2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Частная бактериология

572

Поглощение листерий непрофессиональными фагоцитами инициируется самими бактериями. Такой вариант попадания бактерий внутрь клеток называют интернализацией. В результате внутриклеточного развития листерий отмечается незавершенный фагоцитоз (рисунок 7.15).

Рисунок 7.15 – Незавершенный фагоцитоз при листериозе. Мазок крови больного животного. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Входными воротами при листериозе служат слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, слизистые оболочки респираторного тракта, конъюнктива, поврежденные кожные покровы. Из входных ворот листерии распространяются лимфогенным и гематогенным путями. При этом листерии фиксируются в лимфатических узлах и внутренних органах (миндалинах, легких, селезенке, печени, почках, надпочечниках, центральной нервной системе). Листерии накапливаются преимущественно в селезенке и печени. При незавершенном фагоцитозе во внутренних органах листерии размножаются с образованием некротических узелков - листериом, представляющих собой скопление пораженных клеток соответствующего органа, мононуклеарных фагоцитов и возбудителя. Образование листериом в нервной системе обуславливает картину менингита, энцефалита и менингоэнцефалита.

Клиническая картина листериоза. Листериоз (болезнь реки Тигр,

нейреллёз, гранулематоз новорожденных) характеризуется поражением различных органов и систем и может протекать как в форме гастроэнтерита (листериозная пищевая инфекция), так и в тяжелых формах (сепсис, менингит, энцефалит). По МКБ выделяют следующие формы листериоза: листериоз (листериозная пищевая инфекция), кожный листериоз, листериозный менингит и менингоэнцефалит, листериозная септицемия, другие формы (артрит, эндокардит, глазожелезистый листериоз), неонатальный диссеминированный листериоз. Течение листериоза может быть острым, подострым, хроническим и абортивным.

Манифестные формы листериоза развиваются примерно у 20% инфицированных, в остальных случаях отмечается бессимптомное носительство.

Инкубационный период при листериозе составляет от 1-2 дней до 2-4 недель, чаще 18-20 дней. Начало заболевания проявляется ознобом, повышением температуры тела, головной болью, миалгией. Часто отмечается полиморфная розеолезная сыпь. Может быть ангина, конъюнктивит, симптомы менингита.

573

При проникновении возбудителя через слизистые оболочки респираторного тракта поражаются дыхательные пути и окологлоточное лимфоидное кольцо, возможны бронхиты, бронхопневмонии и плевриты. При поражении нервной системы возникают менингоэнцефалит или менингит.

У беременных женщин листериомы образуются в плаценте, из которой возбудитель попадает в плод, обусловливая внутриутробное инфицирование. В клетках инфицированного плода возбудитель размножается и повторно заражает организм матери (“пинг-понговая инфекция”). При инфицировании плода возможны преждевременные роды, мертворождение, тяжелые врожденные поражения разных органов и систем. Врожденный листериоз характеризуется образованием листериом в печени, селезенке, ЦНС (рисунок 7.16).

Рисунок 7.16 – Пороки развития, встречающиеся при врожденном листериозе: гидроцефалия (а) и микроцефалия (б). Заимствовано из Интернет-ресурсов.

При врожденном листериозе выявляются множественные абсцессы и белосерые гранулемы (листериомы) диаметром 1-2 мм, папулезная или розеолезная сыпь. В 54-90% случаев такое инфицирование заканчивается летально (рисунок

7.17).

Рисунок 7.17 – Врожденный листериоз. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

В последние годы у лиц с иммунодефицитами возникают поражения, связанные с видом Listeria invanovii. При этом чаще всего развиваются энтериты с выраженной бактериемией.

574

Заболеванию наиболее подвержены беременные женщины, новорожденные, пожилые люди и лица с ослабленной иммунной системой. У лиц с нормальным иммунным статусом заболевание может протекать в виде легкого недомогания, респираторного заболевания или ангины.

До 80-х годов ХХ века наиболее распространена была профессиональная заболеваемость листериозом работников животноводческих и птицеводческих хозяйств. В последнее время наиболее распространены случаи, связанные с употреблением пищевых продуктов (сыра молочных продуктов, салатов, мясных, куриных и рыбных изделий). В связи с этим с 2001 г. в России введен гигиенический норматив, регламентирующий безопасность продуктов питания в отношении возбудителя листериоза.

Иммунитет. Первостепенное значение в развитии иммунитета после переболевания листериозом имеет клеточный иммунный ответ, который сопровождается аллергизацией организма. Определенную роль в иммунитете играют антитела, появляющиеся со второй недели заболевания. В дальнейшем титр антител нарастает. Антитела сохраняются не менее 1-2 лет после выздоровления.

Лабораторная диагностика. При диагностике листериоза у людей используются культуральный и серологический методы, аллергическая проба и ПЦР.

Материалом для исследования служат ликвор, кровь, пунктат лимфоузлов, слизь из носоглотки, отделяемое родовых путей, околоплодные воды, плацента, трупный материал. При необходимости исследуют пищевые продукты и воду.

Для выделения листерий из клинического материала и продуктов питания используют селективные факторы (температурный фактор и селективные добавки). Обычно используют инкубирование при температуре 30ОС в течение 24-48 часов в бульоне с селективными добавками для обогащения исследуемого образца. Для селективного обогащения производят посев материала в бульон UVM или в бульон Фразера. Почернение бульона Фразера свидетельствует о наличии листерий, что позволяет дать предварительный ответ (рисунок 7.18).

аб

Рисунок 7.18 – Рост листерий в бульоне Фразера: а – контроль, б – опыт. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Наибольшее распространение для выделения листерий получили среды Оксфорд агар и PALKAM агар. В состав Оксфордского агара входят хлорид лития, акрифлавин, колистин-сульфат, цефотетан, циклогексимид и фосфомицин, которые

575

подавляют развитие большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий. Готовая среда прозрачная, голубовато-коричневого цвета. На Оксфордском агаре L. monocytogenes образуют колонии коричневато-зеленого цвета с черным ореолом (рисунок 7.19).

Рисунок 7.19 – Рост L. monocytogenes на Оксфордском агаре. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

PALKAM агар содержит такие селективные добавки как полимиксин, акрифлавин, хлорид лития и цефтазидим. На этой среде L. monocytogenes образует серо-зеленые колонии с темным центром и темным ореолом (рисунок 7.20).

Рисунок 7.20 – Колонии L. monocytogenes на PALKAM агаре. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Определенное значение для видовой идентификации возбудителя имеет гемолитическая реакция листерий в САМР-тесте с гемолитическими штаммами

Staphylococcus aureus и Rhodococcus equi. Наличие расширения и/или просветления зоны гемолиза в местах, соседствующих со штрихами стафилококка или родококка, свидетельствует о положительной реакции. L. monocytogenes дает положительную реакцию около штриха стафилококка и отрицательную реакцию около штриха родококка (рисунок 7.21).

576

Рисунок 7.21 – Гемолитические реакции L. monocytogenes в САМР-тесте со стафилококком. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Для биохимической идентификации листерий используются планшеты

Listeria System 18R (рисунок 7.22).

Рисунок 7.22 – Планшеты Listeria System 18R для биохимической идентификации листерий. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

В качестве методов экспресс-диагностики примеяют иммунохимические методы (РИФ, ИФА), иммунохроматографический тест, а также ПЦР. В частности, для иммунохроматографического экспресс-теста Singlepath®-L'mono вначале исследуемый образец подвергается обогащению в селективной среде, а затем осуществляют индикацию патогена (рисунок 7.23).

577

Рисунок 7.23 – Иммунохроматографический экспресс-тест Singlepath®-L'mono на листериоз. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

Для идентификации листерий в качестве дополнительных тестов используют агглютинацию с поливалентной листериозной сывороткой и фаготипирование с помощью типовых листериозных бактериофагов L2A и L4A.

Наиболее перспективным диагностическим тестом является ПЦР с использованием праймеров на основе последовательностей генов листериолизина О (hly) или фосфолипазы (plcA). ПЦР с праймерами, обусловливающими амплификацию гена plcA, обладает 100% специфичностью и высокой чувствительностью.

Выявление листерий в продуктах питания проводится в соответствии с ГОСТ 32031-2012. При исследовании продуктов питания на наличие листерий проводят обогащение материала в жидкой питательной среде с последующим высевом на плотные среды. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам (подвижность, окраска по Граму, гемолитическая активность, лицитиназная активность, ферментация рамнозы, ксилозы, маннозы).

Для идентификации листерий до рода рекомендовано использовать реакцию латекс-агглютинации (Listeria Latex Kit), иммунохромато-графический метод

(Singlepath Listeria) и бактериологические анализаторы (VIDAS Listeria Duo). Для идентификации листерий до вида L. monocytogenes рекомендуется использовать ПЦР и ДНК-зонды.

Наиболее эффективным для серологической диагностики является определение антител к листериолизину О.

Лечение. Лечение листериоза проводится антибиотиками (тетрациклином, доксициклином, эритромицином, левомицетином и др.). Наилучшие результаты отмечаются при сочетании ампициллина с гентамицином. При наличии противопоказаний к ампициллину используют ко-тримоксазол. При поражениях нервной системы используются антибиотики пенициллинового ряда.

Профилактика. Специфическая профилактика листериоза у людей не разработана. Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-ветеринарным мероприятиям в эндемическом очаге. Особое значение имеют мероприятия,

578

направленные на предотвращение заражения продовольствия и размножение бактерий в продуктах питания. В этой связи на предприятиях, занятых переработкой и хранением продовольствия, требуется соблюдать правила, предусмотренные ВОЗ (“Пять принципов повышения безопасности пищевых продуктов”): соблюдение чистоты; отделение сырых продуктов от продуктов, подвергшихся тепловой обработке; тщательная тепловая обработка продуктов; хранение продуктов при безопасной температуре; использование безопасной воды и безопасных сырых продуктов.

Вопросы для контроля усвоения материала:

1.Таксономическое положение листерий.

2.Морфологические и тинкториальные свойства листерий.

3.Культуральные и биохимические особенности листерий.

4.Экология листерий.

5.Эпидемиология листериоза.

6.Факторы патогенности листерий и патогенез листериоза.

7.Клиническая картина листериоза.

8.Принципы профилактики и лечения листериоза.

Тренировочные тесты

1.L. monocytogenes относится к роду (один правильный ответ): 1.1 Leptospira

1.2 Listeria

1.3 Lactobacillus

1.4 Legionella

1.5 Lactococcus

2.Для листерий характерно (один правильный ответ):

2.1грамположительный кокк

2.2грамположительная палочка

2.3грамотрицательный кокк

2.4грамотрицательная палочка

2.5спирилла

3.Для листерий характерно (один правильный ответ): 3.1 облигатные анаэробы 3.2 спорообразующие палочки 3.3 облигатные аэробы

3.4 факультативные анаэробы

3.5 подвижные при 37ОС

4.Для листерий характерно (несколько правильных ответов): 4.1 облигатные аэробы 4.2 психрофилы

579

4.3микроаэрофилы

4.4капнофилы

4.5термофилы

5.Селективными средами для листерий являются (один правильный ответ): 5.1 среда Китта-Тароцци 5.2 теллуритовая среда 5.3 среда Эндо 5.4 среда Левина 5.5 щелочной агар

6.Селективными средами для листерий являются (один правильный ответ): 6.1 среда Китта-Тароцци 6.2 среда Оттавиани-Агости 6.3 среда Эндо 6.4 среда Левина 6.5 щелочной агар

7.Патогенные для человека листерии обладают признаками (несколько правильных ответов):

7.1 спорообразование

7.2 β-гемолиз на кровяном агаре

7.3 α-гемолиз на кровяном агаре

7.4 фосфолипазная активность

7.5 извитая форма

8.Основными факторами патогенности листерий являются (несколько правильных ответов):

8.1 спорообразование

8.2 листериолизин О

8.3 экзотоксин

8.4 эндотоксин

8.5 интерналин

9.Пути передачи листерий человеку (несколько правильных ответов):

9.1половой

9.2алиментарный

9.3воздушно-капельный

9.4трансплацентарный

9.5инъекционный

10. Методы диагностики листериоза (несколько правильных ответов):

10.1электронная микроскопия

10.2культуральный

10.3биопроба на морских свинках

10.4ПЦР

580

10.5 заражение культуры клеток

11. Средства специфической профилактики листериоза (один правильный ответ):

11.1живая вакцина

11.2не разработаны

11.3инактивированноя вакцина

11.4химическая вакцина

11.5антибиотики

Правильные ответы: 1.2; 2.2; 3.4; 4.2, 4.3; 5.2; 6.2; 7.2, 7.4; 8.2, 8.5; 9.2, 9.4; 10.2, 10.4; 11.2.