6 курс / Судебная медицина / Руководство_по_судебной_медицине_В_В_Томилин,_Г_А
.pdfего выявлении основана клиническая проба Ашгейма—Цондека. Она до- статочно сложная, поэтому в судебной медицине не применяется. Можно использовать иммунологическую пробу, которая основана на следующем. Хорионический гонадотропин (ХГ) обладает антигенными свойствами и для его выявления можно использовать преципитацию, иммуноэлектрофо- рез, реакцию связывания комплемента. ХГ присутствует в крови и моче бе- ременных; после родов или аборта он исчезает. Если антиген ХГ присутст- вует в пятне, то антитела к ХГ инактивируются, не связываются с эритро- цитами, сенсибилизированными гормоном. Результатом реакции при та- ком условии будет выпадение на дне пробирки осадка в виде кольца. Если гормон отсутствовал, то неактивированные антитела влияют на эритроциты и последние равномерно распределяются по дну пробирки. Безусловно, на результаты реакции влияют многие факторы, в частности давность образо- вания следа, условия хранения. В реакцию обязательно вводят контроли —
кровь или мочу беременной и небеременной женщины с разными сроками давности беременности.
Существует еще один способ определения бывших беременности и родов — это выявление лейцинаминопептидазы. Этот фермент появляется на 8—10-й неделе беременности как добавочная фракция сыворотки крови. Количество фермента заметно увеличивается к концу беременности, после родов в течение 3 нед он исчезает. В пятнах при надлежащем хранении фермент обнаруживается в пределах 40—50 дней после родов или аборта.
Давность образования пятен крови — очень сложный вопрос, который пытаются разрешить в течение очень длительного времени, однако метода, с помощью которого можно было бы дать однозначный ответ, пока нет.
Использование предложенных методик очень зависит от условий хранения вещественных доказательств, поэтому получают весьма неконкретные ре- зультаты.
Определение половой принадлежности крови основано на обнаружении половых меток — Х- и Y-хроматина. У мужчин и женщин набор половых хромосом различный: у женщин XX, у мужчин — XY. От 30 до 75 % жен- ских клеток содержит Х-хроматин, в мужских клетках Х-хроматина либо вообще нет, либо он встречается только в 10—14 % случаев.
Что касается крови, то в ней половые различия обнаруживаются в ядрах сегментоядерных лейкоцитов, в которых имеются полоспецифические от- ростки типа А — барабанные палочки и Б — узелковые выросты. Лейкоци- там у мужчин подобные образования практически несвойственны, а если и встречаются, то в ничтожном проценте случаев: иногда 3 палочки или до 9 узелков на 500 лейкоцитов. Указанные отростки выявляют окраской при- готовленных из вытяжек пятен крови препаратов по Романовскому—Гимзе, Фельгену и др.
Y-хроматин содержится в ядрах разных клеток крови, здесь его встреча- емость равна таковой в соматических клетках. Y-хроматин выявляют под люминесцентным микроскопом после окраски препаратов растворами кра- сителей акрихинового ряда.
В связи с тем что разные клеточные элементы подвержены различным негативным изменениям под действием неблагоприятных внешних воздей- ствий (влажность, высокая температура, бурное развитие микроорганиз- мов), исследования с целью определения пола по этим элементам очень часто дают отрицательные результаты из-за непригодности подобных кле- ток для изучения.
Представляет интерес вопрос о смешанной крови — речь идет о смеше- нии крови человека и какого-либо животного. Ранее следы такой крови ни-
413
какому дальнейшему исследованию не подвергались из-за высокой вероят- ности получения ложных данных о группе крови человека. Это связано с тем, что все животные дифференцированы в групповом отношении по раз- личным системам. Ю.И.Бураго разработал методику, которая позволяет в следах смешанной крови выявлять антигены, присущие только человеку и дает возможность устанавливать группы по системам ABO, Gm и Нр общеп-
ринятыми для указанных систем методиками при некоторых изменениях ряда условий опытов.
Особого внимания заслуживает вопрос о влиянии микрофлоры на вы- явление в следах крови антигенов системы АВО. Большинство образцов по- падает в лаборатории после содержания их в самых неблагоприятных усло- виях, что вызывает изменение биологических следов на вещественных до- казательствах — чаще всего гнилостные изменения пятен крови. В таких пятнах активно развиваются колонии самых различных микроорганизмов, которые обладают антигеноподобными свойствами, что может существенно влиять на результаты реакций, проводимых с этими пятнами при постановке абсорбции—элюции. Известно, что присутствие кокковой флоры приводит к выявлению антигеноподобного свойства А, дрожжей — 0 и т.д. При рабо- те с гнилостно измененными следами О.В.Болдырева рекомендует прово- дить посевы вытяжек из таких следов на специальные среды, уточнять вид микроба и в посеянных участках проводить реакции для выявления антиге- нов. Только такой подход может помочь объективно оценить результаты, что в свою очередь повышает достоверность экспертных выводов.
Глава 38
Экспертиза възделешш, костей9 ногтей, зу-
бов и мышц
К выделениям человеческого организма, являющимся объектами иссле- дования эксперта-биолога, относятся сперма, влагалищное содержимое, слюна, моча, пот, кал, женское молоко, выделения из носа. Перечисленные выделения относительно редко встречаются в изолированном виде, чаще всего они смешаны с кровью или друг с другом в разных вариантах, что ус- ложняет их исследования.
38.1. Исследование спермы
Наиболее частым объектом экспертизы является сперма, обнаружение которой при половых преступлениях является чрезвычайно важным веще- ственным доказательством.
Обнаружение следов спермы. Сперма состоит из форменных элементов (сперматозоидов, лейкоцитов, клеток эпителия) и семенной плазмы, в ко- торой во взвешенном состоянии находятся перечисленные морфологичес- кие структуры. На обнаружении составных частей спермы основываются многочисленные методики ее выявления на вещественных доказательствах.
М о р ф о л о г и ч е с к и й м етод . Цель метода — обнаружение спер- матозоидов, отличающихся от любых иных образований по специфике своего строения. Положительный результат является основанием для кон- кретного экспертного ответа.
414
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Сперматозоиды из пятна сначала извлекают, затем, после специальной окраски, находят их под микроскопом.
«Скоростной» способ: из пятна вырезают кусочек ткани, тщательно его разволокняют, окрашивают любым основным красителем и сразу же мик- роскопируют под большим увеличением. Если размер пятна позволяет, то исследуют несколько участков. Метод довольно часто дает отрицательные результаты из-за недостаточно тщательного извлечения сперматозоидов при разволокнении участка ткани, неэффективен при малом количестве спермы и т.д. Наиболее рационально пользоваться иной модификацией.
Метод концентрированного извлечения сперматозоидов: из разных мест изучаемого следа вырезают нити ткани и, объединяя их по 10—12, помеща- ют в центрифужные пробирки, заливают с избытком раствором аммиака или уксусной кислоты (10—25 % в зависимости от состояния пятна); экст- рагируют в течение 18—20 ч при комнатной температуре или в условиях холодильника. Затем жидкости центрифугируют, осадки при необходи-
мости несколько раз путем центрифугирования отмывают и готовят из них тонкие мазки. После высушивания мазки фиксируют спиртом, окрашива- ют либо раствором фуксина, либо азур-эозином, либо иными основными красителями, затем микроскопируют при большом увеличении или под «иммерсионным» объективом. Обнаружение сперматозоида (головка, шейка, хвост или его часть) — положительный результат: сперма в пятне на вещественном доказательстве имеется. Известно, что по самым различным причинам (микрофлора, влагалищный секрет, центрифугирование) доволь- но быстро разрушаются хвосты сперматозоидов, а обнаружение только го- ловки по старым «канонам» не давало права на положительный ответ. В на- стоящее время (С.И.Любимская и др.) при окраске препарата азур-эозином в «иммерсионном» микроскопе в головке сперматозоида четко различают все ее части, что абсолютно исключает ее сходство с какими-либо иными образованиями, встречающимися в подобных препаратах. При такой под-
готовке материала вывод о наличии спермы может быть сделан только на основании обнаружения сохранившихся головок сперматозоидов.
Метод отпечатков: иногда надо исследовать предметы, из которых не- возможно сделать вырезки или соскобы. При таком варианте следует при- менить метод отпечатков — прикладывание к пятну увлажненного мате- риала, клейкой ленты, придавливание к пятнам влажных предметных сте- кол на длительное время и т.п. Сперматозоиды переходят во влажную на- бухшую среду, далее после окрашивания их отыскивают под микроско-
пом.
Несмотря на значительную трудоемкость, морфологические методики очень информативны и их следует отнести к первоочередным при экспер- тизе спермы.
Ф е р м е н т н ы й м е т о д . Метод основан на том, что содержание кислой фосфатазы (КФ) в сперме в сотни раз превышает ее количество в других биологических субстратах. Поэтому при определенных параметрах опыта можно подавить активность КФ в различных биологических средах, кроме спермы. Часто получаемые результаты позволяют решить вопрос о наличии спермы.
К навеске из исследуемого пятна (при обширном пятне материал выре- зают из разных мест и готовят такое количество навесок по 3 мг, которое охватывает как можно большую площадь пятна) добавляют субстратную смесь по 1 капле и 3 капли ингибитора (винная кислота). Смеси в течение 3 ч выдерживают в термостате при 37 °С. После этого добавляют индика- тор — 25 % раствор аммиака. Если в объекте была сперма, то активность
415
КФ спермы не будет ингибирована и цвет жидкости в пробирках станет ма- линовым или розовым. В отсутствие спермы жидкости бесцветные.
Эту реакцию нужно применять в случаях необнаружения спермы с по- мощью морфологических методов, так как нельзя исключить вероятность того, что имеет место случай азооспермии или некроспермии и именно поэтому морфологический анализ дал отрицательный результат.
Методика имеет много недостатков: давать положительный результат могут некоторые соки, пятна с примесью кала; нецелесообразна реакция в следах с примесью крови (темная вытяжка не позволяет определить истин- ный цвет); при небольшой примеси спермы можно получить ложноотрица- тельный результат и т.д. Поэтому многие исследователи склонны считать метод подавления активности КФ ориентировочным. Учитывая перечис-
ленные отрицательные моменты при получении положительного результата реакции, необходимо дополнительно провести морфологический анализ или абсорбцию—элюцию для выявления несвойственного потерпевшей антигена (при разногруппности крови проходящих по делу лиц). По сово- купности полученных результатов иногда можно сделать конкретный вы- вод. Как ориентир следует проводить работу на специальных полосках — фосфотест.
Ф и т о а г г л ю т и н а ц и о н н ы е м ет о д ы . Экстракты из некото- рых растений могут изменять агглютинабельные свойства эритроцитов, что обусловлено присутствием в этих растениях агглютининов. В судебно-ме- дицинских целях используют сок клубней картофеля, который агглюти- нирует эритроциты всех групп по системе АВО, в основном эритроциты группы 0. Оказалось, что наличие спермы в объекте вызывает торможение агглютинации этих эритроцитов.
В картофельном соке содержится витамин С, в сперме — тестостерон, который блокирует способность витамина С агглютинировать эритроциты. В пробирках соединяют 1 каплю вытяжки из исследуемого объекта, 1 кап- лю картофельного сока в титре 1:32 и 1 каплю 1 % взвеси эритроцитов группы 0. В течение 10 мин смеси центрифугируют при 3000 об./мин и после встряхивания невооруженным глазом учитывают результаты. Отсут- ствие агглютинации позволяет предположить наличие спермы. Ответ пред- положительный из-за недостаточной специфичности методики (может быть задержка агглютинации с соками ряда фруктов, мочой больных сахар- ным диабетом и др.). Кроме того, отрицательный результат связан и с ма- лым количеством имеющейся спермы. Следует учитывать и то, что многие сорта картофеля не обладают нужными для реакции свойствами.
Перечисленные моменты значительно влияют на экспертную тактику. Так же как и при подавлении активности КФ ингибитором, следует ис-
пользовать морфологический анализ участков при положительной реакции с картофельным соком; при отрицательных результатах поисков спермато- зоидов и разногруппности крови потерпевших и обвиняемых нужно про- вести реакцию для выявления антигенов, не свойственных потерпевшим.
Описанный метод очень удобен как предварительный при исследовании пропитанных кровью вещественных доказательств, когда применение кон- центрированного извлечения сперматозоидов затруднено: положительные результаты позволяют ограничить площадь пятна, которое можно затем ис- следовать морфологически.
Х р о м а т о г р а ф и я . С помощью тонкослойной хроматографии на бумаге выявляют холин и спермин спермы. Однако эти компоненты могут присутствовать и в других биологических субстратах, правда, в ничтожно малом по сравнению со спермой количестве, но высокочувствительная хро-
416
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
матография может выявить и эти количества и тем самым дать ложнополо- жительный результат. Метод достаточно трудоемок, его проведение требует значительного времени, поэтому он не нашел широкого применения как способ обнаружения спермы.
Для хроматографии чаще используют среднебегущую хроматографичес- кую бумагу (-3, -4). Камера — прямоугольная банка высотой не менее 30 см. Растворитель универсальный (бутанол, ледяная уксусная кислота и дистил- лированная вода). Размер образца из изучаемого пятна 0,5x0,7 см. Образец обрабатывают 1 % раствором фосфатфталеина натрия, приготовленным на ацетатном буфере. Обработанные кусочки вставляют в сделанные на бумаге прорези, бумагу помещают в камеру. Разгонка протекает в термостате при 37 °С в течение 5—6 ч. Затем хроматограмму извлекают из камеры, отмечают на ней карандашом фронт разгонки. Бумагу подсушивают и проявляют с по- мощью специально приготовленного проявителя, в состав которого входит достаточно большое количество компонентов (основной нитрат висмута, ле- дяная уксусная кислота, дистиллированная вода, йодид калия). При обра- ботке раствором у линии старта появляется лимонно-желтое пятно (спер- мин), а в средней части хроматограммы — розово-фиолетовое пятно (холин).
Существуют другие способы выявления спермы в следах на веществен- ных доказательствах, однако они не находят применения в лабораториях по различным объективным причинам.
Определение групповой принадлежности спермы. Антигены системы АВО содержатся в сперматозоидах и жидкой части спермы. Для практической су- дебной биологии очень важное значение имеет существенная разница в ко- личестве антигенов в крови и выделениях одного человека. Это связано с тем, что не исключена вероятность такого варианта, когда из-за этой разни-
цы может возникнуть кажущееся несоответствие между группой крови и группой выделений у одного и того же человека, что в результате окажет от- рицательное влияние на экспертные выводы. Поэтому при экспертизе поло- вых преступлений рекомендуется параллельно с кровью исследовать в каче- стве образца сперму подозреваемого. Подобные рекомендации давались давно (П.Н.Косяков), однако им не придавали большого значения. Необхо- димость такого подхода можно проиллюстрировать примером, касающимся Чикатило, выделения которого содержали два антигена — А и В, а кровь — только один А. Подобный случай произошел в Иоганесбурге: долгое время маньяк терроризировал город, насилуя и убивая женщин, а задержан не был из-за подобного выше различия в количестве антигенов в крови и выделени- ях. Лишь по прошествии нескольких лет он был наконец задержан.
Эти примеры подтверждают необходимость при подавляющем боль-
шинстве проводимых экспертиз половых преступлений изучать образцы выделений обвиняемых и подозреваемых.
Прежде чем описывать методы выявления группоспецифических факто- ров в сперме, кратко остановимся на категории выделительства. При выяв- лении в выделениях антигенов системы АВО оказалось, что с помощью ко- личественной абсорбции приблизительно у 15—20 % человек антигены, свойственные группе их крови, не выявляются. Отсюда и возникло понятие выделительства и невыделительства. При использовании иных более чувст- вительных реакций понятие выделительства стало очень условным, так как эти реакции открывали искомое. Таким образом, различие антигенов в крови и выделениях одного и того же человека может быть выявлено толь- ко с помощью количественной абсорбции, что, безусловно, в ряде случаев
может влиять на решение вопроса о причастности или непричастности того или иного человека к преступлению.
417
27 - 2740
Преступники пытаются любыми путями уничтожать следы на веществен- ных доказательствах, поэтому очень часто эксперты имеют дело с ничтожно малыми остатками следов, что не позволяет использовать количественную абсорбцию. Все остальные методики как бы «уравнивают» людей, так как от- крывают антигены в сперме независимо от их выраженности. Кроме того, очень часто половые преступления совершает группа лиц, в этом случае ка- тегория выделительства не окажет влияния на выводы. При смешении спер-
мы с кровью категория выделительства при одногруппности проходящих по делу лиц также не повлияет на экспертное решение. Итак, понятие «катего- рия выделительства» условно, за исключением только одного варианта — ис- тинного невыделительства антигенов (отсутствие 1-й активной фракции при электрофорезе в геле), что встречается весьма редко. Условность понятия требует и соответствующего к нему отношения: в каждом конкретном случае необходимо весьма индивидуально подходить к решению вопроса о возмож- ности использования данного признака в проводимой экспертизе.
Категорию выделительства определяют по слюне, сперме, желчи, если речь идет о трупе, по крови (система Le). Категорию выделительства следу- ет учитывать и при проведении экспертиз по установлению кровного род- ства (у двух родителей-невыделителей не может быть ребенка-выделителя).
Антигены системы АВО в сперме и других выделениях выявляют теми же методами, что и в крови (количественная абсорбция, абсорбция—элюция и реакция смешанной агглютинации). В принципе эти методы не имеют очень существенных различий, за исключением абсорбции—элюции: при исследо- вании выделений рекомендуется материал фиксировать кипячением в дис- тиллированной воде, а не спиртом. Это связано с тем, что высокий титр ан- тигенов выделений (в частности, спермы) при абсорбции обусловливает формирование такого прочного комплекса антиген—антитело, который при элюировании не разрушается (это приводит к невыявлению антигена). Если же эксперт все-таки применил фиксацию спиртом, то после абсорбции не- обходимо проанализировать «истощение» реагентов, и если оно произошло, то антиген следует считать выявленным и не проводить дальнейшее элюиро- вание. При фиксации кипячением в дистиллированной воде происходит не только фиксация агглютининов, но и ослабление антигена. Поэтому все ос- тальные фазы реакции остаются «правомочными» и проводятся по аналогии с исследованием крови в данной реакции. Для абсорбции используют изосы- воротки анти-А и анти-В в титре 1:128 (выявляют антигены А и В), для обна-
ружения антигена Н применяют реагенты растительного происхождения или
моноклональную сыворотку анти-Н также в титре 1:128.
В связи с тем что изолированные пятна спермы встречаются чрезвычайно редко и исследуют обычно следы спермы, смешанные с кровью, влагалищ- ным содержимым, слюной, особую актуальность приобретает вопрос о спо-
собах дифференцировки антигенов выделений или антигенов крови и выделений.
Групповые факторы крови и выделений имеют идентичные антигенные детерминанты, которые связаны с различными молекулярными структура- ми. Практически при экстрагировании следов в изотонический раствор
хлорида натрия и при дальнейшем переносе экстракта на ткань в пятнах крови и выделений одновременно выявляются как антигены крови, так и антигены всех выделений. При температурной обработке (100 °С в течение 90 мин или 120 °С — 60 мин) выход антигенов крови в водные экстракты блокируется, а антигены выделений при такой обработке продолжают вы- ходить в раствор. Это должно быть использовано при некоторых сочетани- ях крови и выделений, например слюна + кровь, моча + кровь и др. Реко- мендуется сначала провести обычную абсорбцию—элюцию, затем элюат
418
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
прогреть и вновь провести эту же реакцию, далее сравнить результаты, ре- шить вопрос о конкретной принадлежности того или иного антигена. Спо- соб прогревания непригоден при примеси к сперме влагалищного содержи- мого, так как антигены последнего после прогревания не блокируются и выходят в раствор. Именно по этой причине результаты только прогрева- ния в большинстве случаев не решают вопроса о конкретной принадлеж- ности антигенов.
Дифференцировать антигены спермы и крови можно с помощью сыво- роток с высоким титром, что связано с описанной выше отличительной чертой этих компонентов: антигены выделений существуют в титре более высоком, чем антигены крови. При условии предварительного изучения об-
разцов проходящих по делу лиц и выяснения титра их крови и выделений в реакцию вводят сыворотки с высоким титром, предназначение которых в стадии абсорбции — полностью связать антиген крови и продолжать абсор- бировать антигены спермы. Метод на первый взгляд достаточно прост, од- нако сложности связаны с подбором имеющихся в наличии реагентов, поэ- тому этим способом практически не пользуются.
Хорошим экстрагентом для гликолипидов является система органичес- ких растворителей — смесь бутанола и метанола в соотношении 1:0,5. Экс- трагирование проводят в течение 4 ч на водяной бане при 65 °С. С по- мощью этой смеси в раствор переходят антигены крови и спермы (послед- ние по причине того, что в сперме групповые факторы представлены не только гликопротеинами, но и гликолипидами). При этом антигены слю- ны, пота, мочи не экстрагируются.
Таким образом, использование описываемой методики очень показа-
тельно при необходимости дифференцировать групповые факторы крови и антигены слюны, мочи и пота; для дифференцирования с антигенами спер- мы методика неприменима.
Достаточно распространен метод непрямой иммунофлюоресценции (см. главу 37), который позволяет выявлять антигены непосредственно в форменных элементах спермы — сперматозоидах. В следах, содержащих кровь, влагалищное содержимое и сперму, прежде всего с помощью обыч- ных реакций обнаруживают антигены системы АВО, затем (при необходи- мости) проводят иммунофлюоресценцию. Из участков следов, содержащих сперму, готовят вытяжки дистиллированной водой, осадки отмывают, из отмытых осадков на обезжиренных предметных стеклах делают очень тон- кие округлые мазки. После фиксации мазки абсорбируют заранее подо- бранными сыворотками. Абсорбция протекает от 3 ч при комнатной темпе- ратуре до 18 ч в условиях холодильника, 5 раз отмывают. К подсушенным мазкам добавляют соответствующие красящие сыворотки, абсорбция с ш- торыми во влажных камерах протекает в течение 1 ч. Затем их снова отмы- вают, результат учитывают под люминесцентным микроскопом (водная или масляная иммерсия). При правильной постановке реакции присутст- вие антигенов вызывает ярко-зеленое свечение сперматозоида.
Этот метод трудоемок, достаточно сложен, однако получаемые резуль- таты могут стать неоценимыми для решения вопроса о конкретной принад- лежности спермы. Самым точным методом, данные которого однозначно свидетельствуют об источнике происхождения спермы в следах на вещест- венных доказательствах, безусловно, является генетическая дактилоскопия.
Дифференцирование одногруппной по системе АВО спермы в некоторых случаях при определенном соотношении групп у участников происшествия может быть произведено по системе Gm. Некоторые сложности в проведе- нии этой реакции могут быть связаны с тем, что у некоторых женщин группа
419
27*
их влагалищного содержимого может не совпадать с группой крови и такое,
пусть даже редкое, явление иногда приводит к получению ложных результа- тов. Поэтому в реакцию должны быть введены необходимые образцы.
38=2. Исследование слюны
Обнаружение наличия слюны. В экспертной практике слюна может
встречаться в виде образца для определения категории выделительства в экспертизах, связанных с половыми преступлениями, или в виде вещест- венного доказательства: это могут быть окурки, предметы с пятнами слю- ны, смешанной с какими-либо иными биологическими субстратами.
Определение наличия слюны основано на выявлении амилазы, которая находится в слюне в количестве, превышающем таковое во всех иных выде- лениях. Амилаза расщепляет крахмал и лучше проявляет свою активность в солевом растворе. Эти свойства фермента и легли в основу большинства методов для установления наличия слюны. Наиболее часто в лабораториях используют реакцию Мюллера в модификации Л.О.Барсегянц. Небольшую
навеску из пятна и контрольного образца помещают в толуол для удаления загрязнений, затем добавляют свежеприготовленный солевой раствор кар- тофельного крахмала. Смеси оставляют на 20 ч в термостате при 37 °С. После извлечения из термостата в пробирки вносят по 1 капле разведенно- го в 3 раза раствора Люголя. Если в образце была слюна (амилаза), то про-
изойдет расщепление крахмала и при добавлении раствора йода жидкость останется светлой, прозрачной. Если слюна отсутствовала, то крахмал оста- ется в неизмененном виде и добавление раствора Люголя окрасит содержи- мое пробирок в синий цвет. Реакция достаточно чувствительна и способна улавливать незначительную примесь слюны на предметах.
В последнее время появились различные модификации этого метода, целью которых является сокращение сроков реакции и уменьшение коли- чества затрачиваемого материала. Интересна методика, разработанная А.Л.Федоровцевым. На предметные стекла наносят 1 % раствор агара, при- готовленный на 2 % растворе картофельного крахмала на изотоническом растворе хлорида натрия. Толщина слоя 1 мм. В реакцию можно вводить непосредственно кусочек пятна (1—5 мг) или смыв с пятна, сделанный марлей. Пятно или смыв с него в течение 1 ч экстрагируют в нескольких каплях изотонического раствора хлорида натрия при комнатной температу- ре. Параллельно исследуют контроль — известный образец слюны, разве- денной в 500—1000 раз. Экстракты вносят в лунки, сделанные в агаре на расстоянии 1—1,5 см друг от друга. Препараты в течение 2 ч инкубируют во влажных камерах в термостате при 37 °С. После этого стекла погружают в раствор Люголя. Крахмально-агаровый гель окрашивается в синий цвет, а вокруг лунок с вытяжками, если в последних была слюна, остаются неокра- шенные участки в виде колец. Если слюна отсутствовала, то такое неокра- шенное кольцо будет лишь вокруг контрольного образца. Реакция очень показательна, не требует много времени и дает хорошие результаты с объ- ектами чрезвычайно малой величины.
Определение групповой принадлежности слюны. Групповую принадлеж- ность слюны по системе AB0 вывляют по тому же принципу, что и при ис- следовании спермы.
Некоторые особенности нужно иметь в виду при работе с окурками; если они имеют следы пребывания во рту, то слюну на них с целью эконо- мии материала не определяют, а сразу же приступают к работе по выявле-
420
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
нию группоспецифических факторов. В дальнейшем, если в результате про- веденных исследований не будут выявлены никакие антигены, в навесках устанавливают присутствие слюны. Нужно помнить, что некоторые люди курят «сухо», т.е. практически не оставляют слюны на окурках. В подобных случаях в качестве контроля следует представлять выкуренный этим чело-
веком экспериментальный окурок и после сопоставления данных делать
соответствующие выводы.
По иным системам, кроме системы АВО, исследование слюны не прово- дится.
383. Исследование нота
Обнаружение наличия пота. Пот является довольно частым объектом экспертного исследования. Это объясняется тем, что изучаемые следы крови, спермы, слюны находятся на предметах одежды и поэтому в боль- шинстве случаев смешаны с потом. Обладая групповой дифференцировкой по системе АВО, пот отрицательно влияет на результаты многих экспертиз,
что побуждает исследователей при решении вопроса о причинах неудач при определении групп крови или спермы выявлять присутствие пота в изучае- мых следах. Кроме того, следствие часто интересует вопрос о наличии пота на различных орудиях убийства, петлях-удавках и т.п. В некоторых случаях пот на предметах одежды можно исследовать в качестве образца для уста-
новления группы крови известного образца неизвестных скелетированных трупов или расчлененных частей неизвестного человека и т.д..
Выявление пота основано на обнаружении аминокислот, в частности серина, количество которого в поту превышает его количество в других вы- делениях. Безусловно, наиболее доказательной является химическая реак- ция окисления серина перйодатом натрия с образованием формальдегида, дающего цветную реакцию с хромотроповой кислотой. Однако этот метод сложен, требует использования многих труднодоступных реагентов и по- этому в настоящее время не используется.
Х р о м а т о г р а ф и я . В повседневную практику вошел предложенный
М.В.Кисиным метод определения наличия пота с помощью тонкослойной хроматографии на силуфоле. Реакцию проводят по тому же принципу, что и определение наличия крови: разгонка протекает в той же среде, проявителем служит 1 % спиртовой раствор нингидрина; перед обработкой хроматограм- мы нингидрином и после обработки пластинки силуфоля прогревают.
Благодаря высокой чувствительности метода серии можно обнаружить не только в следах пота, но и других выделениях. По этой причине резуль-
таты тонкослойной хроматографии при определении наличия пота без учета некоторых моментов не могут быть признаны строго специфичными и абсолютно достоверными. Прежде чем однозначно оценить положитель- ный результат, необходимо провести дополнительные исследования изуча- емого объекта и исключить присутствие в нем мочи, слюны и спермы. При таких условиях ответ о наличии пота может быть утвердительным. Кроме того, следует учитывать, о каком предмете идет речь: если это стельки обуви, головные уборы и др., то задача эксперта в отношении оценки ре- зультатов облегчается, а если исследовать надо следы на ветках, древесине, в пятнах с возможной примесью соков, то в реакцию следует вводить боль- шое количество контролей, поскольку исследование таких предметов мо- жет дать ложноположительные результаты из-за присутствия в них ами- нокислот. Особенно осторожно подходят к анализу подноттевого содержи-
421
мого, следов на нижнем белье, смывов с различных частей тела, так как там могут присутствовать иные выделения, содержащие соответствующие ами- нокислоты. При подобных исследованиях в реакцию необходимо вводить большое количество контролен и проводить исследования на предполагае- мые иные выделения.
Определение групповой принадлежности пота. Антигены системы АВО выявляют методом абсорбции — элюции. В реакцию можно вводить как фиксированный, так и нефиксированный материал. Контроль — предмет- носитель — обязательно подбирают с помощью реакции тонкослойной хро- матографии для определения наличия пота. Антигены в поту выражены до-
вольно слабо и поэтому продолжительность абсорбции должна быть не менее 18—20 ч. При укороченной 2-часовой абсорбции антигены пота обычно выявить не удается, и такое различие во времени может быть ис-
пользовано для дифференцирования антигенов пота и крови или пота и спермы либо слюны. Кроме того, при экстрагировании в бутанол или смесь с бутанолом антигены пота в экстракт не переходят и, таким образом, их также можно отделить от антигенов крови и спермы.
38.4.Исследование мочи и кала
Вкачестве объекта исследования в экспертизах вещественных доказа- тельств моча и кал встречаются довольно редко. Подобные вопросы инте- ресуют следствие при проведении экспертиз половых преступлений, когда
влаборатории направляется постельное или нижнее нательное белье; кро- ме того, вопрос о наличии мочи может возникнуть при изнасиловании ма- лолетних детей.
Определение наличия мочи. Химический метод определения наличия мочи в следах на вещественных доказательствах довольно сложен, поэтому
влабораториях используют тонкослойную хроматографию на силуфолевых пластинках. Принцип метода аналогичен таковому при определении нали- чия крови, отличие — в проявлении пластинок после разделения: пластин- ки проявляют парадиметиламинобензальдегидом, выявляя тем самым зоны мочевины. Наличие мочи можно установить и по креатинину, но в этом случае проявителем служат пары йода. Для контроля в реакцию вводят вы- тяжки из заведомо известного образца мочи; при сравнении полученных
данных с контрольными результатами решают вопрос о присутствии мочи в следах на вещественных доказательствах.
Определение видовой принадлежности мочи. Если уточнение вопроса о присутствии мочи не представляет особой сложности, то определение ви- довой принадлежности мочи достаточно затруднено: все реакции для уста-
новления видовой принадлежности основаны на видовой специфичности белка, а в нормальной моче белка практически нет, поэтому общеприняты- ми реакциями установить ее вид практически невозможно. Решить эту за-
дачу можно только при использовании высокочувствительного метода встречного иммуноэлектрофореза на мембранах из ацетатцеллюлозы, однако следует иметь в виду, что и эта реакция в ряде случаев оказывается без- результатной. -Некоторые исследователи предлагают основываться на выяв- лении в пятнах мочи антигена Н, присущего человеку. В то же время в ли- тературе имеются данные об ошибочности подобного мнения. Были по- пытки устанавливать вид мочи с помощью непрямой иммунофлюоресцен- ции, но из-за того, что моча и без специальной обработки дает достаточно яркое свечение, эта методика неприемлема.
422
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/