3 курс / Фармакология / Синтез_и_изучение_свойств_новых_материалов_с_противоопухолевой

72

можно предположить, что наблюдаемый эффект является результатом комбинации нескольких типов взаимодействий соединения 1.57 с ДНК.

Рис. 3.24. Спектры кругового дихроизма ДНК (C = 6,1 мкM) в зависимости от

концентрации соединения 1.57 (C = 1–100 мкМ).

Увеличение температуры оказывает сильное влияние на стабильность двухцепочечной структуры ДНК, вызывая разрыв до однонитевой структуры, так называемое «плавление» нуклеиновой кислоты. Температура, при которой 50 %

дуплексной ДНК остаётся в двухцепочечном состоянии, считается температурой плавления ДНК (Tm) [104]. Температура плавления ДНК (Tm) напрямую зависит от стабильности её двойной спирали. Взаимодействие ДНК с малыми молекулами может стабилизировать структуру нуклеиновой кислоты, вызывая конформационные изменения, что обычно приводит к увеличению значения Tm.

Изучение плавления ДНК методом УФ-спектроскопии в присутствии соединения 1.57 показало, что температура плавления ДНК практически не меняется, хотя возрастает ширина перехода (Рис. 3.25), что свидетельствует о наличии взаимодействия. Аналогичный вид кривой плавления наблюдается при взаимодействии цисплатина с ДНК при аналогичных соотношениях. Таким образом можно предположить, что связывание в обоих случаях осуществляется с основаниями ДНК.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 3.26. Спектры поглощения растворов ДНК (C = 3,6–24,4 мкМ) при постоянной концентрации соединения 1.57 (C = 5,4 мкM), а также зависимость в координатах [ДНК] / (εa − εf) от [ДНК] (R2 = 0,982) при [ДНК] = 3,6, 5,4, 8,2, 11,1, 13,5, 1,89 и 24,4 мкМ.

Значение G составило −43,03 кДж/моль.

3.5.3.Антиоксидантная активность

3.5.3.1.Изучение антирадикальной активности

Для количественной оценки скорости реакции между веществом 1.57 и

ДФПГ была использована кинетическая модель реакции псевдопервого порядка,

описываемая уравнением (3.20):

где A∞, At и A0 — оптические плотности раствора спустя «бесконечность» (через шесть дней после начала эксперимента), в момент времени t и в начальный момент времени, соответственно.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 3.28. Температурная зависимость логарифма константы скорости реакции взаимодействия вещества 1.57 с ДФПГ. T — абсолютная температура, k —

константа скорости псевдопервого порядка.

3.5.3.2. Изучение фотодинамических свойств

Исследование фотообесцвечивания Радахлорина в присутствии соединения 1.57 позволяет оценить антиоксидантные свойства препарата при облучении видимым светом. Практическая значимость исследования заключается в том, что полученные данные позволяют оценить возможность использования веществ для реализации фотодинамической терапии, которая активно используется в онкологии [106,107] и лечении неопухолевых заболеваний [108].

Проведение фотодинамической терапии требует выбора эффективных фотосенсибилизаторов, селективных по отношению к мишени и имеющих достаточный квантовый выход синглетного кислорода при облучении. Этим требованиям соответствуют препараты хлорина e6, которые хорошо зарекомендовали себя в клинической практике. В данной работе использовался препарат Радахлорин — фотосенсибилизатор второго поколения,

предназначенный для флуоресцентной диагностики и фотодинамической терапии злокачественных опухолей [109,110]. Метод фотодинамической терапии основан на способности Радахлорина избирательно накапливаться в опухоли при его

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Рис. 3.30. Кинетическая зависимость фотовыцветания Радахлорина (►) в

присутствии соединения 1.57 (▲ 5 мкМ, ▼ 10 мкМ, ● 25 мкМ, 50 мкМ, ▼75

мкМ, ■ 100 мкМ) в сравнении с азидом натрия (● 500 мкм). A0 и At —

оптические плотности растворов Радахлорина при длине волны 664,9 нм до и после облучения.

3.5.3.3. Фотоиндуцированный гемолиз

Известно, что лизис эритроцитов инициируется облучением ультрафиолетом или видимым светом в присутствии фотосенсибилизаторов,

наиболее эффективными из которых являются порфирины и их производные

[109], в частности Радахлорин. Установлено, что фотодинамический эффект в первую очередь связан с генерацией синглетного кислорода, а затем и других активных форм кислорода. Связывание порфиринов с клеточными мембранами приводит к снижению фотостабильности мембран [110].

На Рис. 3.31 показана концентрационная зависимость степени фотоиндуцированного гемолиза в присутствии соединения 1.57. Как видно из полученных результатов, соединение 1.57 подавляет гемолиз, индуцированный Радахлорином, что проявляется в увеличении времени гемолиза. Из полученных

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

79

результатов можно сделать вывод, что соединение 1.57 проявляет дозозависимую антиоксидантную активность.

Рис. 3.31. Зависимость степени фотоиндуцированного гемолиза в присутствии соединения 1.57. C — молярная концентрация соединения 1.57, Т50соединения 1.57 —

время фотоиндуцированного гемолиза 50 % эритроцитов в присутствии соединения 1.57, T50контроль — время фотоиндуцированного гемолиза 50% в

присутствии физиологического раствора.

3.5.3.4. Антирадикальная активность соединения 1.57 по отношению к NO-

радикалу

Несбалансированность между прооксидантными и антиоксидантными системами часто может приводить к оксидативному стрессу организма, поэтому важно учитывать влияние на эти процессы биологически-активных веществ,

которые в перспективе могут использоваться в качестве лекарственных средств.

На Рис. 3.32 представлена зависимость степени связывания NO-радикалов с веществом 1.57 в диапазоне концентраций 1–200 мкМ. В качестве вещества сравнения использовался азид натрия [111]. Из полученных данных видно, что в отличие от азида натрия, вещество 1.57 практически не взаимодействует с NO-

радикалами.

80

Рис. 3.32. Эффективность захвата NO-радикалов веществом 1.57 (темно-серый)

по сравнению с азидом натрия (светло-серый). С — молярная концентрация вещества 1.57.

3.5.4. Генотоксичность соединения 1.57

Средние значения % содержания ДНК в хвосте кометы, длины хвоста и момента хвоста комет, наблюдаемые из МКПК человека, инкубированных в присутствии H2O2 (положительный контроль), PBS (отрицательный контроль) и

соединения 1.57, представлены в Табл. 3.10. Видно, что количество повреждений ДНК в присутствии H2O2 значительно выше, чем у контрольных клеток. В

качестве примера на Рис. 3.33 представлены микрофотографии ДНК-комет в присутствии H2O2 (C = 100 мкМ), PBS, и соединения 1.57 в диапазоне концентраций 1–200 мкМ. Анализ Табл. 3.10 показывает, что инкубация МКПК человека с соединением 1.57 вызывает дозозависимое повреждение целостности ДНК.

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/