3 курс / Фармакология / Диссертация_Гильдеева_Г_Н_Формирование_междисциплинарного_подхода

162

1 мл ортофосфорной кислоты (H3PO4) поместили в мерную колбу вместимостью 2000 мл, довели до метки водой для ВЭЖХ и профильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Смешали ацетонитрил с буферным раствором в объемном соотношении 10:90 и перед использованием продегазировали.

Приготовление испытуемого раствора

В каждый сосуд для растворения поместили по 900 мл среды растворения, и

нагрели до 37±0,50С. После достижения соответствующей температуры, в каждый сосуд поместили по одной таблетке препарата. Через указанные временные интервалы отобрали 10 мл раствора из каждого сосуда для растворения и профильтровали через фильтр ПВДФ с размером пор 0,45мкм, отбрасывая первые порции фильтрата.

Препараты изотретиноина

СТКР проводили в трех средах со значениями рН 1.2, 4.5, 6.8 и в среде,

прописанной в НД. Для каждого препарата для получения статистически достоверных результатов проводили 12 параллельных определений. Содержание высвободившегося активного ингредиента в отобранной пробе определяли методом, указанным в НД. Эквивалентность кинетики растворения оценивали исходя из фактора сходимости f2, который рассчитывают по уравнению:

где:

n- число временных точек;

Rt – среднее значение высвободившегося активного ингредиента из препарата сравнения на момент времени t, %;

Tt – среднее значение высвободившегося активного ингредиента из исследуемого препарата на момент времени t, %;

163

Кинетика растворения лекарственного средства считается эквивалентной в случае выполнения следующих условий: значение фактора сходимости f2

находится в интервале от 50 до 100; величина коэффициента вариации (CV) для среднего значения для первой временной точки должна быть не более 20 %, для остальных точек не более 10 %; в том случае, когда более 85 % активного ингредиента переходит в раствор из обоих препаратов в течение 15 минут,

кинетика растворения считается эквивалентной без математической оценки.

Условия растворения

Условия анализа

Количественное определение содержания изотретиноина, перешедшее в

раствор провели методом УФ-спектрофотомерии. Измеряли оптическую

плотность испытуемых растворов на спектрофотометре SPECORD 210 PLUS

(серийный номер 223F1066) в кварцевой кювете с толщиной слоя 1 см в максимуме поглощения при длине волны 343 мм. Содержание изотретиноина,

перешедшего в раствор, в процентах (Х) вычисляют по формуле:

Abs 900 50 1000

% изотретиноина = -------- x -------- x ------ x -------- x 100 = Abs x 251.68

1490 10 2 100

Капсулы 20 мг

Где

Abs – величина оптической плотности образца

1490 – специфическая оптическая плотность А 1 % w/v раствора изотретиноина.

Приготовление растворов Реактивы

Аммония ацетат, ч.д.а. (Россия); динатрия гидрофосфат, ч.д.а. (Россия);

лимонная кислота, Fluka; натрия хлорид, ч.д.а. (Россия); натрия гидроксид, Sigma Aldrich; уксусная кислота ледяная, осч. (Россия); хлористоводородная кислота,

концентрированная, ч.д.а. (Россия); орто-фосфорная кислота, осч.12-3 (Россия);

ацетонитрил, HPLC far UV/Gradient grade (J.T.Baker); вода для ВЭЖХ, gradient HPLC grade (Scharlau); вода очищенная.

Приготовление сред растворения

Солянокислый буфер, pH 1.2

Приготовление раствора А (0.2М раствор хлористоводородной кислоты): 17.2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной поместили в мерную колбу вместимостью 1000 мл, осторожно довели объем раствора до метки и перемешали.

Приготовление раствора В (0.2М раствор натрия хлорида): 11.7 г натрия хлорида поместили в мерную колбу вместимостью 1000 мл, перемешали и довели объем раствора до метки. 10 мл раствора В поместили в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавили 425 мл раствора А, довели объем раствора до метки и перемешали.

Ацетатный буфер, pH 4.5

165

77.1 г аммония ацетата и 70 мл ледяной уксусной кислоты поместили в мерную колбу вместимостью 1 л и довели объем раствора до метки дистиллированной водой.

Фосфатный буфер, pH 6.8

Приготовление раствора А: 71.5 г динатрия гидрофосфата поместили в мерную колбу вместимостью 1 л и довели объем раствора до метки дистиллированной водой. Приготовление раствора В: 21 г лимонной кислоты поместили в мерную колбу вместимостью 1 л и довели объем раствора до метки дистиллированной водой. 773 мл раствора А (71,5 г/л раствор динатрия гидрофосфата) смешали с 227 мл раствора В (21 г/л раствор лимонной кислоты).

0.1М NaOH

4 г гидроксида натрия поместили в мерную колбу вместимостью 1 л и довели объем раствора до метки дистиллированной водой.

Приготовление испытуемого раствора

В каждый сосуд для растворения поместили по 900 мл среды растворения, и нагрели до 37±0,50С. После достижения соответствующей температуры, в каждый сосуд поместили по одной капсуле препарата. Через указанные временные интервалы отобрали 20 мл раствора из каждого сосуда для растворения и профильтровали через фильтр на поливинилидендифториде (ПВДФ) с размером пор 0,45мкм, отбрасывая первые порции фильтрата.

Препараты этилметилгидроксипиридина сукцината

Условия растворения

Для получения статистически достоверных результатов исследование проводили 12 раз для каждого препарата в каждой среде растворения.

Условия анализа

Измеряли оптическую плотность испытуемых и стандартных растворов на спектрофотометре SPECORD 210 PLUS (серийный номер 223F1066) в кварцевой кювете с толщиной слоя 1 мм в максимуме поглощения при длине волны 272 мм,

используя в качестве раствора сравнения среду растворения.

Реактивы

Аммония ацетат, ч.д.а. (Россия); динатрия гидрофосфат, ч.д.а. (Россия);

лимонная кислота, Fluka; натрия хлорид, ч.д.а. (Россия); натрия гидроксид, Sigma Aldrich; уксусная кислота ледяная, осч. (Россия); хлористоводородная кислота,

концентрированная, ч.д.а. (Россия); этилметилгидроксипиридина сукцинат (СО,

ООО «БИОН»); вода очищенная.

Приготовление сред растворения Солянокислый буфер, pH 1.2

Приготовление раствора А (0.2М раствор хлористоводородной кислоты): 17.2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, осторожно доводят объем раствора до метки и перемешивают. Приготовление раствора В (0.2М раствор натрия хлорида): 11.7 г

натрия хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл,

перемешивают и доводят объем раствора до метки. 250 мл раствора В помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 425 мл раствора А, доводят объем раствора до метки и перемешивают.

167

Ацетатный буфер, pH 4.5

77.1 г аммония ацетата и 70 мл ледяной уксусной кислоты помещали в мерную колбу вместимостью 1 л и доводили объем раствора до метки дистиллированной водой.

Фосфатный буфер, pH 6.8

Приготовление раствора А: 71.5 г динатрия гидрофосфата помещали в мерную колбу вместимостью 1 л и доводили объем раствора до метки дистиллированной водой. Приготовление раствора В: 21 г лимонной кислоты помещали в мерную колбу вместимостью 1 л и доводили объем раствора до метки дистиллированной водой. 773 мл раствора А (71,5 г/л раствор динатрия гидрофосфата) смешали с 227 мл раствора В (21 г/л раствор лимонной кислоты).

Приготовление стандартного образца (СО) этилметилгидроксипиридина сукцината

125 мг (точная навеска) этилметилгидроксипиридина сукцината поместили в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавили 60 мл среды растворения,

перемешали до полного растворения навески, довели объем раствора средой растворения до метки и перемешали. 1,0 мл полученного раствора перенесли в мерную колбу вместимостью 100 мл, довели объем раствора средой растворения до метки и перемешали. Использовали свежеприготовленный раствор.

Приготовление испытуемых растворов

В каждый стакан для растворения помещали по 500 мл среды растворения и нагревали до 37±0.5 0С. В каждый стакан для растворения помещали по одной таблетке. Отбирали пробы по 10.0 мл из каждого сосуда через 5, 10, 15, 30 и 45

минут, добавляя после каждого отбора пробы среду растворения в объеме, равном объему отобранной пробы. Отобранные пробы фильтровали через фильтр ПВДФ с размером пор 0.45 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата.

168

4.2.Результаты собственных сравнительных тестов кинетики растворения

применительно к различным регистрационным задачам

4.2.1. Препараты изотретиноина

СТКР в качестве дополнения к исследованию биоэквивалентности

При выполнении СТКР, проведенного в дополнение к исследованию биоэквивалентности для основной дозировки воспроизведенного лекарственного препарата, исследуемым препаратом служила та же серия той же дозировки исследуемого лекарственного препарата (Изотретиноин, капсулы 20 мг), для которого проводилось исследование биоэквивалентности. Референтным лекарственным препаратом являлась та же серия той же дозировки референтного лекарственного препарата (Роаккутан® капсулы, 20 мг), для которого проводилось исследование биоэквивалентности.

СТКР в качестве замены исследования биоэквивалентности (меньшая дозировка)

Данный СТКР проводился с целью подтверждения эквивалентности профилей растворения как замена исследования биоэквивалентности для дополнительной дозировки исследуемого препарата (Изотретиноин, капсулы 10

мг). В качестве референтного препарата использовалась основная дозировка того же препарата, для которой проводилось исследование БЭ (Изотретиноин, капсулы

20 мг).

Результаты

На рисунках 4.1-4.2 представлены сравнительные профили растворения изучаемых препаратов.

Рис. 4.2 - Сравнительный профиль растворения препаратов Изотретиноин

капсулы, 10 мг и Изотретиноин капсулы, 20 мг в 0.1M NaOH

170

Выводы

Поскольку более чем 85% изотретиноина растворяется через 15 минут в

0.1М NaOH, профили растворения в этих буферных средах считаются идентичными без дополнительного расчета фактора подобия f2. Поскольку изотретиноин не растворяется в средах с pH 1.2, 4.5 и 6.8 проведение сравнительной кинетики растворения в данных средах не представляется возможным.

4.2.2. Препараты леветирацетама

СТКР в качестве дополнения к исследованию биоэквивалентности

При выполнении СТКР, проведенного в дополнение к исследованию биоэквивалентности для основной дозировки воспроизведенного лекарственного препарата, исследуемым препаратом служила та же серия той же дозировки исследуемого лекарственного препарата (Леветирацетам таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 500 мг), для которого проводилось исследование биоэквивалентности. Референтным лекарственным препаратом являлась та же серия той же дозировки референтного лекарственного препарата (Кеппра® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 500 мг), для которого проводилось исследование биоэквивалентности.

На рисунках 4.3-4.5 представлены сравнительные профили растворения изучаемых препаратов.