Постановка реакций на человеке Реакция Дика
С целью определения уровня антитоксического иммунитета к скарлатине у здорового человека, выполняют кожную пробу с очищенным токсином — эритрогенином. В ладонную поверхность предплечья строго внутрикожно вводят 0.1 мл (1 кожную дозу) эритрогенина. Реакцию учитывают через 24 часа после введения. Ее считают положительной при отсутствии покраснения и отрицательной при наличии его диаметром более 1 см. Положительный результат говорит об антитоксическом иммунитете, отрицательный – об его отсутствии.
Реакция Шика
это реакция нейтрализации дифтерийного токсина анатоксинами организма. Она ставится для оценки напряжённости иммунитета к дифтерии. Пробу выполняют со стабилизированным, очищенным дифтерийным токсином. Последний разводят так, что бы в 0,2 мл содержалась 1/40 ДЛМ для морской свинки. Эту одну дозу вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья. Учет результатов ведут через 24 часа. При наличии в сыворотке крови обследуемого 1/30AE/мл происходит нейтрализация токсина и на месте введения не будет покраснения. Это говорит о хорошем иммунитете.
Феномен гашения сыпи
ставится на больных с диагностической и лечебной целью. Сыпь, например, при скарлатине — результат действия токсина возбудителя на мелкие капилляры. При подкожном или внутрикожном введении специфической антитоксической сыворотки наступает нейтрализация токсина и сыпь на этом участке исчезает, «гасится». Это дает возможность и диагностировать заболевание, и частично его лечить
Реакции преципитации в пробирках, капиллярах, геле.
1. По типу реакции флоккуляции: Реакция ставится в узких преципитационных пробирках диаметром 0,5 см, высотой 7— 10 см.
При положительной реакции на дно пробирки выпадают хлопья преципитата (флокулята — рыхлые хлопьевидные агрегаты).
2. По типу реакции кольцепреципитации: В 2 узкие (преципитационные) пробирки налить по 0,1 — 0,2 мл иммунной преципитирующей сыворотки (опыт) и нормальную неиммунную сыворотку того же вида (контроль), затем осторожно по стенке пробирки наслоить термопреципитиноген (например, гаптен). Реакцию учитывают при содержании пробирок либо в термостате, либо при комнатной температуре. В опытной пробирке на границе обеих жидкостей в течение З — 10 минут образуется плотное мутно-белое кольцо — кольцо преципитации. В контроле такого кольца нет.
З. Диффузионный метод преципитации в геле:вещества (антиген, антитела), диффундирующие в геле навстречу друг другу, реагируямежду собой, образуют преципитат беловатого цвета разной конфигурации. В контроле он не наблюдается.
Получение иммунной сыворотки.
Из уха или сердца кролика на 7-й день после окончания иммунизации берут кровь, помещают в термостат при 37°С на 10—15 мин. После свертывания крови сгусток отслаивают от стенок пробирки стеклянной палочкой и выдерживают при 4°С в течение часа и осторожно отсасывают пипеткой.
Реакция преципитации происходит вскоре после смешивания растворов антигена и иммунной сыворотки. Ее предварительный результат, как правило, можно учитывать через 30—60 мин инкубации полученной смеси при 37° С. Преципитация обычно завершается через 24 ч инкубации в холодильнике. При постановке реакции иммунодиффузии, когда соединение реагентов происходит лишь после их диффундирования в поддерживающей среде (например, в агаре), время образования преципитата, помимо прочих моментов, зависит от скорости диффузии.
Хорошо известная трудность в получении иммунных сывороток состоит в изменчивости иммунного ответа не только у отдельно взятых особей одного и того же вида, но также у одной и той же особи в ходе иммунизации [89]. Так, пробы иммунных сывороток, взятые у нескольких животных или у одного и того же животного в процессе иммунизации, представляют собой гетерогенный набор молекул с разными антигенсвязывающими центрами и различной аффинностью к антигену. Это относится даже к антителам, специфическим к отдельному эпитопу. Практически, чтобы получить достаточный запас однородной иммунной сыворотки, приходится делать смеси сывороток, полученных разными отборами их у иммунизированных животных.
Иммуноферментный метод диагностики (ИФА)
Сущность метода: конъюгат, образованный антителами, фиксированными на стенке лунки полистироловой пластины, и антигеном, взаимодействует с антителами, мечеными ферментом (чаще всего пероксидазой хрена) и также остаются на стенке пробирки. Не фиксированные (не отреагировавшие) субстраты сливаются из лунки и заменяются хромогеном с субстратом для индикации данного фермента. К примеру, хромогеном может служить ортофенилендиамин, субстрат для пероксидаз - перекись водорода.
Если в исследуемом субстрате были антигены, идентичные антителам, то энзим фиксируется на стенке лунки, разлагает перекись водорода и выделившийся кислород окрасит хромоген в желтый цвет.
Радиоиммунный метод (РИМ)
Сущность метода: метод позволяет в любом биологическом субстрате (моче, крови и т.д.) определять ничтожно малые концентрации растворимых антигенов, продукты метаболизма микроорганизмов, гормоны и пр. на основе конкуренции с радиоактивным антигеном.