6 курс / Судебная медицина / Актуальные_вопросы_судебно_медицинской_экспертизы_трупа_В_Клевно

с Rf =0 ,84, 0,76 и 0,71, соответствующие свидетелям – дипиридамолу (Rf = 0,84), 4-монометиламиноантипирину (0,76) и пирибедилу (0,71). Пластинка 2. Система 2. При наблюдении пластинки в УФ свете в зоне нанесения извлечений, кроме крови, наблюдались пятна с интенсивной зеленой флуоресценцией с Rf=0,64, соответствующие по окраске и значению (Rf=0,64) свидетелю-дипиридамолу. При обработке пластинки раствором железа в извлечениях отмечены пятна розовато-фиолетового цвета с Rf=0,60, соответствующие метаболиту анальгина – 4-монометиламиноантипирину. При последующей обработке пластинки реактивом Драгендорфа в зоне нанесения извлечений из желудка и почки наблюдались пятна оранжевого цвета с Rf = 0,82, 0,64 и 0,60, соответствующие свидетелям - пирибедилу (0,82), дипиридамолу (Rf = 0,64) и 4- монометиламиноантипирину (0,60). В извлечении из крови отмечены оранжевые пятна, соответствующие свидетелям - пирибедилу (0,82) и 4- монометиламиноантипирину (0,60).

Пластинка 3. Система 3. При наблюдении пластинки в УФ свете в зоне нанесения извлечений, кроме крови, наблюдались пятна с интенсивной зеленой флуоресценцией с Rf = 0,44, соответствующие по окраске и значению (Rf = 0,44) свидетелю-дипиридамолу. При обработке пластинки раствором железа в извлечениях отмечены пятна розовато-фиолетового цвета с Rf = 0,33, соответствующие метаболиту анальгина – 4-монометиламиноантипирину. При последующей обработке пластинки реактивом Драгендорфа в зоне нанесения извлечений из желудка и почки наблюдались пятна оранжевого цвета с Rf = 0,88, 0,44 и 0,33, соответствующие свидетелям – пирибедилу (0,88), дипиридамолу (Rf = 0,44) и 4-монометиламиноантипирину (0,33). В извлечении из крови отмечены оранжевые пятна, соответствующие свидетелям – пирибедилу (0,88) и 4- монометиламиноантипирину (0,33).

При высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматограммах извлечений из внутренних органов наблюдалось два пика со временем удерживания 11,61 мин, соответствующий пирибедилу (λ=242+286 нм) и со временем удерживания 14,5 мин, соответствующий дипиридамолу (λ=228+288 нм).

При хроматомасс-спектрометрическом (ГХ-МС) исследовании в крови, желудке и почке идентифицированы пирибедил и 4-монометиламиноантипирин. Установлено, что в указанных выше условиях ГХ-МС свидетель - дипиридамол не определяется.

Представленный случай из практики, интересен не только разработкой методики судебно-химического исследования лекарственного средства – пирибедила, но и наглядным доказательством возможностей лаборатории, оснащенной современным аналитическим оборудованием, обеспечивающим получение достоверных результатов в случаях комбинированных отравлений.

Бушуев Е.С., Горбачева Т.В., Бычков В.А.

ОБНАРУЖЕНИЕ БУТОРФАНОЛА ПРИ ХИМИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ

Санкт-Петербург

Несмотря на усиление борьбы с незаконным оборотом наркотических средств количество смертельных отравлений, связанных с передозировкой наркотиками, не уменьшается.

В последнее десятилетие на смену растительным пришли синтетические наркотические средства, обладающие высоким наркогенным потенциалом. Опасность синтетических наркотиков заключается в том, что они постоянно совершенствуются, тяжело идентифицируются доступными аналитическими методами, а влияние на организм человека может оказаться значительно пагубнее традиционного героина.

К числу последних следует отнести амфетамин, первитин, фентанил, 3- метилфентанил, 3,4-метилендиоксипроизводные амфетамина, метадон, фенциклидин и другие наркотические средства, оборот которых в РФ запрещен (Список I) или ограничен и в отношении которых устанавливаются меры контроля (Список II Федерального закона «О наркотических средствах и психотропных веществах») в соответствии с законодательством РФ и международными договорами РФ.

Сталкиваясь со значительными трудностями при поиске и приобретении наркотических средств Списка I и Списка II, наркоманы часто используют для достижения желаемого эффекта лекарственные средства, не включенные в указанные Списки и приобретение которых возможно в аптечной сети легально.

Настоящая работа посвящена химико-токсикологическому анализу одному из таких лекарственных средств - буторфанолу, представляющему собой в химическом отношении 17-(циклобутилметил)-морфинан-3,14-диол и выпускающегося в ампулах по 1 мл, содержащих по 0,002 г (2 мг) буторфанола тартрата.

Буторфанола тартрат (синонимы - стадол, морадол) применяется парантерально и интраназально для купирования болевых симптомов в случаях, когда целесообразно использование опиоидного анальгетика.

Препарат показан для премедикации, в качестве дополнительного препарата при сбалансированной анестезии и для снятия болей во время родов.

Анальгетический эффект буторфанола зависит от пути введения. После внутримышечного введения обезболивающий эффект наступает через несколько минут и в пределах 15 минут после применения интраназального аэрозоля.

Максимальная анальгетическая активность наблюдается через 30-60 минут после внутривенного или внутримышечного введения и в пределах 1-2 часов после применения интраназального аэрозоля.

Метаболизируется буторфанол в печени. Приблизительно 70% дозы выводится с мочой и 13% с калом.

В течение 24 часов 5-10% дозы выводится с мочой в неизмененном виде, 5-10% в виде свободного и коньюгированного норбуторфанола и 50% -в виде основного метаболита – 3-гидроксибуторфанола.

T1/2 у молодых пациентов составляет 4-7 ч, у пожилых — 6,6 ч, у больных с выраженными нарушениями функций почек — 10,5 ч.

Vd – 5 л/кг.

Связывается с белками плазмы на 80%.

Нами наблюдались 2 случая отравления буторфанолом.

Случай 1. Труп гр-на К. обнаружен дома. Возле трупа обнаружена коробка, содержащая 5 шприц-тюбиков с фабричной надписью «Буторфанола тартрат 0,2% 1 мл».

Случай 2. Гр-н С. скончался при поступлении в клинику. Предварительный диагноз: отравление амфетаминами.

Изолирование буторфанола из внутренних органов проводилось подкисленным этиловым спиртом. После осаждения белков осуществлялась жидкость-жидкостная экстракция хлороформом при рН 10. Обнаружение буторфанола проводилось с применением ниже приводимых методов.

Тонкослойная хроматография.

Пластинки «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ». Системы растворителей:

Система 1- Хлороформ:этилацетат:метанол (40:10:9) Система 2. Хлороформ:ацетон (3:2)

Система 3. Метанол:25% раствор гидроксида аммония (100:1,5)

Система 4. Хлорформ:н-бутанол:25% раствор гидроксида аммония (70:40:5) Система 5. Этилацетат:метанол:25% раствор гидроксида аммония (17:2:1).

При обработке пластинки 0,4% раствором бромкрезолового пурпурного в зоне нанесения извлечения, содержащего буторфанол, наблюдается синее пятно, переходящее в оранжевое при последующей обработке реактивом Драгендорфа с

Rf 0,72 (система 1), 0,70 (система 2), 0,90 (система 3), 0,88 (система 4) и 0,77 (система 5)..

Ультрафиолетовая спектрофотометрия.

В 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты буторфанол имеет максимум поглощения при 280 нм, а в 0,1 М растворе гидроксида натрия – при

300,7 нм.

Высокоэффективная жидкостная хроматография.

Жидкостной хроматограф марки «Милихром 5». Колонка длиной 80 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненная «Сепароном С18» (7 мкм). Элюент – 40% раствор ацетонитрила на фосфатном буфере (рН 6,1). Скорость элюента 100 мкл/мин. Детектор ультрафиолетовый. Аналитическая длина волны 220 нм.

Время удерживания буторфанола составляет 10,8 мин.

Хроматомасс-спектрометрия.

Газовый хроматограф Agilent 6890, оснащенный капиллярной кварцевой колонкой НР-5МS длиной 30 м с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной пленки 0,25 мкм. Масс-селективный детектор Agilent 5975.

Режим хроматографирования. Скорость газа-носителя 0,8 мл/мин. Деление потока 1:10, с задержкой включения 3 мин после ввода пробы. Температура инжектора 250°С, интерфейса детектора 280°С. Температура колонки программируемая - начальная 80°С (1 мин), затем нагревание колонки со скоростью 30°С/мин до 130°С, затем повышение со скоростью 7°С/мин до 230°С и окончательно со скоростью 10°С/мин до 280°С с выдержкой при конечной температуре 10 минут.

Условия детектирования. Энергия электронов ионизации 70 эВ. Регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования в интервале масс 30550 а.е.м.

Управление прибором и сбор данных проводился с помощью программного обеспечения MSD Chemstation vers. D.03.00.611. Обработка результатов и анализ данных – в Data Analysis и AMDIS. После хроматографирования пробы идентификация веществ проводилась по временам удерживания и совпадению масс-спектра вещества с библиотечным. Поиск осуществлялся по библиотечным стандартным масс-спектрам веществ: PMW_TOX.3, WILEY7n, NISTO5.

На хроматограмме по времени удерживания (24,78 мин) и масс-спектру (характеристические ионы m/z 272, 273, 41, 327, 254 а.е.м) идентифицировано лекарственное средство - буторфанол

На основании результатов судебно-химического исследования в биотканях и биожидкостях от трупа гр-на К. (случай 1) буторфанол не обнаружен.

Вместе с тем, в биообъектах (крови, моче, желудка и почке) установлено присутствие кокаина, циклобарбитала, фенобарбитала и бензофенонов седуксена (МХБ), тазепама (АХБ) и феназепама (АБХБ).

В содержимом шприц-тюбиков обнаружен буторфанол тартрат.

При химическом исследовании биообъектов (желудке, тонком кишечнике, печени и почке) от трупа гр-на С. (случай 2) обнаружены буторфанол, тиопентал, этаминал и бензофенон седуксена (МХБ).

Бушуев Е.С., Горбачева Т.В, Бычков В.А.

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СЕРОКВЕЛЯ

Санкт-Петербург

Сероквель (международное непантетованное название кветиапин) относится к антипсихотическим средствам (нейролептикам), которое применяется для лечения острых и хронических психозов, включая шизофрению. Выпускается в виде круглых двуяковыпуклых таблеток по 25 мг, 100 мг и 200 мг кветиапина, покрытых оболочкой розового, желтого и белого цвета с градуировкой на одной стороне Seroquel 25, Seroquel 100, Seroquel 200,

соответственно. В таблетках Сероквель содержится в качестве активного вещества – кветиапина фумарат в химическом отношении представляющий собой бис[2-(2[-4-(дибензо[b,f] [1,4]тиапин-11-ил)-пиперазин-1-ил]этокси)этанол] фумарат.

При пероральном применении кветиапин хорошо всасывается из желудочно-кишечного тракта и активно метаболизируется в печени. Период полувыведения составляет 7 часов. Приблизительно 83% кветиапина связывается с белками крови. Из организма выводится, главным образом, с мочой (73%) и фекалиями (21%). Прием пищи существенно не влияет на биодоступность.

К числу значимых, неблагоприятных реакций, отмеченными в ходе исследования сероквеля, относятся: сонливость, головокружение, запор, ортостатическая гипотензия, сухость во рту, изменение уровня печеночных ферментов. Прием сероквеля может вызвать сонливость, поэтому при употреблении препарата не рекомендуется управление транспортными средствами и работать с механизмами, представляющими опасность для человека.

Принимая во внимание, что препарат влияет на центральную нервную систему, сероквель должен быть применяться с осторожностью в комбинации с другими лекарственными средствами, угнетающими ЦНС, и алкоголем.

Нами в 2006 году наблюдался случай смертельного отравления сероквелем в комбинации с фенобарбиталом. Труп гр-ки К., 47 лет, был обнаружен дома. Рядом с трупом находились пустые упаковки таблеток «Сероквель». На судебно-химическое исследование представлены желудок с содержимым, печень, почка, стенка мочевого пузыря и кровь.

Вследствие отсутствия методики химико-токсикологического анализа, нами изучены условия выделения кветиапина из биологического материала и предложены методы обнаружения и идентификации лекарственного вещества.

Установлено, что кветиапин преимущественно изолируется хлороформом из щелочной среды (рН 9-10) и в меньшей степени в кислой (рН 2-3) среде.

Исследовано хроматографическое поведение кветиапина на пластинках «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» и «Силуфол УФ254» в 5 системах растворителей

(табл. 1).

Согласно данным, представленным в табл. 1, для идентификации кветиапина на пластинках «Сорбфил» и «Силуфол» могут быть использованы системы растворителей № 2-4.

В ультрафиолетовом спектре поглощения кветиапина в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты отмечена инфлексия при 243,9 нм, 253,1 нм и 290.1 нм; в 95% этиловом спирте – инфлексия при 251,0 нм, 266,7 нм и 295,1 нм; в 0,1 М растворе гидроксида натрия – инфлексия при 252,2 нм и 292,0 нм.

Кветиапин с концентрированными серной, азотной и хлористоводородной кислотами не образует окрашенных продуктов.

Показано, что для идентификации кветиапина может быть с успехом использована высокоэффективная жидкостная хроматография. Исследование проводилось с применением жидкостного хроматографа «Милихром 5», на колонке 80х2 мм, заполненной Сепароном С18 (7 мкм). Элюент – ацетонитрил:фосфатный буфер (40:60), скорость элюента 100 мкл/мин. Детектор ультрафиолетовый, аналитическая длина волны 220 нм. Время удерживания кветиапина составляет 17,2 мин, при этом пик, соответствующий анализируемому веществу, имеет слабое поглощение при 252 нм и 294 нм.

С применением приведенных выше методов химико-токсикологического анализа в стенке желудка с содержимым, почке и стенке мочевого пузыря установлено присутствие кветиапина.

Для доказательства кветиапина применена инфракрасная спектрофотометрия и хроматомасс-спектрометрия.

При сравнении ИК-спектра кветиапина и ИК-спектра извлечения из содержимого желудка установлена их идентичность.

Хроматомасс-спектрометрическое исследование проводилось на газовом хроматографе Agilent 6890, оснащенным капиллярной кварцевой колонкой НР5МS длиной 30 м с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной пленки 0,25 мкм. Масс-селективный детектор Agilent 5975.

Режим хроматографирования. Скорость газа-носителя 0,8 мл/мин. Деление потока 1:10, с задержкой включения детектора 3 мин после ввода пробы. Температура инжектора 250°С, интерфейса детектора 280°С.Температура колонки программируемая - начальная 80°С (1 мин), затем нагревание колонки со скоростью 30°С/мин до 130°С, затем повышение со скоростью 7°С/мин до 230°С и окончательно со скоростью 10°С/мин до 280°С с выдержкой при конечной температуре 10 минут.

Условия детектирования. Энергия электронов ионизации 70 эВ. Регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования в интервале масс 30550 а.е.м.

На хроматограмме идентифицирован кветиапин по времени удерживания (35,10 мин) и масс-спектру (характеристические ионы m/z 210, 239, 144, 321, 95, 45 а.е.м.).

При анализе крови положительный результат исследования был получен только после кислотного гидролиза биожидкости с последующей экстракцией хлороформом из щелочной среды (рН 9-10).

Разработана методика обнаружения нейролептика – кветиапина с использованием современных аналитических методов исследования.

Горбачева Т.В., Бычков В.А., Бушуев Е.С.

ОБНАРУЖЕНИЕ ОКСИБУТИРАТА НАТРИЯ И 1,4-БУТАНДИОЛА ПРИ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ

Санкт-Петербург

За последние время на территории России, в том числе и СанктПетербурге, отмечается значительный рост случаев немедицинского употребления гамма-оксибутирата натрия, известного под названием оксибутират, и его структурных аналогов – гамма-бутиролактона и 1,4- бутандиола. Натрия оксибутират и другие соли оксимасляной кислоты включены в список психотропных веществ (Список III) Перечня наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в РФ, а бутиролактон – в Список сильнодействующих веществ ПККН.

Гамма-гидроксимасляная кислота (ГОМК, 4-гидроксибутировая кислота, GHB) является естественным компонентом организма млекопитающих. По своим свойствам она близка к гамма-аминомасляной кислоте (ГАМК), которая выполняет функции нейромедиатора, участвуя в процессах центрального торможения, обусловливая процессы бодрствования и сна. ГАМК при введении в

организм плохо проникает через гематоэнцефалический барьер в отличие от своего эндогенного метаболита – ГОМК, который присутствует во всех тканях организма млекопитающих в незначительных количествах.

Ванестезиологии, офтальмологии, психиатрии, неврологии и наркологии применяют оксибутират, главным образом, в виде водных растворов его натриевой соли.

Выпускается в виде: порошка, ампул по 10 мг 20% раствора; 5% сиропа во флаконах; 66,3% раствора во флаконах. Внутрь оксибутират натрия для курсового применения назначают по 0,75-1,5 г 3 раза в день, а качестве снотворного до 2 г на прием.

Вмедицине дозы гамма-оксибутирата натрия обычно не превышают 10-50 мг/кг при пероральном или внутривенном введении. Время полувыведения из плазмы крови составляет 0,3-1,0 ч при объеме распределения 0,4 л/кг. Около 90% всего количества оксибутирата окисляется в организме до углекислоты и воды, и значительно меньшая часть выделяется почками. Оксибутират практически не связывается с белками плазмы.

Немедицинское применение солей оксибутирата широко распространилось в 80-х годах 20 века среди культуристов, которые использовали их способность стимулировать выделение гормона роста, увеличивать утилизацию жиров и наращивание мышечной массы. Оксибутират применяется наркоманами для коррекции продолжительности действия стимуляторов группы «экстази» и для восстановления организма после продолжительных физических нагрузок.

Гамма оксибутират натрия – белый или белый со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Легко

растворим в воде и в спирте. Водные растворы имеют рН от 7,9 до 8,9. При воздействии температуры или при кислых значениях рН водных растворов гамма-оксибутират натрия циклизуется в гамма-бутиролактон (GLB, бутиролактон).

В качестве заместителя гамма-оксибутирата натрия используются гаммагидроксибутираль и 1,4-бутандиол (1,4-БД, бутан-1,4-диол).

Обладая фармакологической активностью, в организме они подвергаются метаболитическим превращениям с образованием ГОМК, которая и воздействует на организм..

1,4-бутандиол - бесцветная вязкая низко летучая жидкость со сладковатым вкусом. Хорошо растворим в воде, спиртах, ацетоне, ограниченно растворим в эфире, хлорбензоле, четыреххлористом углероде; плохо растворим в неполярных растворителях. По химической свойствам типичный гликоль. Образует сложные эфиры с кислотами, их ангидридами и галогенангидридами. Плотность

1,0154г/см3. Т кип 228ºС.

По химической структуре гамма-оксибутират натрия отличается от большинства наркотических средств и требует применения специального подхода, отличающегося от общепринятого в химико-токсикологическом анализе в настоящее время. Оксибутират натрия и 1,4-бутандиол относятся к веществам с линейной структурой, следовательно, не имеют максимумов поглощения в УФобласти спектра, характерных реакций окрашивания и требуют специальных подходов при изолировании.

Настоящая работа посвящена двум случаям определения оксибутирата в биологическом материале.

Случай 1. Гр-н Р.. Обнаружен на улице.

Случай 2. Гр-н А.,18 лет, скончался после вечеринки в компании друзей. Предварительный диагноз «Отравление наркотическим веществом».

Объектом исследования являлась моча. Изолирование ГОМК проводили при рН 5 этилацетатом. Извлечение упаривали до 200 мкл и исследовали методом газо-жидкостной хроматографии с масс-селективным детектором. Исследование пробы проводилось с использованием аналитической системы Agilent Technologies GS6890/MS 5975B при следующих условиях: капиллярная кварцевая колонка НР-5MS 30мх0,32мм, газ носитель – гелий, скорость потока 0,8 мл/мин, автоматический режим ввода пробы, объем пробы 1 мкл. Температура инжектора 250°С, температура интерфейса 280°С, температура колонки изменялась в соответствии с программой: начальная 80°С выдерживалась постоянной 1 мин, далее повышалась со скоростью 5°С/мин до 140°С, далее повышалась со скоростью 40°С/мин до 250°С/мин и выдерживалась постоянной 5 мин.

Условия детектирования: энергия электронов ионизации 70эВ, режим детектирования сканированием всех ионов в заданном интервале величин отношения массы к заряду в пределах от 30 до 550 а.е.м.

На хроматограмме анализируемого объекта наблюдался пик со временем удерживания 3,81 мин, который был идентифицирован с использованием библиотечных масс-спектров как 4-гидроксибутановая кислота (гамма-

оксибутировая кислота). Масс-спектр идентифицируемого вещества: 31, 38, 42, 56 ,86 а.е.м.

При исследовании мочи в случае 2 при вышеописанных условиях, было получено 2 пика с временами удерживания 3,81 мин и 4,14 мин. Первый пик был идентифицирован как гамма-оксибутировая кислота, а второй пик как 1,4- бутандиол. Масс-спектр второго пика: 31, 42, 44, 57, 71 а.е.м.

Таким образом, нами показана возможность относительно быстрой и простой идентификации оксибутирата и 1,4-бутандиола в биологических жидкостях.

В настоящее время метод хроматомасс-спектрометрии является основным методом, позволяющим надежно идентифицировать данные соединения.