3 курс / Фармакология / Диссертация_Быченкова_М_А_Влияние_густого_экстракта_из_травы_первоцвета

140

141

142

143

144

145

146

147

Выделение и идентификация индивидуальных соединений из ГЭТПВ

Для выделения индивидуальных соединений использовали высушенное измельченное растительное сырье травы первоцвета весеннего,

заготовленное в Европейской части РФ (степень измельченности 1–3 мм) от

200 г до 3,0 кг. Ээкспериментально установлено, что максимальный выход фенольных соединений (качественно и количественно) осуществляется экстракцией сырья раствором спирта этилового 70% [Латыпова et al., 2011].

Исследование качественного состава фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ. Проведенные ранее авторами исследования показали, что перспективными для исследования явились полифенольные соединения, в

том числе флавоноиды.

Для разделения БАС упаренные под вакуумом водные извлечения наносили на колонки, наполненные силикагелем L 40/100 и L 100/110 мкм.

Экстрактивные вещества элюировали хлороформом, спирто-хлороформными смесями и спиртом этиловым. Полученные элюаты делились на фракции одинакового состава и упаривались под вакумом. Индивидуальные вещества выделяли с использованием рехроматографии на микроколонках с полиамидным сорбентом («Wolem DC»), элюировали водой и водно-

спиртовыми растворами различных концентраций (20%, 40%, 70%, 96%).

Фракции, содержащие одинаковые вещества, объединяли, при необходимости упаривали, при этом наблюдали появление осадков.

Выпавшие осадки отделяли, перекристаллизовывали из спирта этилового,

водно-спиртовых растворов.

Процесс фракционирования БАС контролировали методами ТСХ, УФ-

спектроскопии. Для выполнения ТСХ использовали пластинки «Sorbfil» (марки ПТСХ-П-А и ПТСХ-АФ-А-УФ), различные системы растворителей.

УФ-спектры растворов выделенных веществ и водно-спиртовых извлечений регистрировали с помощью спектрофотометра «Specord 40».

Экспериментально определено, что для выполнения ТСХ наиболее

148

оптимальной оказалась система растворителей н. бутанол – кислота уксусная

– вода (БУВ) (4:1:2).

Структуру выделенных веществ определяли веществ на базе Уфимского института химии Российской академии наук методами УФ, ЯМР

1Н-, ЯМР 13С –спектроскопии, корреляционной спектроскопии ЯМР 1H-

1HCOSY, 1H-13C HSQCED, НМВС; хромато-масс-спектрометрии на основании физико-химических свойств, методов хроматографии, сравнением со стандартными образцами веществ.

В ходе проведенных исследований авторами идентифицированы перспективные для изучения полиметоксилированные флавоноиды,

являющиеся хемотаксономическими маркерами для растений рода первоцвет

(8-метокси-флавон, флавон, 3’,4’-метиленди-окси-5’-метокси-флавон) (Таблица 15).

Так, авторами выделено вещество в спектрах ЯМР 13С которого представлены сигналы восьми четвертичных углеродных атомов, одной СН2-групп, семи СН- и одной ОСН3-групп. Сигналы карбонильного С-4 (δС 178.34) углеродного атома, а также углеродных атомов двойной связи С-2 (δС 162.96) и С-3 (δС 106.93) обладают характеристичными значениями химических сдвигов 1,3-замещенной (т. е. положение 3 по отношению С=О)

еноновой системы .

Положение 7-метокси-1,3-бензодиоксольного заместителя в 4Н-хромен- 4-оне установили на основании сильнопольных сигналов протона Н-3 (δН 6.72)

и его углерода С-3 (δС 106.93). Это характерно для протона еноновой двойной связи находящегося в области экранирования магнитно-анизотропной группы С=О, что приводит к смещению сигнала в спектре в более сильное поле (если бы протон находился в положении С-2, а бензодиоксольный заместитель в С-3,

то сигналы Н-2 регистрировались бы в более слабом поле в области 8.1–8.5

м.д.).

149

метоксифлавон (2-(7-метокси-1,3-бензодиоксол-5-ил)-4H-хромен-4-он), УФ – спектр в спирте этиловом: λ max 219 , 337, 410 нм.

Данное соединение 3’,4’-метилендиокси-5’-метоксифлавон выделено авторами из травы первоцвета весеннего впервые (патент № 2532999 от

20.01.15) (рисунок 25) [Латыпова et al., 2013].

O

Рисунок 25 – Структурная формула 3’,4’-метилендиокси-5’-метоксифлавона Кроме полиметоксилированных флавоноидов авторами также были выделены агликоны флавоноидов (апигенин, кверцетин, кемпферол); флавоноидные гликозиды (цинарозид, рутин, гиперозид) (таблица 2)

[Латыпова et al., 2009; 2011].

Таблица 14 – Биологически активные соединения, выделенные из первоцвета весеннего