2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Частная бактериология

431

Рисунок 4.98 – Рост синегнойной палочки на среде №9-ГРМ производства ФГУН ГНЦ ПМ (Шепелин А.П. и др., 2017).

При идентификации P. aeruginosa учитывают характер роста на ЦПХ-агаре, пигментообразование, наличие характерного специфического запаха культуры, положительный тест на цитохромоксидазу, выявление термофильности (рост при 42ОС и отсутствие роста при 5ОС), способность окислять глюкозу в OF-тесте. Для внутривидовой идентификации бактерий проводят серотипирование, пиоцинотипирование, фаготипирование.

На плотных средах у синегнойной палочки может наблюдаться феномен радужного лизиса – появление на поверхности колоний пленки, переливающейся всеми цветами радуги (рисунок 4.99).

Рисунок 4.99 – Феномен радужного лизиса у P. aeruginosa (Шепелин А.П. и др.,

2017).

Серологическое типирование культур синегнойной палочки проводят методом агглютинации на стекле с использованием набора поливалентных сывороток к О-антигенам.

Серологическое исследование применяют также для обнаружения специфических антител к антигенам синегнойной палочки (обычно экзотоксину А и

432

ЛПС) с помощью РСК, РПГА, опсонофагоцитарной реакции и некоторых других тестов.

Типирование клинических штаммов проводят также по способности к синтезу определенных пиоцинов. В этом случае мукоидные штаммы (вирулентные) относятся к нетипируемым, так как образуемый ими пиоцин связывается с псевдокапсулой и не диффундирует в агар.

Лечение. Для лечения синегнойной инфекции применяют антибиотики, причем рекомендуется комбинировать препараты из разных групп, так как для P. aeruginosa доказано наличие природной резистентности ко многим антибиотикам. Антимикробную терапию назначают только после определения антибиотикограммы диско-диффузионным методом. В экстренных случаях антибиотики применяют эмпирически.

Против P. aeruginosa эффективны аминогликозиды (гентамицин, тобрамицин, амикацин), хинолоны (ципрофлоксацин, левофлоксацин), цефалоспорины (цефтазидим, цефоперазон), полимиксины (полимиксин В), монобактамы (азтреонам). Лечение проводится как в виде монотерапии, так и в виде комбинации препаратов (цефтазидим + аминогликозиды, ципрофлоксацим + аминогликозиды).

Для лечения тяжелых форм синегнойной инфекции используют также гипериммунную плазму, полученную из крови добровольцев, иммунизированных поливалентной корпускулярной синегнойной вакциной.

При местном лечении инфекций кожи (трофических язв, эктиме, ожоговых ран), вызванных P. aeruginosa, применяют антисинегнойный гетерологичный иммуноглобулин, получаемый из сыворотки крови баранов, гипериммунизированных взвесью культур синегнойных палочек 7 различных иммунотипов, убитых формалином.

Кроме того, для лечения гнойных инфекций кожи, абсцессов, термических ожогов, осложненных синегнойной инфекцией, циститов, маститов и других заболеваний синегнойной этиологии (кроме сепсиса) можно применять синегнойный бактериофаг (бактериофаг пиоцианеус) или поливалентный жидкий пиобактериофаг.

Профилактика. Эффективная стерилизация, дезинфекция и антисептика, а также соблюдение правил асептики являются основными мерами неспецифической профилактики синегнойной инфекции в стационаре. Профилактические мероприятия должны включать контроль обсемененности внешней среды (воздуха, различных предметов, инструментов и аппаратуры), соблюдение правил личной гигиены.

С целью неспецифической профилактики гнойно-воспалительных заболеваний пациентам с ослабленным антиинфекционным иммунитетом рекомендуется назначать иммуномодуляторы.

Для создания активного иммунитета против синегнойной инфекции применяют вакцины. В настоящее время разработаны вакцины из ЛПС синегнойной палочки, полисахаридные субкорпускулярные (химические) вакцины, рибосомные вакцины, препараты из жгутиковых антигенов P. aeruginosa и компонентов внеклеточной слизи, а также анатоксины из внеклеточных протеаз и экзотоксина А.

434

2.2грамположительные палочки

2.3грамотрицательные палочки

2.4спорообразующие палочки

2.5грамотрицательные кокки

3. Факторами патогенности P. aeruginosa являются (несколько правильных ответов):

3.1пили

3.2экзотоксины

3.3фибринолизин

3.4протеазы

3.5нейротоксин

Правильные ответы: 1.4; 2.3; 3.1, 3.2, 3.4.

435

5. Грамотрицательные анаэробные палочки

5.1. Бактероиды

Историческая справка. Бактероиды (греч. bakterion – палочка, eidos – вид, форма) представляют отдельный род грамотрицательных облигатных анаэробных палочек, не образующих споры. Они являются условно-патогенными микроорганизмами, входящими в состав нормальной микробиоты человека и животных.

Первое описание бактероидов принадлежит A. Veillon и A. Zuber, которые в 1898 г. из гноя при аппендиците выделили анаэробные микроорганизмы, не образующие спор (Bacteroides fragilis). Родовое название Bacteroides было введено в

1919 г. A. Castellani и A. Chalmers.

Классификация. Бактероиды относятся к царству бактерий, типу

Bacteroidetes, классу Bacteroidia, порядку Bacteroidales, семейству Bacteroidaceae,

роду Bacteroides. Тип (филум, отдел) Bacteroidetes включает в себя следующих представителей, имеющих медицинское значение (таблица 5.1).

Таблица 5.1 - Представители типа Bacteroidetes, имеющие медицинское значение

состав рода Bacteroides, по морфологическим и биохимическим признакам, продукции жирных кислот, способности поражать те или иные органы и ткани подразделяются на группы, например, fragilis, melaninogenicus-oralis, asaccharolyticus. Клиническое значение имеют виды B. fragilis, B. thetaiotaomicron, B. vulgatus.

При классификации бактероидов выделяют особую группу Bacteroides fragilis, включающую в себя сам вид B. fragilis, а также B. distasonis, B. ovatus, B. thetaiotaomicron и B. vulgatus. Эти бактерии устойчивы к пенициллину за счет продукции бета-лактамаз, являются представителями нормальной микробиоты желудочно-кишечного тракта и преобладают при внутрибрюшной инфекции, при периректальных абсцессах, пролежнях.

Морфологические и тинкториальные свойства. Бактероиды представляют собой грамотрицательные палочки, которые отличаются высоким полиморфизмом.

437

Культуральные, биохимические и антигенные свойства. Бактероиды являются облигатными анаэробами. Культивируются на обогащенных питательных средах: кровяном агаре, на средах с добавлением яичного белка, желчи, эскулина, тканевых экстрактов (мозгового, сердечного). Рост бактероидов стимулирует добавление в среды гемина, витамина К, цистеина, декстрозы. Желчно-эскулиновый агар используется для селективного выделения, идентификации и культивирования микроорганизмов группы Bacteroides fragilis. Эта среда содержит компоненты, поддерживающие рост прихотливых анаэробных микроорганизмов и подавляющие рост большинства других микробов, кроме эскулинположительных бактероидов.

Бактероиды лучше растут в атмосфере 10% углекислого газа при температуре 37ОС. B. fragilis образует каталазу и супероксиддисмутазу, поэтому является аэротолерантным микроорганизмом. Культивирование бактероидов проводят в анаэростатах (рисунок 5.4).

Рисунок 5.4 – Анаэростат.

Размножение бактероидов протекает медленно, посевы инкубируют в течение 2-5 дней.

На плотных питательных средах бактероиды образуют мелкие жемчужносерые или белые колонии. На кровяном агаре B. fragilis образует мелкие (1-3 мм) выпуклые непигментированные колонии, а B. melaninogenicus – пигментированные колонии черного или темно-коричневого цвета. Некоторые штаммы бактероидов могут вызывать гемолиз (рисунки 5.5 и 5.6).

439

Рост бактероидов в жидких питательных средах сопровождается равномерным помутнением.

Ключевыми признаками бактероидов является способность расти в присутствии 20% желчи, резистентностъ к канамицину (100 мкг), ванкомицину (5 мкг) и колистину (10 мкг).

Протеолитическая активность у бактероидов умеренная, лецитиназу не образуют, большинство штаммов не вызывают гемолиза эритроцитов, гиппурат не гидролизуют, индол не образуют. Гидролизуют эскулин, сбраживают различные углеводы (глюкозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу и др.), синтезируют каталазу. Одни штаммы бактероидов являются уреазоположительными, другие - уреазоотрицательными. Основные дифференциальные признаки представлены в таблице 5.2.

Таблица 5.2 – Основные дифференциальные признаки бактерий рода Bacteroides, имеющих клиническое значение

Бактероиды содержат соматический О-антиген, могут иметь капсульный К- антиген и жгутиковый Н-антиген.

Геномы бактероидов представлены кольцевыми двухцепочечными молекулами ДНК. Установлена возможность переноса генов между E. coli и B. fragilis с помощью плазмид.

Экология бактероидов. Бактероиды являются представителями нормальной микробиоты кишечника, мочеполовых органов, верхних дыхательных путей, полости рта. Основное место обитания бактероидов в организме человека – толстая кишка (рисунок 5.8).

440

Рисунок 5.8 – B. fragilis на эпителии кишечника (Chu H. e. a., 2016).

Бактероиды появляются в кишечнике человека через 10 дней после

рождения, у детей первого года жизни их количество в фекалиях достигает 107-108 КОЕ/г, у взрослых – 109-1010 КОЕ/г, у пожилых людей – 1010-1011 КОЕ/г. В тонком

кишечнике бактероидов намного меньше – до 107 КОЕ/г, а в полости рта их количество составляет не более 103 КОЕ/г. В ротовой полости бактероиды обнаруживаются главным образом в десневых карманах. В стерильных внутренних органах здоровых людей бактероиды отсутствуют.

Бактероиды являются антагонистами шигелл, сальмонелл, некоторых видов эшерихий. Они участвуют в процессах разложения углеводов, белков и биотрансформации жёлчных кислот.

Патология, обусловленная бактероидами, развивается чаще всего как эндогенная инфекция в результате повреждения слизистых оболочек – мест обитания этого микроба. При развитии патологических процессов выявляются ассоциации бактероидов с другими анаэробными, а также с аэробными и факультативно-анаэробными бактериями (кишечной палочкой, стрептококками, стафилококками, синегнойной палочкой). Однако B. fragilis способен вызывать моноинфекции.

Факторы патогенности бактероидов и патогенез заболеваний.

Патогенность бактероидов обусловлена следующими факторами: 1. Адгезины:

-лектиноподобные поверхностные белки;

-пили;

-капсула.

2. Ферменты:

-супероксиддисмутаза;

-нейраминидаза;

-гиалуронидаза;

-фибринолизин;

-коллагеназа;

-дезоксирибонуклеаза;

-гепариназа;

-IgA-протеаза;

-бета-лактамаза.