6 курс / Судебная медицина / Актуальные_вопросы_судебно_медицинской_экспертизы_трупа_В_Клевно

Бычков В.А., Бушуев Е.С.

ОБНАРУЖЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ТАЛЛИЯ ПРИ ХИМИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ

Санкт-Петербург

Таллий и его соединения являются кумулятивным ядом, токсичным при принятии внутрь, вдыхании и при контакте с кожей. Отравления соединениями таллия чаще встречаются при случайном их приеме. Однако в судебномедицинской практике встречаются случаи, когда соединения таллия использовались с суицидной и нередко с криминальной целью.

Клиническое проявление действия нарушений, вызываемых таллием в организме человека, зависит от дозы яда, типа экспозиции и пути поступления отравляющего вещества. Необходимо отметить, что ранние симптомы отравления, к которым относятся общая слабость, тошнота (иногда рвота), бессонница, повышенное слюноотделение, энтерит, температурная реакция – настолько неспецифичны для отравления именно таллием и его соединениями, что их обычно относят к погрешностям в диете, простудным заболеваниям или пищевыми интоксикациями.

Наиболее выраженная клиническая картина отмечается через 2-3 недели от момента отравления. По мере кумуляции эффекта отравления развивается умеренная гипертензия, тахикардия, перебои в сердце. К этим симптомам присоединяются сенсорные нарушения в виде парастений, онемения рук, губ, а также сопутствующие парастениям боли, которые являются достаточно специфическим признаком интоксикации таллием.

Токсическое действие таллия усугубляется обезвоживанием организма и быстро приводит к тяжелым осложнениям, в частности, к судорогам, интоксикационным психозам, коме и смерти.

Алопеция, развивающаяся на 2-4 неделе от момента отравления, является наиболее характерным клиническим признаком, позволяющим установить диагноз поражения солями таллия.

Однако, при производственных отравлениях, когда воздействие обычно умеренное, но продолжительное, потеря волос может быть поздним симптомом и часто заметна только после проявления полиневрита. В случаях же легкого отравления потеря волос может не отмечаться. Долговременные эксперименты с радиоактивным таллием показали значительное выделение таллия, как с фекалиями, так и с мочой. При проведении аутопсии, наибольшая концентрация таллия была выявлена в почках, но умеренные концентрации могут обнаруживаться в печени, других внутренних органах, мускулатуре и костях.

Диагностика отравления таллием и его соединениями особенно на первоначальном этапе интоксикации должна быть подтверждена результатами химического анализа.

Следует отметить, что обнаружение таллия по цветной реакции взаимодействия с малахитовым зеленым, достаточно трудоемко.

расшифровывались с использованием спектропроектора и таблиц «Атлас спектральных линий для кварцевого спектропроектора». В результате расшифровки спектрограмм в спектрах двух анализируемых порошков установлено наличие аналитических длин таллия (λ=377,1 нм; λ=351,9 нм).

Определение соединений таллия химическим методом проводили по известной реакции взаимодействия с малахитовым зеленым после проведения минерализации объектов смесью концентрированных серной и азотной кислот. При этом толуольный слой окрашивался сине-голубой цвет.

По реакции взаимодействия водного раствора части порошков с хлоридом бария в присутствии раствора хлористоводородной кислоты наблюдалось образование белого цвета осадка, не растворимого в минеральных кислотах и щелочах. Это испытание позволило заключить, что в исследуемых порошках присутствует таллий в виде сернокислой соли (таллия сульфат).

Наличие сахара в порошках было установлено по реакциям взаимодействия с реактивом Фелинга и резорцином.

На основании результатов спектрального анализа, а также осадительных и цветных реакций было сделано заключение о присутствии в порошках белого цвета из сахарницы и полиэтиленового пакета сахара и таллия сульфата.

Концентрация сульфата таллия в порошке из сахарницы составляла 2,04%, а в порошке из полиэтиленового пакета – 1,64%.

Для обнаружения соединений таллия в моче биообъект высушивался досуха. Остаток измельчался в ступке до мелкодисперсного состояния, и часть полученного порошка исследовался в диапазоне 990-1250 mA. В остатке методами РФСА и ЭСА обнаружены полосы, характерные для таллия.

Таким образом, при отсутствии в лаборатории, проводящих химикотоксикологическое исследование объектов на присутствие токсичных элементов, современного спектрального оборудования, каким является МС-ИСП, доказательство таллия может быть с успехом проведено методами ЭСА и РСФА.

Годунов А.В., Волченко С.В., Киреева А.В., Федоров Д.Б.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТАБОЛИТОВ ГЕРОИНА В ВЫСУШЕННОЙ КРОВИ

(случай из практики)

Ленинградская область

Впрактике судебно-химического отделения Бюро судебно-медицинской экспертизы Ленинградской области встретился случай определения метаболитов героина в высушенной крови.

Вавгусте 2002 года в лабораторию были доставлены кровь и почка гр. N с целью определения этилового спирта и его суррогатов. Труп гр. N был обнаружен

влегковом автомобиле. С выраженными гнилостными изменениями. При судебно-химическом исследовании в крови гр. N обнаружен этиловый спирт в концентрации 0,5‰. В почке этиловый, метиловый, пропиловые, бутиловые, амиловые спирты не обнаружены.

В2008 году Следственное Управление Следственного Комитета возбудило уголовное дело по убийствам, в том числе гр. N, путем введения жертвам наркотических средств. В связи со вновь открывшимися обстоятельствами было проведено судебно-химическое исследование на наркотические вещества объектов от трупа гр. N (высушенная кровь, ногти), сохранившихся в биологическом отделении.

По данным эксперта биологического отделения количество сухого объекта соответствовало 1 мл крови. Высушенную кровь растворяли в 3 мл изотонического раствора натрия хлорида, добавляли 10 мкл метанольного раствора налорфина с концентрацией 358 нг/мл (внутренний стандарт), 1 мл карбонатного буфера до рН среды 9,0-10,0 и экстрагировали смесью изопропанол-гептан-метиленхлорид-дихлорэтан. Органическую фазу отделяли пастеровской пипеткой, испаряли в токе азота досуха. К сухому остатку добавляли по 50 мкл этилацетата и пентафторпропионового ангидрида, смесь термостатировали при 75оС 20 мин. По истечении времени смесь испаряли досуха в токе азота, сухой остаток растворяли в 250 мкл этилацетата и 2 мкл вводили в инжектор хроматомасс-спектрометра.

Навеску фрагментов ногтевых пластин (0,23 г) промывали метиленхлоридом, высушивали. Фрагменты измельчали на шаровой мельнице, заливали 1 мл раствора кислоты хлористоводородной 1М и помещали на ультразвуковую баню на 20 мин., после чего нагревали при 60оС в течение 1 ч. Надосадочную жидкость отделяли, подщелачивали до рН среды 10,0 и экстрагировали смесью изопропанол-гептан-метиленхлорид-дихлорэтан. Дальнейшие исследования проводили по вышеописанной методике.

Условия ХМС-исследования: Газовый хроматограф”Agilent Technologies” 6890 N с масс-селективным детектором 5973 N; колонка капиллярная 30 м х 0,25 мм; температура инжектора 260оС, интерфейса - 290оС, источника - 230оС; температура термостата колонок программируемая: Тнач. - 60оС, затем нагревание колонки со скоростью 20оС/мин до 290 оС с последующей изотермой

15 мин; скорость газа-носителя (гелия) 1 мл/мин, ввод пробы без деления потока; режим работы детектора – селективный ионный мониторинг.

При хроматомасс-спектрометрическом исследовании высушенной крови и ногтевых пластин были идентифицированы пики пентафторпропионильных производных морфина и 6-моноацетилморфина. В результате было дано заключение об обнаружении в высушенной крови и ногтевых пластинах морфина и 6-моноацетилморфина. Содержание морфина в крови составило 996 нг/мл.

Киреева А.В., Волченко С.В., Куклин В.Н.

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ НЕНАРКОТИЧЕСКИХ И НАРКОТИЧЕСКИХ АНАЛЬГЕТИКОВ

Ленинградская область

Злоупотребление наркотическими веществами относится к разряду наиболее важных социальных проблем. Постоянно ведутся поиски новых соединений по анальгезирующей активности, не уступающие, а по безопасности значительно превышающие препараты сегодняшнего дня. Особую озабоченность вызывает злоупотребление лекарственными препаратами, обладающими обезболивающим эффектом и используемыми в качестве наркотических средств в период абстиненции. К этим препаратам относятся диклофенак, кетеролак, декстрометорфан, бутарфанол и др.

Отравления вышеперечисленными препаратами, включая и смертельные, по данным Бюро судебно-медицинской экспертизы Северо-Западного региона имеют место в судебно-медицинской практике. Из-за отсутствия методов химико-токсикологического анализа буторфанола, декстрометорфана, кеторолака, диклофенака в вещественных доказательствах и биообъектах, в том числе при приеме совместно с другими наркотическими веществами, их обнаружение является проблематичным.

Буторфанол и декстрометорфан являются наркотическими анальгетиками, относятся к группе агонистов-антагонистов опиоидных рецепторов, по химической структуре представляют собой производные фенантренизохинолина. Кеторолак и диклофенак являются нестероидными противовоспалительными средствами, по химической структуре кеторолак относится к производным гетероарилуксусной кислоты, диклофенак - к производным фенилуксусной кислоты.

Нами была изучена зависимость влияния природы растворителя на эффективность экстракции буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака из водных растворов. В качестве экстрагентов использовались разные органические растворители и их смеси, наиболее часто применяемые в химико-токсикологическом анализе. Влияние среды на степень извлечения исследуемых веществ было изучено в интервале рН 2,0-12,0. Наилучшие результаты получены при следующих значениях рН среды: буторфанол и декстрометорфан – рН 12,0; кеторолак и диклофенак – рН 2,0. Наибольшая эффективность экстракции была достигнута при использовании: для буторфанола - смеси растворителей хлороформ-изопропанол (9:1), для декстрометорфана, кеторолака и диклофенака - хлороформа. Полученные данные использовали для изолирования буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака из лекарственных форм и биожидкостей методом прямой жидкость-жидкостной экстракции. Определение исследуемых веществ осуществлялось различными физико-химическими методами.

Метод хроматографирования в тонком слое сорбента осуществлялся на

пластинках «Сорбфил». Хроматографическая подвижность буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака определялась в разных системах растворителей в сравнении с другими нестероидными противовоспалительными и наркотическими средствами.

Сравнительный анализ буторфанола, декстрометорфана, кеторолака, диклофенака и других неопоидных и опоидных анальгетиков проводился с использованием ультрафиолетовой спектрометрии. УФ-спектры буторфанола, диклофенака, морфина и кодеина имеют близкие значения максимумов абсорбции, поэтому метод не может быть применен для анализа этих соединений

диклофенака, а также продуктов реакции буторфанола с дериватизирующими агентами (триметилсилильные и пентафторпропионильные производные) нами использовался метод хроматомасс-спектрометрии. Анализ проводился на квадрупольном хроматомасс-спектрометрическом комплексе Agilent Technologies. Установлено, что масс-спектры исследуемых веществ идентичны данным из литературы.

Разработаны условия определения буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака методом ВЭЖХ. Анализ проводился на высокоэффективном жидкостном хроматографическом комплексе НР-1100 с диодно-матричным детектором (ДМД), оснащенном микроколонкой Hypersyl ODS С18. Наилучшие результаты определения и разделения исследуемых веществ показало применение градиентного режима анализа с использованием в качестве компонентов подвижной фазы ацетонитрила и фосфатного буфера (рН 3,8), а в качестве внутреннего стандарта 5-(4-метилфенил)-5-фенилгидантоина (МРРН).

Разработанный нами метод ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта позволяет определять микроколичества лекарственных веществ в извлечениях из биологического материала и одновременно разделять, идентифицировать и производить количественное определение искомых веществ. Определение проводилось при максимумах поглощения для каждого препарата длинах волн в диапазоне концентраций 1-50 мкг/мл по предварительно построенным калибровочным графикам. Использование вышеуказанного метода позволяет определять изучаемые вещества в присутствии порядка 200 других лекарственных веществ.

Для количественного определения буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака нами также использовался метод ультрафиолетовой спектрофотометрии. в растворе кислоты хлористоводородной 0,1М при следующих длинах волн: буторфанол - 278 нм, декстрометорфан – 278 нм, кеторолак – 254 нм, диклофенак – 273 нм. Предварительно строились графики зависимости оптической плотности от концентраций искомых веществ в растворе, подчиняющиеся закону Бугера-Ламберта-Бера. Содержание веществ рассчитывалось с учетом произведенных разведений. Параллельно был разработан хроматоденситометрический метод количественного определения исследуемых веществ на пластинках «Сорбфил», расчеты производились по

калибровочным графикам. Результаты методов сопоставимы.

Разработанные методы анализа были апробированы на биологических жидкостях экспериментальных животных - белых беспородных крысах массой тела 180-220 г. Забор крови производили через 1 ч, мочу собирали в течение 24 ч. Изолирование из крови и мочи проводили с использованием натрия хлорида для осаждения белков. Для экстракции использовали прямой метод: для буторфанола - смесью растворителей хлороформ-изопропанол (9:1), для декстрометорфана - хлороформом при значении рН 12,0, для кеторола и диклофенака - хлороформом при значении рН 2,0. При исследовании препаратов в биологических жидкостях методами тонкослойной и газовой хроматографии, УФ-спектроскопии, хроматомасс-спектрометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии было установлено, что полученные данные для исследуемых веществ, выделенных из крови и мочи, были идентичны соответствующим параметрам соединений, выделенных из лекарственных форм. Количественное определение буторфанола, декстрометорфана, кеторолака и диклофенака в биообъектах проведено методами УФ-спектрометрии, хроматоденситометрии и ВЭЖХ.

На основании статистических данных препараты буторфанол, декстрометорфан, кеторолак и диклофенак могут быть отнесены к объектам химико-токсикологического исследования. Данные исследования могут быть использованы в практике химических отделений БСМЭ и химикотоксикологических лабораторий наркодиспансеров.

Список литературы:

1.Веселовская, Н.В. Наркотики/ Н.В. Веселовская, А.Е. Коваленко- М..: «Триада-Х», 2000.-150с.

2.Дегтерев, Е.В. Применение тонкослойной хроматографии в анализе наркотических исильнодействующих веществ (обзор) / Е.В. Дегтярев, А.В.Гаевский,

Е.А.Зенкова // Хим.-фарм. Журнал - 1998. – Т. 32. - № 5. – С. 48-54.

3.Мелентьев, А.Б. Скриниг лекарственных наркотических веществ и их метаболитов методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором / А.Б.Мелентьев // Проблемы экспертизы в медицине – 2002. -.№4. - С. 15-21.

4.Савчук,С.А. Применение хроматографии и хроматомасс-спектрометрии для изучения фармакокинетики и метаболизма пропофола,клофелина,фенциклидина и и трамадола(обзор)./С.А.Савчук, Н.В.Веселовская, Е.С.Бродский, А.А.Формановский, В.В.Чистяков, Б.Н.Изотов Б.Н. // Хим.-фарм. Журнал - 1999. – Т.33. - № 6. – С. 29-52.

5.Электронная версия Jackson .Clark`s Analysis.of Drugs and Poisons – London,

2006.

Годунов А.В., Волченко С.В., Киреева А.В., Федоров Д.Б.

ОБНАРУЖЕНИЕ 3-МЕТИЛФЕНТАНИЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ И ВЕЩЕСТВЕННЫХ

ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ МЕТОДОМ ГХ / МС

Ленинградская область

Наиболее часто встречающимися наркотическими веществами в практике лаборатории являются опиаты, каннабиноиды, метадон, 3- метилфентанил, амфетамины и прочие. 3-метилфентанил – синтетический анальгетик из группы производных пиперидина. Он является стимулятором μ- рецепторов, встречается в виде двух изомеров: цис- и транс-. Последние различаются по силе воздействия на организм человека: цис – в 5500 раз активнее морфина, транспримерно равен по силе героину. Минимальная летальная доза 3-метилфентанила составляет примерно 250 мкг на 70 кг веса. На рис. 1 приведено число экспертиз по некоторым видам наркотиков за 6 месяцев 2007 г.

3-метилфентанил обратил на себя внимание в связи с участившимся поступлением на исследование объектов, в которых не обнаружены другие наркотические вещества и этиловый спирт. Нередко в качестве вещественных доказательств доставлялись упаковки с неизвестным веществом в виде порошка. Кроме того, были приняты во внимание частые упоминания в средствах массовой информации об изъятиях у наркоторговцев наркотического вещества, сбываемого под наименованием «белый китаец». В доступной литературе методики определения в биоматериале 3-метилфентанила не найдено, поэтому мы разработали и внедрили в практику лаборатории метод обнаружения 3- метилфентанила.

1000

100

10

Рис. 1. Количество экспертиз с положительным результатом.

В качестве метода предварительного анализа применяли иммуноферментный метод.

Изолирование 3-метилфентанила проводили двумя способами: а). из крови, головного мозга и вещественных доказательств - методом жидкостьжидкостной экстракции смесью растворителей гексан-метиленхлорид- изопропанол; б). из мочи - методом твердофазной экстракции (Bond Elut LRCCertify, 130 mg).

Сухие остатки растворяли в 250 мкл этилацетата, аликвоту вводили в

систему ГХ/МС.

Условия анализа: Agilent 6890N – газовый хроматограф; Agilent 5973N- масс-селективный детектор; колонка HP-5MS 30м; скорость потока 1 мл/мин, газ-носитель гелий; режим ввода пробы: Pulsed Splitless, объем вводимой пробы

3 мкл; SIM ионы: m/z 160, m/z 203, m/z 259, m/z 260; режим анализа: Scan mode.

На хроматограмме выявлены пики, которые имеют сходные времена удерживания и масс-спектры со стандартными цис- и трансизомерами 3- метилфентанила. Предложенный метод позволяет с достаточной селективностью определить 3-метилфентанил в присутствии 212 лекарственных препаратов. В практике лаборатории насчитывается более 40 случаев обнаружения 3- метилфентанила в течение последних 2 лет. По результатам статистической обработки данных относительная ошибка метода составляет 98%.