3 курс / Фармакология / Миронов_А_Н_,_Бунатян_Н_Д_и_др_Руководство_по_проведению_доклинических

Исследования выполняются на собаках в максимально жестких условиях. У животных производят эксфузию крови из бедренной артерии в объеме не менее 50 мл/кг в течение 10–20мин. Кровопотерю прекращают после того, как артериальное давление падает до нуля, кровь из бедренной артерии не поступает или поступает каплями, возникают резкие нарушения электрокардиограммы, выраженные расстройства ритма дыхания. К лечению приступают сразу после эксфузии крови. Исследуемый препарат (или контрольный) вводят в бедренную вену в объеме, равном количеству изъятой крови, причем первую треть объема вводят струйно, а остальное количество — капельно.

Эффективность восстановления кровообращения под влиянием противошоковой терапии контролируется путем регистрации следующих основных показателей:

—системное артериальное давление (измеряется в аорте, в общей сонной или бедренной артерии ртутным манометром или калиброванным электроманометром);

—центральное венозное давление (регистрируется в правом предсердии водносолевым манометром или калиброванным электроманометром низкого давления);

—объем циркулирующей крови, плазмы, эритроцитов (определяется методом разведения красителя Т-1824 или с помощью радиоактивных индикаторов — альбумина 1131

идр.);

—минутный объем кровообращения (определяется методом разведения индикаторов или термодилюции или прямым методом Фика);

—электрокардиограмма (с помощью электрокардиографа любого типа, учитываются особенности расшифровки кардиограммы у животных);

—частота сердечных сокращений (подсчитывается путем анализа электрокардиограммы);

—ударный объем сердца (рассчитывается на основе показателей минутного объема и частоты сердечных сокращений);

—общее периферическое сопротивление (рассчитывается на основе показателей системного артериального давления и минутного объема кровообращения);

—регионарный кровоток (определяют кровоток в почках, печени и коже);

—микроциркуляция (биомикроскопическое исследование кровотока в микрососудах одного или нескольких сосудистых регионах: бульбарной конъюнктиве, брыжейке кишечника, слизистой защечного мешка, оценивается общий уровень перфузии микрососудов, характер кровотока, наличие и степень внутрисосудистой агрегации эритроцитов);

—реологические свойства крови (относительная вязкость, зависимость вязкости от скорости сдвига, предел текучести крови, показатель агрегации эритроцитов);

—система свертывания крови;

—кислотно-щелочное состояние (актуальный рН артериальной и венозной крови, парциальное давление углекислого газа, стандартный бикарбонат, сумма буферных оснований, избыток или дефицит оснований).

Инфузия противошокового кровезаменителя должна обеспечивать восстановление нарушенных показателей системной гемодинамики, регионарного кровотока, микроциркуляции, кислотно-щелочного состояния до исходного уровня или близких к нему величин. Длительность устойчивого поддержания физиологических показателей после проведенного лечения должна составлять не менее 24 ч.

2.2.2.Изучение специфической активности на модели геморрагического шока

Пролонгированную постгеморрагическую гипотензию, характеризующуюся ком-

плексом глубоких нарушений гемодинамики и микроциркуляции, принято трактовать, как геморрагический шок. Модель такого шока на животных разработана Уиггерсом (Wiggers, 1950).

Пролонгированная постгеморрагическая гипотензия по Уиггерсу достигается путем эксфузии крови. Первоначально кровопотерю осуществляют струйно — до снижения ар-

821

териального давления (АД) до 40 мм рт. ст. Этот уровень АД поддерживают в течение 1,5–3,0 ч за счет дополнительных дробных кровопусканий (по 10–30 мм). В процессе исследования прослеживается ряд периодов: относительной компенсации, нарушенной компенсации, декомпенсации.

К лечению шока внутривенным введением испытуемого кровезаменителя (или контрольного препарата) приступают, когда АД спонтанно снижается ниже 30 мм рт. ст. При лечении объем введенного препарата должен быть равен объему изъятой крови, причем первая треть объема вводится струйно, остальное — капельно. Регистрируются показатели гемодинамики, микроциркуляции, кислотно-щелочного баланса др. в соответствии с требованиями, указанными выше.

2.2.3. Изучение специфической активности на модели травматического шока

Моделирование шока осуществляют путем травмирования мягких тканей бедра по методу Кеннона (Cannon, 1923). Предварительно животных сенсибилизируют к травме кровопусканием в объеме 1% от массы тела. Затем проводят серию сильных тупых ударов по мягким частям бедра. Травму прекращают после снижения уровня артериального давления до 55–60 мм рт. ст. В этих условиях развивается шок III степени. К лечению приступают в торпидной фазе шока после окончания периода стабилизации. Лечение шока проводят так же, как лечение острой кровопотери. Регистрируются аналогичные показатели гемодинамики, микроциркуляции и др.

2.2.4. Изучение специфической активности на модели ожогового шока

Моделирование ожогового шока проводят путем нанесения термической травмы на кожу спины или задних конечностей. Применяют ожог пламенем горящего спирта, кипящей воды или нагревательными приборами. Температура под кожей в момент нанесения травмы должна достигать 55–60°С. Глубина поражения — IIIа–IIIб степени.

Площадь ожогового поражения — 30–40% общей поверхности тела.

В этих условиях развивается тяжелый ожоговый шок, характеризующийся уменьшением объема циркулирующей крови, снижением минутного объема кровообращения, нарушением органного кровотока, микроциркуляции, водного и электролитного обмена и кислотно-щелочного состояния. АД при ожоговом шоке снижается незначительно. К лечению ожогового шока внутривенным введением испытуемого (или контрольного) препарата приступают через два часа после ожоговой травмы. Лечение проводится аналогично терапии геморрагического шока и острой кровопотери. Оценка лечебного действия проводится по параметрам, описанным выше.

Следует подчеркнуть, что при проведении модельных исследований на собаках обязательной является регистрация выживаемости животных после лечения испытуемым и контрольным препаратом в сравнении с выживаемостью без лечения.

Целесообразно в этом разделе исследований предусмотреть проведение серии исследований по анализу совместимости нового кровезаменителя с другими ЛС, обычно применяемыми при лечении шока.

2.3. Изучение токсичности гемодинамических (противошоковых, плазмозамещающих) кровезаменителей

Изучение безопасности препаратов данной группы проводится в основном согласно рекомендациям соответствующих методических указаний по доклиническим исследованиям безопасности ЛС настоящего Руководства. Однако, при изучении острой и хронической токсичности препаратов этой группы следует учитывать объемы вводимых жидкостей, концентрацию растворов, их вязкость и период полувыведения. Учитывая эти особенности кровезаменителей, разработаны специальные схемы изучения острой и хронической токсичности препаратов этой группы.

822

2.3.1. Изучение острой токсичности

При определении средней смертельной дозы (ЛД50) следует учитывать высокую вязкость кровезаменителей, большие объемы терапевтических доз (до 2 л) и исключительно внутривенный способ введения препаратов этой группы.

Поскольку кровезаменители, как правило, обладают высокой вязкостью (соответствующей вязкости крови), при определении ЛД50 целесообразно применять растворы, в которых содержание вещества не более чем в два раза превышает концентрацию его в лекарственной форме. При инфузии более концентрированных растворов (например, 20%) гибель животных наступает не из-за токсичности вещества, а из-за тромбоэмболии кровеносных сосудов вязкими растворами. Объем раствора, как правило, не должен превышать 1 мл для мышей массой 18–22 г, 3 мл — для крыс массой 150–200 г, 50 мл — для кроликов массой 1,5–2,5 кг. Расчет ЛД50 следует проводить по общепринятым методам.

2.3.2. Изучение хронической токсичности

Противошоковые кровезаменители предназначены для возмещения дефицита объема циркулирующей крови, утраченной при шоке и кровопотере, объемы препаратов этой группы, как правило, очень большие (до 2 л) вводятся однократно и длительно удерживаются в циркуляции благодаря высокой молекулярной массе (через сутки в крови содержится до 30% от введенного количества препарата). Исходя из этих особенностей кровезаменителей, для предотвращения волемического шока при изучении хронической токсичности кровезаменителей их целесообразно вводить не каждый день, а с интервалом 48 ч в течение 2-х недель.

Примерные дозы для изучения хронической токсичности кровезаменителей: минимальная — 5–10 мл/кг, промежуточная — 20–30 мл/кг, высшая — учитывающая возможность развития токсических эффектов — 50 мл/кг. Эти дозы соответствуют минимальной и максимальной терапевтическим дозам кровезаменителей (400 мл–2000 мл), а также учитывают влияние на организм избыточной дозы (3,5–4,0 л).

В исследование включается контрольная группа животных которым вводится известное ЛС, группа интактных животных (для контроля скрытой патологии), а также отставленная группа животных (подвергается эвтаназии через месяц после курса введенной избыточной дозы — 50 мл/кг — для контроля отдаленных последствий передозировки препарата).

При изучении хронической токсичности у животных регистрируется функциональное состояние внутренних органов в соответствии с Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия ЛС. При этом, учитывая данные фармакологических исследований, особое внимание следует уделять микроскопическому исследованию внутренних органов, в которых депонируется определенное количество препарата (печень, селезенка. лимфатические узлы, почки. легкие). Изменения в данных органах после введения кровезаменителей носят, как правило, специфический характер, в связи с чем микроскопическое изучение этих органов рекомендуется проводить по единой схеме, обращая внимание на следующие детали.

Печень:

—состояние цитоархитектоники долек: отсутствие или наличие признаков дискомплексации печеночных балок;

—степень кровенаполнения сосудов, синусоидных капилляров, размеры пространства Диссе;

—характеристика гепатоцитов: размеры клеток и ядер, наличие двуядерных клеток, степень дистрофии, наличие гликогена, жира, гемосидерина, липофусцина;

—характеристика звездчатых эндотелиоцитов (клеток Купфера): размеры, отсутствие или наличие включений;

—состояние портальных трактов: размеры, инфильтрация клеточными элементами.

823

Почки:

—характеристика клубочков: размеры, кровенаполнение капилляров, размеры просвета капсулы, отсутствие или наличие в просвете эритроцитов, масс белка, толщина капсулы Боумена;

—характеристика канальцев проксимального и дистального отделов, петли Генле, собирательных канальцев: состояние эпителия, отсутствие или наличие в просвет канальцев клеток, масс белка;

—состояние стромы, степень кровенаполнения сосудов.

Селезенка:

—характеристика лимфатических фолликулов: количество, размеры, отсутствие или наличие герминативных центров, степень выраженности маргинальной зоны и короны, их клеточный состав;

—характеристика красной пульпы: кровенаполнение сосудов, клеточность пульпарных тяжей, состав клеток, содержание макрофагов, иммунобластов, плазматических клеток, пигмента;

—состояние капсулы, трабекул, фолликулярной артерии.

Лимфатические узлы:

—характеристика лимфатической ткани коркового и мозгового слоев: клеточность, состояние фолликулов коркового слоя, содержание макрофагов, иммунобластов, плазматических клеток;

—состояние краевого, межуточного и мозгового синусов: размеры просвета, степень гиперплазии и слущивания эпителия синусов;

—степень кровенаполнения сосудов;

—состояние капсулы, трабекул, стенок сосудов и посткапиллярных венул.

Легкие:

—степень кровенаполнения и состояние сосудистой стенки;

—состояние бронхов и бронхиолей;

—состояние стенок альвеол, наличие участков эмфиземы и ателектазов, степень слущивания альвеолоцитов;

—размеры перибронхиальных скоплений, наличие периваскулярных муфт. Проводится также детальное описание микроскопической картины препаратов сле-

дующих внутренних органов животных: сердце, желудок, кишечник, костный мозг, гонады, поджелудочная железа.

2.3.3. Местнораздражающее действие

При исследовании токсичности нового кровезаменителя следует изучить его местное действие на стенку вены и на подкожную клетчатку. Проводится на кроликах. Животным (не менее 5) однократно внутривенно вводят терапевтическую дозу кровезаменителя (10 мл/кг). Сроки эвтаназии: через 24 ч, на 3–5 день, через 20–30 дней. Место введения исследуется с помощью гистологических методов.

2.3.4. Изучение влияния кровезаменителей на систему свертывания крови

Все препараты этой группы оказывают определенное влияние на систему свертывания крови, так как при введении больших объемов кровезаменителя происходит гемодилюция, снижается содержание фибриногена и других факторов свертывания крови, а также числа тромбоцитов. Изучение целесообразно проводить как in vitro с донорской кровью, так и in vivo — в исследованиях на животных.

В опытах in vitro донорскую кровь смешивают с разными объемами испытуемого или контрольного препарата и анализируют изменение ряда параметров, характеризующих различные этапы процесса свертывания крови (общее время свертывания крови, время рекальцификации плазмы, тромбопластиновое время, содержание растворимого фибрина, активность ХII фактора, концентрация фибриногена, фибринолитическая активность, содержание антиплазминов и др.).

824

Вместо этих тестов допускается проведение тромбопластографического исследования.

В исследованиях in vivo кровезаменитель вводят однократно в максимальной дозе — 50 мл/кг для кроликов, 3 мл — на крысу массой 150–200 г. Пробы крови анализируют в разные сроки после введения испытуемого или контрольного препарата (1 ч, 2, 3, 4 ч, 24, 48 ч и далее до нормализации тестируемых показателей). Анализируются те же показатели, что и в опытах in vitro.

2.3.5. Изучение специфических видов токсичности: канцерогенного и мутагенного действия, эмбриотоксичности, аллергизирующего действия и влияния на иммунитет

Проводится в соответствии с методическими рекомендациями настоящего Руководства.

2.4. Изучение фармакокинетики гемодинамических (противошоковых, плазмозамещающих) кровезаменителей

Лечебная эффективность и токсичность кровезаменителей в значительной степени определяется фармакокинетическими параметрами, включающими всасывание, распределение в тканях и жидкостях организма, биотрансформацию и выделение.

Лечебная эффективность противошоковых кровезаменителей в определенной степени зависит от длительности циркуляции в кровеносном русле. Это время должно быть достаточным для восстановления компенсаторных механизмов организма. Постепенно препарат выводится из сосудистого русла, и часть его покидает организм, а некоторое количество откладывается в депонирующих органах, где постепенно метаболизируется внутриклеточными ферментами.

В связи с этим при доклиническом изучении кровезаменителей обязательным является изучение периода полувыведения препарата из сосудистого русла, определение путей и скорости выведения препарата из организма, анализ локализации препарата в тканях, выявление мест кумуляции, изучение динамики перераспределения и удаления из тканей, а также способности метаболизироваться ферментными системами организма.

Для проведения этих исследований необходима разработка метода количественного определения ЛП, его ингредиентов в крови, моче, в тканях. Методы должны быть отвалидированы в соответствии с Руководством по валидации методик анализа лекарственных средств (2007).

При изучении фармакокинетики кровезаменитель вводится животным однократно внутривенно в предполагаемой терапевтической дозе (10–20 мл/кг).

После распределения препарата по кровеносной системе (4–5 мин) определяется его концентрация в крови. Образцы крови для анализа берутся через 1, 3, 5, 24 ч и затем ежедневно до полного исчезновения препарата из крови. Рассчитывается абсолютное содержание кровезаменителя в крови в разные сроки после его введения и относительное содержание в процентах по отношению к введенному. Результаты представляются в виде таблиц и графиков.

Главный путь выведения кровезаменителя, как правило, почки. Скорость почечной экскреции оценивают по содержанию препарата в суточной моче животных, получавших препарат. Целесообразно также оценивать выведение препарата через пищеварительный тракт и с выдыхаемым воздухом.

Введенный препарат и его метаболиты распределяются в организме в зависимости от его способности проникать через мембраны, связываться с белками и другими макромолекулами, а также от возможности их депонирования в тканях. Эти исследования целесообразно проводить с помощью гистохимических методов, позволяющих выявлять введенное вещество на клеточном уровне. Методы разрабатываются применительно к изучаемым препаратам.

Обязательным является исследование, устанавливающее возможность расщепления препарата ферментными системами организма. В том случае, если основой ЛС является

825

ГЛАВА 56

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ДОКЛИНИЧЕСКОМУ ИЗУЧЕНИЮ

ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, РАЗРАБАТЫВАЕМЫХ НА ОСНОВЕ ПРИРОДНОГО СЫРЬЯ

Составители: академик РАМН, проф. В.Г. Кукес; д. м. н. В.К. Колхир;

д.фарм. н., проф. Т.А. Сокольская; д. фарм. н., проф. В.Л. Багирова;

д.б. н., проф. С.А. Вичканова; д. м. н., проф. В.М. Булаев; д. м. н., проф. Е.Е. Лесиовская;

д.фарм. н., член-корр. РАМН, проф. И.А. Самылина; к. б. н. Л.В. Крепкова,

к.б. н. В.В. Бортникова; к. м. н. А.И. Мартынов; к. б. н. Н.М. Крутикова;

д.м. н., проф. Е.В. Ших; к. б. н. О.Е. Пасхина; д. м. н., проф. Е.В.Арзамасцев;

д.фарм. н., проф. Н.Д. Бунятян; Н.Г. Оленина

Введение

Настоящие методические рекомендации содержат требования по объему доклинического изучения ЛС, разрабатываемых на основе растительного и животного сырья, продуктов пчеловодства, морепродуктов и других источников природного происхождения. Они являются частью общей программы доклинических фармакологических и токсикологических исследований, обязательных при разработке новых ЛС в Российской Федерации. Задачей данных методических рекомендаций является изложение принципов и объема доклинического изучения ЛС природного происхождения (ЛСПП). Рекомендации предназначены для специалистов различного профиля, занимающихся разработкой новых ЛС на основе сырья природного происхождения.

Существующий в мире высокий интерес к ЛСПП сопровождается повышением требований к их эффективности и безопасности, методам контроля их качества. По сравнению с синтетическими препаратами ЛСПП обладают рядом отличительных особенностей: они содержат, как правило, несколько биологически активных веществ, которые определяют основное фармакологическое действие препаратов; обладают широким спектром фармакологического действия; качество и эффективность ЛСПП во многом зависит от технологии их получения и т.д. Указанные особенности ЛСПП предъявляют повышенные требования к их стандартизации, при строгом соблюдении которых может быть гарантирована воспроизводимость заявляемых фармакологических эффектов и уровня безопасности ЛСПП.

Общие положения

Настоящие методические рекомендации являются описанием комплекса процедур, гарантирующих всестороннее изучение нового ЛСПП (определение фармакологической активности и необходимого объема токсикологических исследований) в соответствии с современными требованиями. Основой изучения являются стандартные операционные процедуры, соответствующие принципам Gоod Laboratory Practice (GLP). В данных методических рекомендациях введены требования по стандартизации фармакологически активных компонентов разрабатываемого ЛС и его фармакологическому исследованию в сравнении с уже зарегистрированным препаратом (стандартом) той же фармакологической группы в аналогичной лекарственной форме. Указанные требования позволяют отбирать новые ЛС природного происхождения, не уступающие по эффективности и безопасности уже разрешенным для медицинского применения.

827

При проведении доклинического изучения фармакологической активности и безопасности новых ЛСПП должно использоваться специализированное отечественное и зарубежное оборудование, сертифицированное в установленном порядке Минздравсоцразвития России. При фармакологическом изучении нового ЛСПП в качестве препаратов сравнения необходимо использовать только ЛС, зарегистрированные в установленном порядке в Минздравсоцразвития России.

Доклиническое изучение фармакологической активности и безопасности новых ЛСПП должно начинаться после решения всех вопросов, связанных со стандартизацией исходного сырья, субстанции и разработки готовой лекарственной формы. Необходимые показатели стандартизации должны быть зафиксированы в нормативных документах, включающих методы качественной и количественной оценки исходного сырья, субстанции и лекарственной формы. Образцы для доклинического изучения должны быть подготовлены по утвержденному регламенту.

Рекомендуемые тесты

Объем доклинического изучения фармакологической активности и токсикологического исследования ЛСПП может существенно отличаться для оригинальных препаратов (ранее не известных и не зарегистрированных в РФ) и препаратов, созданных по аналогии с известными ЛСПП и на основе уже разрешенного Минздравсоцразвития России лекарственного сырья.

Исходя из этих положений, ЛСПП, находящиеся на этапе доклинического изучения, можно разделить на следующие группы:

1. Оригинальные монокомпонентные ЛСПП, созданные на основе:

а) нового химического соединения, выделенного из разрешенных видов сырья природного происхождения;

б) нового (неофицинального) вида сырья природного происхождения. 2. Оригинальные комплексные ЛСПП:

а) имеющие в своем составе не описанные ранее химические соединения, выделенные из природного сырья;

б) имеющие в своем составе неофицинальные виды природного сырья или полученные на их основе субстанции;

в) имеющие в своем составе официнальные виды природного сырья или содержащие разрешенные к медицинскому применению компоненты.

3. Известные моно- и комплексные ЛСПП: а) заявленные по новым показаниям; б) заявленные в новой лекарственной форме;

в) заявленные для применения в новой дозе или способах введения; г) воспроизведенные ЛСПП.

В настоящее время доклиническое изучение нового ЛСПП включает проведение фармакологических и токсикологических исследований, объем которых определяется его происхождением, химическим составом, сведениями об эффективности и безопасности применения используемого природного сырья в отечественной и зарубежной медицине, видом заявляемой специфической активности и др.

1. Оценка фармакологической активности лекарственных средств природного происхождения

Фармакологическую активность (общую и специфическую) новых ЛСПП изучают в соответствии с действующими методическими рекомендациями для отдельных фармакотерапевтических групп. Исследования проводят на различных видах лабораторных животных с использованием моделей патологических состояний, а также в условиях эксперимента in vitro.

828

Изучение общей фармакологической и специфической активности в полном объеме проводят для:

—новых субстанций и ЛСПП, представляющих собой оригинальные монокомпонентные препараты на основе новых, ранее не применявшихся соединений природного происхождения;

—новых субстанций и ЛСПП на основе ранее не регистрировавшихся в Российской Федерации видов природного сырья;

—новых комплексных ЛСПП на основе ранее не регистрировавшихся в Российской Федерации субстанций и видов природного сырья.

Изучение фармакологической активности в ограниченном объеме с использованием основных методик, подтверждающих заявляемое фармакологическое действие препарата, проводят для:

—новых композиций, имеющих в своем составе зарегистрированные субстанции или официнальные виды природного сырья;

—субстанций и ЛСПП на основе неофицинального природного сырья, но широко используемого в народной медицине или пищевой промышленности;

—моно- и комплексных ЛСПП, заявляемых по новым показаниям;

—моно- и комплексных ЛСПП, заявляемых в новой лекарственной форме;

—моно- и комплексных ЛСПП, заявляемых для применения в новых дозировках;

—моно- и комплексных ЛСПП, заявляемых для применения при новом пути вве-

дения.

Для ЛСПП, представляющих собой индивидуальное соединение природного происхождения, проводят фармакокинетические исследования.

Для ЛСПП, содержащих новую, ранее не применявшуюся комбинацию субстанций или видов сырья, необходимо проводить доклиническое исследование, доказывающее оптимальность новой комбинации по сравнению с активностью ранее зарегистрированного состава.

При воспроизводстве известных, в том числе зарубежных ЛСПП должна быть документально подтверждена идентичность сырья, химического строения или химического состава и лекарственной формы воспроизводимого ЛСПП базовому препарату и представлена подробная литературная справка, отражающая все аспекты фармакологической активности базового препарата.

2. Токсикологические исследования лекарственных средств природного происхождения

а) Токсикологическое изучение оригинальных ЛСПП.

При оценке безопасности оригинальных ЛСПП, являющихся новыми биологически активными химическими соединениями (одноили многокомпонентными), полученными из природного сырья, а также препаратов, полученных из неофицинального вида природного сырья или их комбинации, токсикологическое изучение ЛСПП предусматривает проведение исследований в полном объеме, в соответствии с действующим законодательством и методическими рекомендациями. При этом проводится изучение общетоксического действия ЛСПП и лекарственной формы в условиях острых, подострых и хронических экспериментов на лабораторных животных, а также исследуются возможные мутагенные, аллергизирующие, иммунотоксические свойства, канцерогенность и репродуктивная токсичность.

б) Токсикологическое изучение ЛСПП из официнальных видов природного сырья. Для регистрации новых ЛСПП на основе разрешенных к медицинскому применению

в РФ субстанций природного происхождения и официнальных видов природного сырья допустим ограниченный объем токсикологических исследований при условии, что дозы основных действующих веществ, входящих в состав таких препаратов, не превышают доз, ранее разрешенных к медицинскому применению, и имеются данные научной

829

литературы об изучении специфических видов токсичности ЛСПП. Для таких ЛСПП необходимо выполнить следующий объем токсикологических исследований:

—изучение токсичности ЛСПП при однократном введении лабораторным животным (острая токсичность);

—изучение токсичности субстанции и лекарственных форм препаратов при длительном введении (хроническая токсичность);

—изучение аллергизирующих и местнораздражающих свойств (при необходимости — изучение на молодых развивающихся животных и исследование других видов специфической токсичности).

Обязательный объем исследований включает:

1. Определение острой токсичности ЛСПП, относящихся к перечисленным группам,

всоответствии с Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия ЛС настоящего Руководства. Для сборов возможно ограничить проведение изучения токсичности при одном способе введения, который рекомендован для клинической практики.

2. Изучение хронической токсичности препаратов, относящихся к этим группам, в соответствии с упомянутыми выше Методическими рекомендациями. Для сборов можно ограничиться экспериментами на крысах при введении их в двух дозах в течение 1–6 месяцев (в зависимости от длительности применения данных ЛСПП у человека). Исследование новых лекарственных форм ЛСПП, которые не представляется возможным ввести крысам, проводится на кроликах или собаках.

3. Изучение аллергизирующих и местнораздражающих свойств препаратов этих групп в соответствии с действующими методическими рекомендациями. В ряде случаев (разработка детских лекарственных форм, назначение ЛСПП беременным) проводится изучение препаратов на молодых развивающихся животных и исследование их репродуктивной токсичности (эмбриотоксичность, тератогенность и собственно влияние на репродуктивную функцию).

Для ЛСПП, содержащих новую, ранее не применявшуюся комбинацию субстанций или видов сырья, необходимо выполнить следующий объем токсикологических исследований:

—изучение токсичности ЛСПП при однократном введении лабораторным животным (острая токсичность);

—изучение токсичности всего комплекса субстанций и лекарственных форм препаратов при длительном введении (хроническая токсичность);

—изучение аллергизирующих и местнораздражающих свойств;

—изучение репродуктивной токсичности.

Объем доклинических исследований разрабатываемых ЛСПП определяется сведениями об эффективности и безопасности применения данного природного сырья в отечественной и зарубежной медицине, в том числе наличием сведений об изучении специфических видов токсичности; химическим составом, видом заявляемой специфической активности. При изучении фармакологической активности и токсичности новых ЛСПП на доклиническом этапе исследования необходимо руководствоваться действующими методическими рекомендациями. Заявленная активность должна быть подтверждена в сравнении с известными ЛСПП из данной фармакологической группы, а если таковых нет — с эталонными по заявляемой активности препаратами, полученными путем синтеза (желательно также, чтобы препарат сравнения соответствовал исследуемому ЛСПП по лекарственной форме и способу введения).

Особое внимание следует уделить обоснованию эффективных доз новых ЛСПП по результатам экспериментальных исследований, в том числе с учетом литературных данных. Требуется также определить и обосновать курс лечения, обозначить максимально допустимые разовые и курсовые дозы, отразить вопросы, связанные с передозировкой и взаимодействием с другими ЛС.

830