем. Бесполое размножение реализуется через образование спорангиофоров со спорангиями. Половое размножение приводит к образованию зигот – зигоспор. Возбудители микозов могут быть представлены родами Absidia, Mortierella, Mucor, Rhizopus, Entomophthora, Conidiobolus и Basidiobolus.

Аскомицеты получили свое название из-за наличия основного органа плодоношения – сумки, содержащей 4 или 8 гаплоидных половых аскоспор. Гифы имеют выраженные перегородки. Размножаются половым (через образование аскоспор) и бесполым (через формирование конидий) путем. К аскомицетам относят и дрожжи — одноклеточные грибы, утратившие способность образовывать мицелий. Возбудителям микозов человека выступают Pseudoattescheria boydii и представителей родов Geotrichum, Microsporum и Trichophyton.

Базидиомицеты имеют характерный орган спороношения – базидий. Последний состоит из вздутой терминальной клетки, расположенной на тонком стебле. На базидий путем мейотического деления развиваются, отшнуровываясь от него, базидиоспоры. Единственным патогенным для человека видом выступает Filobasidiella neoformans.

Дейтеромицеты не образуют настоящую филогенетическую группу, а выступают в качестве таксономической «свалки», куда помещают виды, у которых половая (совершенная) стадия размножения отсутствует либо не выявлена. Их классификация основана на формах спороношения или других внешних признаках и служит только практическим целям. Для них установленным считают лишь бесполое размножение, поэтому дейтеромицеты также известны как несовершенные грибы (Fungi imperfecti). По морфологическим признакам большинство дейтеромицетов сходно с аскомицетами. Большая часть возбудителей микозов человека входит в группу несовершенных грибов.

Грибы обладают выраженной сахаролитической активностью, поэтому их выращивают на специальных средах, содержащих углеводы: среда Субаро, сусло-агар, морковный агар. pH должна составлять 6,0-6,5.

Для роста грибам необходимы соли фосфора и серы, накопить большую биомассу грибов для промышленных целей позволяют добавки ионов меди, магния и натрия, витаминов: биотина, рибофлавина, тиамина.

Грибы растут в широком диапазоне температур (20-45 градусов), грибы, вызывающие заболевания человека, обычно культивируются при температуре 37 градусов.

Существует несколько методов индикации грибов, среди которых наиболее часто применяются следующие:

1) Окраска 10% едким калием. Метод используют в первую очередь для визуализации структур возбудителей во фрагментах кожи и ее придатках (ногти, волосы), в материале, отделяемом из очагов поражения и влагалища. В указанных образцах содержится большое количество клеток, в которых едкий калий разрушает кератин, оставляя неизмененными клетки грибов.

2) Окраска по Граму. Грибы являются грам+ микроорганизмами, поэтому окрашиваются в фиолетовый цвет.

3) Окраска мазка грибов по Гридли. Клетки грибов приобретают розово-пурпурный цвет на желтом фоне за счет лейкофуксина, фуксинового альдегида, метанилового желтого.

4) Окраска мазка грибов метенаминовым серебряным по Гомори. Метод включает предварительную обработку гистологических препаратов хромовой кислотой с последующим нанесением красителя. Клетки грибов приобретают темно-серый или черный цвет.

5) Окрашивание перйодной кислотой и реактивом Шиффа (по Мак-Манусу). Полисахариды клеточной стенки грибов сначала окисляются перйодной кислотой до альдегидов, реагирующих с сульфитом лейкофуксина реактива Шиффа. Клетки окрашиваются в насыщенно розовый или красный цвет.