
3 курс / Фармакология / Миронов_А_Н_,_Бунатян_Н_Д_и_др_Руководство_по_проведению_доклинических
.pdf
В исключительных случаях первичный отбор противорвотных препаратов для купирования рвоты после лучевой терапии злокачественных онкологических заболеваний разрешается проводить на грызунах с использованием непрямых методов, например методом Бецольд-Яриша.
При выявлении эффективного противорвотного средства изучают его соответствие критериям отбора, изменяя время введения препарата. По результатам экспериментов рассчитывают индекс противорвотной эффективности (ИЭ) в процентах:
ИЭ 100 |
Рк Ро , |
(1) |
|
Рк |
|
где Рк — количество случаев рвоты в контрольной группе, Ро — количество случаев рвоты в получавшей изучаемое вещество группе.
Влияние препарата на интенсивность проявления эметической реакции и динамику ее протекания оценивают по длительности скрытого периода (от момента введения эметогенного препарата до начала рвоты), среднему количеству рвотных актов за период наблюдения. На основании этих показателей определяют скорость наступления противорвотного эффекта, продолжительность действия препарата, а также оценивают его эффективность в период максимальной выраженности (акрофазы) эметической реакции.
Критериями отбора ЛС для дальнейшего исследования являются:
—индекс эффективности не менее 50%;
—скорость наступления противорвотного эффекта не более 10 мин;
—продолжительность антиэметического действия сохраняется в течение 2 ч после однократного введения противорвотного средства.
При соответствии препарата указанным требованиям его свойства продолжают изучать на последующих этапах доклинического исследования.
1.2.Углубленное изучение специфической активности
Вслучае обнаружения при первичном отборе соединений, обладающих выраженным противорвотным действием, приступают ко второму этапу исследований, который начинают с изучения противорвотной активности препаратов на модели радиационной или цитостатической рвоты.
Радиационную рвоту моделируют на собаках массой 8–16 кг при общем гаммаоблучении животных в дозах от 8 до 100 Гр. При воздействии в дозах от 8 до 20 Гр мощность облучения должна составлять на менее 0,5 Гр/мин. Для исследования препаратов при более высоких дозах собак облучают при мощности дозы от 2,0 до 5,0 Гр/мин.
Вдень облучения собак не кормят, воду не ограничивают. Контрольных и получающих изучаемое соединение вещество животных распределяют на равноценные группы по массе тела и полу. Контрольным собакам назначают плацебо — тем же способом и в те же сроки, что и исследуемый противорвотный препарат.
Проводят три серии исследований со следующими условиями: I серия — контрольное облучение животных, II серия — профилактическое введение антиэметиков (облучение + изучаемое соединение, введенное до облучения), III серия — терапевтическое введение антиэметиков (облучение + изучаемое соединение, введенное после облучения). Для исследования препаратов в каждой дозе и в каждый временной диапазон формируют группы не менее чем по 4 собаки в каждой. В каждой серии исследований допустимо формировать по одной группе плацебо при условии введения одинакового объема препаратов в одинаковые сроки.
Для моделирования цитостатической рвоты используют противоопухолевые препараты, вызывающие выраженные диспепсические осложнения у пациентов — платидиам, циклофосфан, сарколизин и др. Исследования проводят на собаках массой 8–20 кг, препараты вводят парентерально в среднетерапевтических дозах, перерасчет которых применительно к лабораторным животным проводят в соответствии с требованиями на-
721
стоящего Руководства. Количество серий и групп, получающих изучаемые соединения животных, должно быть таким же, как описано выше для радиационной модели.
Наблюдения за животными проводят в течение не менее 5 ч. За несколько суток до эксперимента регистрируют «контрольные» значения поведения экспериментальных животных, которые фиксируют в карте регистрации первичной реакции на облучение (см. приложение). В эту же карту регистрируют и изменения, происходящие после приема антиэметиков.
В дополнение к ранее описанным характеристикам эффективности при лечебном применении препарата рассчитывают частоту случаев прекращения рвоты в ближайший период после введения препарата (15–20 мин), количество случаев рецидивов рвоты, при профилактическом применении — количество случаев позднего начала рвоты (через 2–3 ч).
По результатам экспериментов с использованием исследуемого препарата не менее чем в трех диапазонах доз рассчитывают его ЭД50 для купирования радиационной и цитостатической рвоты.
2. Изучение общих фармакологических свойств и безвредности
Для изучения фармакодинамики, безвредности и механизма противорвотного действия антиэметиков используют те способы введения и лекарственные формы, в которых они будут рекомендованы человеку.
Острую токсичность определяют на трех видах животных, в том числе обязательно определение токсичности препарата на одном из видов, не относящихся к грызунам и зайцеобразным. В этих исследованиях устанавливают максимально переносимые (не вызывающие токсических проявлений) и смертельные дозы. Для грызунов обязательно определение следующих категорий доз препаратов — ЛД16, ЛД50, ЛД84, для крупных животных обязательным является определение ЛД50. Срок наблюдения за животными составляет — 14 сут. По итогам экспериментов рассчитывают широту терапевтического действия, в процентах:
ШТД = ЛД50/ЭД50 , |
(2) |
где ЛД50 — среднесмертельная доза препарата на собаках, ЭД50 — среднеэффективная доза препарата по купированию радиационной или цитотоксической рвоты.
Препарат подвергают дальнейшему изучению в случае, если его ШТД составляет не менее 40 при терапевтическом применении противорвотного средства и не менее 100 при профилактическом применении противорвотного средства.
Для уточнения механизмов противорвотного действия и фармакологической характеристики антиэметика можно использовать широкий набор фармакологических методов провокации рвоты. У собак рвотная реакция вызывается внутривенным введением адреналина гидрохлорида (0,15 мг/кг), L-ДОФА (3 мг/кг), гистамина гидрохлорида (1 мг/кг), строфантина (0,1 мг/кг), салицилата натрия (300 мг/кг), внутримышечным введением морфина гидрохлорида (1 мг/кг). Указанные дозы эметиков составляют 1,5– 2,0 ЭД50 и вызывают обычно многократную рвоту у 100% животных.
Оценка безопасности препаратов при подостром и хроническом применении, характеристики их фармакокинетики, местнораздражающего действия и специфической токсичности проводится в соответствии с общепринятым алгоритмом.
Заключение
Фармакологические вещества могут быть отнесены к специфическим антиэметикам, если в условиях моделей радиационной или цитостатической рвоты обладают доказанной противорвотной активностью, а также соответствуют критериям безопасности препаратов при подостром и хроническом применении.
722

Материалы оформляются в виде научного отчета в соответствии с ГОСТ 7.32-2001 и Приказом Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики» с предоставлением в таблицах как первичных данных по каждому веществу, так и статистически обработанных результатов. К отчету необходимо приложить аналитические паспорта или нормативные документы на референтные и тестируемые вещества.
Литература
1.Fox R.A., Current status: animal models of nausea / R.A. Fox // Mechanisms and Control of Emesis. — Colloque Inserm / John Libbey Eurotext Ltd, 1992. — Vol. 223. — p. 341–350.
2.Легеза, В.И. Эметический синдром / В.И. Легеза, И.Ш. Галеев, А.Б. Селезнев. — СПб: Фолиант, 2005. — 144 с.
3.Bogle, R.G. Evidence that central 5-HT1A-receptors play a role in the von Bezold-Jarisch reflex in the rat / R.G. Bogle, J.G.P. Pires, A.G. Ramage // Br. J. Pharmacol. — 1990. — Vol. 100. — P. 757– 760.
4.Abraham, A. Cancer chemotherapy and radiation induced emesis (CRIE): current and future therapeutic approaches / A. Abraham, №. Sridhar, A. Veeranjaneyulu // Indian J. of Pharmacol. — 2000. — Vol. 32. — P. 256–268.
5.Yamamoto, K. Establishment of an animal model for radiation-induced vomiting in rats using pica / K. Yamamoto, №. Takeda, A. Yamatodani // J. Radiat. Res. — 2002. — Vol. 43. — P. 135–141.
Приложение 1
Карта регистрации первичной реакции на облучение
Масть |
|
Шифр НИОКР |
|
Пол |
|
Собака № |
|
Масса |
|
Доза облучения |
|
Дата и время облучения |
|
Шифр группы |
|
Время |
наблюдения |
|
|
часы |
минуты |
|
|
000
15
30
45
60
2 45
30
15
00
Произвольная двигательная |
Вызванная двигательная |
|
Эметический |
|
|||
активность (реакция |
|
|
|||||
активность |
|
|
синдром |
|
|
||
на экспериментатора) |
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
Количество актоврвотных |
|
|
|
Система бальной оценки |
Саливацияи |
облизывание |
|
Реакцияна |
|
||
Лежит на боку — 0; лежит, |
Не меняет позы — 0; под- |
|
пищу |
||||
голова на лапах — 1; лежит, |
нимает и поворачивает |
|
|
|
|
|
|
держит голову — 2; сидит — |
голову — 1; ложиться — 2; |
|
|
|
|
|
|
3; стоит — 4; ходит — 5; дви- |
садится — 3; встает — 4; под- |
|
|
|
|
|
|
гательное беспокойство — 6 |
ходит –5; прыгает — 6 |
|
|
|
|
|
|
Исходный фон (регистрируется за сутки до эксперимента)
До облучения
723

Время наблюдения |
|
Произвольная двигательная |
Вызванная двигательная |
|
Эметический |
|||
|
активность (реакция |
|
||||||
|
|
|
активность |
|
|
синдром |
|
|
|
|
|
на экспериментатора) |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Система бальной оценки |
Саливацияи |
облизывание |
Количество актоврвотных |
Реакцияна пищу |
|
часы |
минуты |
|
Лежит на боку — 0; лежит, |
Не меняет позы — 0; под- |
||||
|
|
|
голова на лапах — 1; лежит, |
нимает и поворачивает |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
держит голову — 2; сидит — |
голову — 1; ложиться — 2; |
|
|
|
|
|
|
|
3; стоит — 4; ходит — 5; дви- |
садится — 3; встает — 4; под- |
|
|
|
|
|
|
|
гательное беспокойство — 6 |
ходит –5; прыгает — 6 |
|
|
|
|
145
30
15
00
045
30
15
00
После облучения
000
15
30
45
100
15
30
45
200
15
30
45
300
15
30
45
400
15
30
45
500
15
30
45
Примечание. Временной период введения противорвотного средства обводится кружком
Подпись экспериментатора_________________________ (__________________) Подпись лаборанта _______________________________ (__________________)
ГЛАВА 46
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ДОКЛИНИЧЕСКОМУ ИЗУЧЕНИЮ ПРОСТАТОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ
Составители: д. б. н., проф. Т.Г. Боровская; к. м. н. Т.И. Фомина; д. б. н., проф., член-корр. РАМН А.Д. Дурнев; член-корр. РАМН, проф. В.В. Удут;
к. м. н. А.В. Пахомова; З.А. Юрмазов Отв. ред. д. м. н., проф., академик РАМН А.М. Дыгай.
Введение
К препаратам простатотропного типа действия относятся вещества, обладающие благоприятным тканеспецифическим действием на предстательную железу. Эти препараты могут быть эффективными при лечении наиболее распространенных заболеваний предстательной железы, к числу которых относятся прежде всего простатиты. На сегодняшний день принято классифицировать простатит согласно рекомендациям NIH [37]. В этой классификации выделяют 4 категории простатитов. Категория 1 — острый бактериальный простатит. Категория 2 — хронический бактериальный простатит. Категория 3 — хронический абактериальный простатит или синдром хронической тазовой боли. Категория 4 — бессимптомный воспалительный простатит. Синдром хронической тазовой боли может быть с воспалительным компонентом — хронический абактериальный простатит (ХАП) и без него — хронический невоспалительный простатит (ХНП). Частота встречаемости острых бактериальных простатитов (ОБП), хронических бактериальных простатитов (ХБП) в 8 раз ниже, чем их абактериальных форм. При терапии ОБП и ХБП логически обоснованным является применение прежде всего антибактериальных средств [17].
Возникновение ХАП и ХНП, как правило, не связано с наличием инфекции. Несмотря на предпринимаемые усилия по поиску средств их фармакотерапии, частота встречаемости этих заболеваний с течением времени не снижается и даже имеет тенденцию к увеличению. Основными клиническими симптомами ХАП и ХНП являются болевые, дизурические, эректильные, а также психо-эмоциональные нарушения. Эти заболевания существенно снижают качество жизни пациентов и могут быть причиной бесплодия. Стандартной схемы лечения ХАП и ХНП в настоящее время не существует. Это обусловлено прежде всего отсутствием единой концепции их этиологии и патогенеза. В терапии пациентов с хроническим простатитом, не связанным с наличием инфекционного процесса, используются ЛС, воздействующие на отдельные звенья патогенеза (нестероидные противовоспалительные средства, миорелаксанты, спазмолитики, альфа-1-адреноблокаторы, антихолинэргические средства, ингибиторы 5-альфа- редуктазы и др.). Основываясь на возможности наличия невыявленной инфекции, рекомендуется прием антибактериальных препаратов [29]. Однако используемые методы фармакотерапии недостаточно эффективны, и после лечения, как правило, наступает рецидив заболевания. Лечение ХАП и ХНП является одной из самых сложных проблем в урологии. Отсутствие достаточно обоснованных подходов к лечению хронических простатитов, не связанных с наличием инфекционного процесса, способствует коммерциализации медицинской помощи этой категории пациентов. Агрессивная ре-
725
клама приводит к использованию различных средств их фармакотерапии, многие из которых в лучшем случае бесполезны.
Простатотропные средства могут быть эффективны не только при терапии ХАП и ХНП, но и при доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ), которая также принадлежит к числу наиболее распространенных урологических заболеваний [21]. У мужчин старше 60 лет она отмечается в 80% случаев. По данным ООН количество мужчин данной возрастной категории к концу 20 века возросло более чем в 3 раза. Следует отметить, что ДГПЖ может проявляться уже в возрасте 40–50 лет. Основным клиническим симптомом ДГПЖ является нарушение мочеиспускания, вызванное увеличением размеров простаты. Последнее является результатом нарушений гормонозависимого взаимодействия между эпителием и стромой простаты. Следует отметить, что различные варианты воспалительной реакции являются постоянными компонентами стромальных изменений при ДГПЖ [28]. В связи с этим это заболевание называют гормон-индуцированным воспалением простаты.
В последние годы отмечается устойчивая тенденция к снижению количества больных, требующих оперативных вмешательств по поводу ДГПЖ. Этому способствует внедрение медикаментозных и малоинвазивных методов лечения. Фармакотерапия ДГПЖ является одной из динамично развивающихся областей урологии [15]. Среди лекарственных методов лечения широкое распространение получили альфа-I адреноблокаторы, ингибиторы 5-альфа-редуктазы [10, 30]. Клиническая эффективность этих препаратов высокая, однако ряд побочных эффектов (гипотензия, головокружение, эректильная дисфункция и др.) настоятельно диктуют необходимость поиска новых препаратов для лечения ДГПЖ.
Таким образом, объективна необходимость поиска средств терапии ХАП, ХНП, ДГПЖ, что позволяет считать актуальной разработку унифицированных методов доклинического исследования простатотропных препаратов для лечения пациентов с обозначенными нозологиями [7, 29]. Решению этой задачи и посвящены представленные методические рекомендации.
1. Общие положения
Создание экспериментальных моделей заболеваний предстательной железы необходимо не только для поиска новых средств терапии, но и для изучения этиологии и механизмов их возникновения [41]. Работая в этом направлении, ряд исследователей выявили случаи спонтанного возникновения простатитов у экспериментальных животных. К сожалению, большинство из разработанных моделей воспроизводят бактериальные формы простатитов. Удельный вес числа моделей, воспроизводящих абактериальные формы простатитов и ДГПЖ, относительно небольшой. Кроме того, способы моделирования хронических абактериальных простатитов и ДГПЖ должны опираться на существующие данные об этиологии и механизмах возникновения заболеваний.
Однако на сегодняшний день не существует единой концепции причин и механизмов возникновения ХАП. Основные его причины видятся в нарушении кровообращения тканей железы, изменении обменных процессов организменного плана, диетических огрехах, вредных привычках, малоподвижном образе жизни, стрессах, переохлаждении и т.д. [23, 29]. В патогенезе ХАП немаловажную роль отводят врожденным особенностям кровоснабжения предстательной железы (недостаточность артериального кровоснабжения, обилие анастомозов между венами предстательной железы и венозной системой таза) [27]. Ряд этиологических факторов, таких как нарушения функции симпатической нервной системы, обмена веществ, гиперактивность альфа-I-адренорецепторов, нейроэндокринный дисбаланс, включают в ряд звеньев патогенеза ХАП [29, 11]. Имеет право на жизнь и нейромышечная теория патогенеза этого заболевания. В последние годы большое внимание уделяется нарушениям антиоксидантной защиты (за счет изменений
726
микроэлементного баланса) и микроциркуляции в тканях железы. С учетом того, что развитие ХАП приводит к нарушениям структурно-функционального состояния органов репродуктивной системы, к числу его осложнений относят снижение либидо, эректильную дисфункцию, бесплодие [2, 22]. Отмеченные последствия не только снижают качество жизни молодого трудоспособного населения, но и оказывают негативное влияние на демографические показатели.
Неясность этиологии и патогенеза характерна и для ХНП. Данное заболевание сходно с хроническим абактериальным простатитом, но признаки воспаления отсутствуют. Существует несколько теорий механизмов его развития [32]. Считают, что ХНП является результатом интрапростатического мочевого рефлекса, продолжительного напряжения мышц тазового дна, аутоиммунного воспаления, стрессового воздействия, следствием активации симпатического звена вегетативной тазовой иннервации. В патогенезе невоспалительных простатитов, по данным Лорана О.Б., значимую роль играют конгестивные процессы в венах малого таза [18]. Лечение ХНП является сложной проблемой. Даже 50% снижение интенсивности симптомов считается хорошим результатом предпринятого лечения, а полное излечение, по мнению ряда авторов, нереально [12].
В патогенезе ДГПЖ ведущая роль отводится гормональному дисбалансу. Ее возникновение является следствием нарушения механизмов регуляции системы гипоталамус — гипофиз — гонады — предстательная железа. Под влиянием эндокринных сдвигов в предстательной железе у мужчин позднего репродуктивного возраста могут возникать изменения, при которых тормозится развитие возрастного атрофического процесса. При этом наблюдается развитие доброкачественной гиперплазии, проявляющейся в виде узловой или диффузной пролиферации эпителия протоков и эпителиальной ткани желез [24]. В патогенезе ДГПЖ важную роль играют эстрогены, повышение содержания дигидротестостерона, сопровождающееся возрастанием внутриклеточной активности 5-альфа-редуктазы. Известно, что одним из факторов, способствующих развитию ДГПЖ, является возрастание уровня пролактина, который обладает способностью усиливать чувствительность предстательной железы к действию андрогенов [25, 33]. Сравнительно недавно в экспериментальных исследованиях было показано, что одной из причин развития этой нозологии может быть нарушение прооксидантно-антиоксидантного баланса в предстательной железе [3].
Методические рекомендации по поиску простатотропных средств должны принимать во внимание существующие данные по этиологии и патогенезу перечисленных патологических процессов. В литературе описан ряд моделей экспериментальных абактериальных простатитов, опирающихся на некоторые теории его патогенеза (нейрогенный простатит, аутоиммунный простатит и др.) [31, 39, 41]. Тем не менее, принимая во внимание отсутствие единой концепции патогенеза ХАП, для изучения эффектов простатотропных средств и даже изучения патогенеза рекомендуется использовать модели, воспроизводящие в ткани предстательной железы экспериментальных животных признаки абактериального воспаления.
1.1. Понятия и термины
Простатропное средство — вещество, обладающее благоприятным тканеспецифическим действием на предстательную железу.
Хронический абактериальный простатит — воспалительное заболевание неинфекционного генеза, характеризующееся поражением как паренхиматозной, так и интерстициальной ткани предстательной железы.
Хронический невоспалительный простатит — невоспалительное заболевание с клиническими признаками хронического простатита, возникающее в результате сосудистых расстройств в области малого таза, оперативных вмешательств на органах малого таза, травм, неврологических патологий и др.
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы — доброкачественная опухоль, возникающая в результате разрастания клеток железистой ткани вследствие гор-
727
мональной дисфункции. Финальной стадией гистогенеза ДГПЖ является развитие клинических симптомов (синдрома нижних мочевых путей) как результат увеличения предстательной железы.
1.2. Цели и задачи исследования. Основные этапы исследования
Целью данного исследования является оценка способности веществ предотвращать или снижать выраженность развития ХАП, ХНП, ДГПЖ.
Задачи исследования:
1.Оценить фармакологические эффекты препарата на экспериментальных моделях острого и хронического асептического воспаления предстательной железы крыс.
2.Оценить фармакологические эффекты препарата при экспериментальном хроническом невоспалительном простатите.
3.Оценить фармакологические эффекты препарата при экспериментальной доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Основные этапы исследования.
1 этап. Первичный отбор простатотропных средств рекомендуется проводить на моделях острого абактериального простатита, вызванного различными вариантами повреждений ткани железы. При этом в тканях должны выявляться основные признаки асептического воспаления: отек, гиперемия, лимфо-макрофагальная инфильтрация, дистрофические изменения и гибель клеток. Важная информация о влиянии нового лекарственного вещества на андрогенный эффект тестостерона пропионата может быть получена на этапе скрининга на модели гонадэктомированных инфантильных крыс-самцов [13].
2 этап. В дальнейшем рекомендуется проведение экспериментальных исследований, доказывающих эффективность использования препарата на моделях хронического асептического простатита, хронического невоспалительного простатита, доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Экспериментальный хронический абактериальный простатит может быть получен путем использования различного рода повреждения ткани. Эти модели должны воспроизводить морфологические признаки ХАП: гемодинамические нарушения, атрофию, склероз, лимфо-макрофагальный инфильтрат. При моделировании экспериментального хронического невоспалительного простатита должны воспроизводиться в железе морфологические признаки этого заболевания — атрофия, склероз, гемодинамические нарушения. Учитывая то, что в патогенезе ХНП значимую роль играют конгестивные процессы в венах малого таза, данные морфологические изменения могут быть воспроизведены путем создания хронической венозной недостаточности в этом регионе. При экспериментальном моделировании ДГПЖ должны быть воспроизведены ее морфологические признаки — разрастание железистой ткани предстательной железы.
3 этап. Для более углубленного исследования эффективности применения потенциального простатотропного средства возможно использование различных моделей патологических состояний, позволяющих оценить не только его действие на предстательную железу, но и на диурез, его анальгезирующие, противомикробные свойства и т.п. Описание этих методик можно найти в соответствующих разделах «Руководства по проведению доклинических исследований ЛС». В дальнейших исследованиях специфичность простатотропного действия препаратов можно изучить на других моделях, соответствующих различным теориям возникновения ХАП, ХНП и ДГПЖ, в частности, моделях аутоиммунного простатита [41]. Учитывая то, что к числу патогенетических механизмов простатитов относят нарушение функции симпатической нервной системы, возможно изучение простатотропных свойств на моделях удаления симпатических нервных стволов от уровня почечных сосудов до крестцового отдела [31]. В дальнейшем возможно проведение исследований по изучению путей реализации выявленных эффектов: определение цитокинов, характеризующих противовоспалительное действие препаратов, указывающих на возможность аутоиммунного воспаления, показателей свободно радикальной активности [3, 35, 41] и т.п.
728
Учитывая то, что осложнениями простатитов является эректильная дисфункция, бесплодие, в дальнейших исследованиях для получения дополнительных доказательств эффективности нового ЛС возможно экспериментальное изучение состояния копулятивной функции у животных с хроническим простатитом и показателей спермограммы. Целесообразность проведения данных дополнительных исследований обусловлена тем, что успешное лечение простатита — единственный путь к восстановлению утраченной эректильной функции и фертильности [2].
1.3. Рекомендуемые тесты и биологические модели исследования простатотропной активности лекарственных средств
Острое асептическое воспаление может быть воспроизведено следующими способами:
—ректальным введением смеси скипидара и димексида [7];
—трансуретальной инстилляцией раствора динитробензолсульфоновой кислоты в 50% растворе этанола [38];
—прошиванием железы экспериментальных животных (крыс, кроликов) шелковой нитью [1, 4, 5]. Этот способ нетоксичен для других органов, морфологические признаки острого асептического воспаления простаты воспроизводятся в 100% случаев. Кроме того, на этой модели описано угнетение функциональной активности железы. Ниже приводится ее подробное описание.
Влияние нового лекарственного вещества на андрогенный эффект тестостерона пропионата может быть изучено на модели гонадэктомированных инфантильных крыссамцов.
Признаки хронического абактериального простатита у крыс в предстательной железе могут быть получены путем использования различного рода повреждения ткани:
—ректальным введением 1 мл смеси, содержащей 90% раствор скипидара и 10% раствор диметилсульфоксида (в качестве пенетранта, под внутримышечным наркозом) [19];
—путем аппликации метаксидола на заднюю поверхность предстательной железы половозрелых животных (крыс, кроликов). Модель соответствует представлениям о ведущей роли гемодинамических нарушений в патогенезе простатита. Воспроизводится тромбоз вен и лимфоидная инфильтрация [9];
—прошиванием железы экспериментальных животных (крыс, кроликов) шелковой нитью [1, 4, 5, 8]. Данный способ нетоксичен для других органов, морфологические признаки хронического асептического воспаления простаты воспроизводятся в 100% случаев. Достоинством модели является то, что выявляются не только морфологические признаки ХАП, но и угнетение функциональной активности железы. Ниже приводится ее подробное описание.
Для поиска средств лечения ХНП должна быть использована экспериментальная модель, воспроизводящая в железе морфологические признаки этого заболевания — атрофию, склероз, гемодинамические нарушения. Учитывая то, что в патогенезе ХНП значимую роль играют конгестивные процессы в венах малого таза, данные морфологические изменения воспроизводятся путем создания хронической венозной недостаточности в этом регионе. Венозная недостаточность в венах малого таза и признаки НХП может быть воспроизведена путем лигирования нижней полой вены (ниже представлено описание этой модели). Возможно также лигирование внутренних подвздошных вен [14], но данный способ является технически более сложным.
Морфологические признаки гормонзависимого воспаления простаты (ДГПЖ) могут быть вызваны у экспериментальных животных следующими способами:
—путем введения кастрированным крысам экстрадиола-17 и тестостерона в течение 1–3 недель после кастрации [40];
—путем введения сульпирида, вызывающего гиперпролактинемию [28, 33]. Последняя модель менее трудоемка, легко воспроизводится в 100% случаев. По мне-
нию Fabien Van Coppenolle et al. (2001) эта модель является наиболее адекватной для чело-
729
веческого организма. Она основана на том, что возрастание уровня пролактина усиливает чувствительность предстательной железы к действию андрогенов, что является одной из причин возникновения ДГПЖ. В течение 2-х месяцев после начала введения сульпирида в ацинусах предстательной железы крыс наблюдаются папиллярные разрастания эпителия. Количественно определяется увеличение площади железистого эпителия, уменьшение просвета концевых отделов, воспалительная инфильтрация стромы. Ниже приводится описание модели. В рекомендуемой модели экспериментальной ДГПЖ воспроизводятся морфологические признаки аденоматозной формы гиперплазии.
1.4. Условия проведения исследования
Исследования рекомендуется проводить на крысах [31]. Морфологические изменения в железе оцениваются количественно. Полученные данные обрабатываются с помощью современных статистических методов исследования. Материал представляется в виде таблиц и рисунков.
Исследование простатотропного действия должно быть обязательно проведено в сравнении с наиболее известным эталонным препаратом, выбранным в зависимости от происхождения, химического строения и предполагаемого механизма действия. Новое средство по сравнению с имеющимися должно обладать большей избирательностью действия на ткань простаты, иметь меньше побочных эффектов.
Результаты экспериментального изучения нового препарата с простатотропными свойствами должны содержать материалы, доказывающие наличие у него положительного влияния не только на морфологическое, но и функциональное состояние предстательной железы экспериментальных животных при отмеченных выше нозологических формах.
К исследованию принимаются субстанции и/или лекарственные формы и/или смесь веществ со следующими характеристиками:
—физико-химические свойства;
—методы получения;
—условия растворимости (водорастворимые, жирорастворимые);
—подлинность;
—рекомендуемый способ введения.
Если по условиям эксперимента фармакологическое вещество исследуют в виде раствора, необходимо иметь данные о стабильности используемого раствора и условиях его хранения.
1.5. Оборудование, инструменты и реактивы
Помещение для оперирования животных с бактерицидной лампой, термостат, весы лабораторные, микротом, предметные стекла, микроскоп прямого света, шелк хирургический, иглы хирургические, иглы инъекционные, ножницы, пинцеты, средство для наркоза, хлороформ, уксусная кислота, спирт, ксилол, гомогенизированная парафиновая среда для гистологической заливки, гематоксилин, эозин натрия, также другие приборы и реактивы, определяемые задачами конкретного исследования.
1.6. Растворители и разбавители
Определяются известными к началу эксперимента характеристиками вещества. Данные средства служат контрольными веществами при проведении экспериментов.
1.7.Дозы, пути и режимы введения
ипродолжительность исследования
Определяются индивидуально в зависимости от известных к началу эксперимента свойств вещества и метода исследования. Путь введения должен соответствовать предполагаемому клиническому способу применения.
730