2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Частная бактериология
.pdf181
Материалом для исследования служат испражнения, пищевые продукты, иногда – рвотные массы. Для исследования отбирают слизисто-гнойные массы. Фекалии можно отбирать непосредственно из прямой кишки с помощью ватного тампона или специальных ректальных трубок Цимана (рисунок 3.53).
Рисунок 3.53 – Стерильная пробирка с консервирующей жидкостью и ректальной трубкой. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Слизь (гной) из мест поражения слизистой оболочки можно получать непосредственно во время колоноскопии.
Для отбора соскоба эпителиальных клеток используют петлю, которую вводят в прямую кишку на 10-20 см. Полученный соскоб со слизистой оболочки прямой кишки помещают в среду 199 с лизоцимом и инкубируют в термостате при 37ОС в течение 3-6 часов, после чего центрифугат высевают на питательные среды. Посуду, используемую для отбора материала, не обрабатывают дезинфицирующими растворами, так как шигеллы чувствительны ко многим дезсредствам.
В первый день отобранный материал непосредственно у постели больного высевают в среду обогащения (селенитовый бульон) и в чашки Петри на лактозосодержащие дифференциальные плотные питательные среды (Плоскирева, Левина, Эндо). При невозможности посева материала на дифференциальные среды в течение первых двух часов используют консервант (глицериновая смесь, буферный раствор фосфорнокислых солей, желчный бульон, селенитовый бульон). Для посева используют слизисто-гнойные комочки испражнений.
На второй день среди выросших колоний отбирают мелкие прозрачные бесцветные колонии, культуру из которых микроскопируют, исследуют на подвижность и пересевают на среду Олькеницкого для выделения чистой культуры. С культурой из типичных колоний проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле со смесью сывороток Флекснера и Зонне.
На третий день учитывают характер роста культуры на среде Олькеницкого (столбик агара желтого цвета, скошенная часть агара не изменена, почернение отсутствует). Полученную чистую культуру исследуют по биохимическим свойствам (посев в среды Гисса).
182
На четвертый день учитывают результаты определения биохимических свойств выделенной культуры.
Для изучения биохимической активности применяют также энтеротесты или энтеротубы. В частности, набор ЭНТЕРОтест 24 представляет собой пластмассовые пластинки с ячейками, содержащими высушенные питательные среды и субстраты для 24 тестов (рисунок 3.54).
Рисунок 3.54 - Энтеротест. Заимствовано из Интернет-ресурсов.
Тест-система Enterotube-II (рисунок 3.55) представляет собой прозрачную пластиковую трубку с отдельными отсеками, заполненными специальными средами.
Рисунок 3.55 - Тест-система Enterotube-II. Заимствовано из Интернетресурсов.
Выделенные культуры шигелл идентифицируют до вида и серовара, культуры S. flexneri - до подтипов, а культуры S. sonnei - до хемоваров. В таблице 3.2 представлены биохимические свойства шигелл.
Таблица 3.2 – Биохимические свойства шигелл
Вид |
|
Ферментация углеводов |
|
Индол |
Каталаза |
|||
|
лактоза |
глюкоза |
мальтоза |
маннит |
дульцит |
сахароза |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S. dysenteriae |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
S. flexneri |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
S. boydii |
- |
+ |
± |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
S. sonnei |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
|
медленно |
|
|
|
|
медленно |
|
|
183
Для установления видовой принадлежности возбудителя используют реакцию агглютинации (РА) на стекле, которую сначала ставят с видовыми сыворотками Зонне и Флекснера, и при выделении палочки Флекснера – с типовыми сыворотками. Для этого используют коммерческие поливалентные и моновалентные диагностические агглютинирующие сыворотки.
Для быстрого обнаружения антигенов шигелл в исследуемом материале применяют реакцию коагглютинации (РКоА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция агглютинации латекса (РАЛ), полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Реакцию коагглютинации (РКоА) используют для определения вида шигелл. Эту реакцию можно проводить уже на второй день исследования при наличии на среде достаточного количества лактозонегативных колоний. С этой целью на типичную колонию наносят каплю протеина А стафилококка, сенсибилизированного антителами против шигелл. Чашку осторожно покачивают и через 15 минут под микроскопом наблюдают появление агглютината.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) может быть использована как для обнаружения возбудителя в фекалиях, так и для идентификации чистой культуры
(рисунок 3.56).
Рисунок 3.56 - РИФ с культурой S. flexneri. Заимствовано из Интернетресурсов.
С целью выявления антител к шигеллам применяют реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА). Для этой цели используют коммерческие эритроцитарные диагностикумы. Диагностически достоверным считается увеличение не менее чем в 4 раза титра антител в парных сыворотках, взятых с интервалом 8-10 дней.
Для эпидемиологических целей проводят колициногенотипирование, колицинотипирование, фаготипирование, определение плазмидного профиля. Колициногенотипирование направлено на определение способности шигелл синтезировать специфические колицины с помощью наборов типовых и индикаторных штаммов. Колицинотипирование – это определение чувствительности шигелл к известным колицинам. Для этих целей используют набор эталонных колициногенных штаммов.
Вспомогательное диагностическое значение имеет внутрикожная аллергическая проба с дизентерином Цуверкалова (раствор белковых фракций шигелл Флекснера и Зонне). Реакцию учитывают через 24 часа после введения
184
препарата. Она становится положительной с 4 дня болезни. При наличии гиперемии и инфильтрата диаметром 35 мм реакция считается сильно выраженной, при 20-34 мм – умеренной, при 10-15 мм - сомнительной. В настоящее время эта реакция практически не используется.
Для установления принадлежности выделенных культур к роду шигелл и для оценки инвазивных свойств выделенных культур в исследовательских лабораториях используют кератоконъюнктивальную пробу на морских свинках: введение в
конъюнктивальный мешок небольшого количества агаровой или бульонной культуры приводит к развитию через 2-5 суток серозно-гнойного кератоконъюнктивита. Эта проба также не используется в клинических лабораториях.
В диагностике шигеллезов применяют инструментальные методы, в частности ректороманоскопию. Патологоанатомические изменения при дизентерии наиболее выражены в дистальном отделе толстой кишки. В начале заболевания на слизистой оболочке толстой кишки обнаруживается острое катаральное воспаление, затем – фибринозно-некротическое воспаление, переходящее в стадию образования язв. Язвы при дизентерии чаще всего поверхностные. Заживление язв протекает очень медленно.
Лечение. Для лечения используют бактериофаг, антибиотики после определения антибиотикограммы; в случае возникновения дисбактериоза - препараты пробиотиков для коррекции микрофлоры кишечника.
Бактериофаг дизентерийный поливалентный (Дизфаг) выпускается в жидком виде, в таблетках с кислотоустойчивым покрытием, свечах. Жидкий препарат представляет собой стерильный фильтрат фаголизатов S. flexneri типов 1, 2, 3, 4 и 6 и S. sonnei. Применяется внутрь или ректально для лечения больных бактериальной дизентерией (с 6-месячного возраста), санации реконвалесцентов (бактерионосителей) и профилактики шигеллеза (рисунок 3.57).
Рисунок 3.57 - Дизентерийный поливалентный бактериофаг.
В легких случаях назначают симптоматическое лечение (восстановление водного баланса), в тяжелых случаях – антибиотики. Обязательно учитывают антибиотикограммы выделенных культур. Наиболее эффективными антибиотиками являются фторхинолоны (ципрофлоксацин, офлоксацин, норфлоксацин), ампициллин, тетрациклины, цефалоспорины III поколения (цефтриаксон, цефтибутен), аминогликозиды (гентамицин, сизомицин, тобрамицин, амикацин), препараты нитрофуранового ряда (фуразолидон, фурадонин, фурагин), комбинированные сульфаниламиды (рисунок 3.58).
185
Рисунок 3.58 - Антибактериальные препараты для лечения дизентерии.
Для лечения хронических форм дизентерии вне обострения в прошлом широко использовалась вакцина Чернохвостова, представляющая собой инактивированные этиловым спиртом шигеллы. Она вводилась подкожно в подлопаточную область. Для этих же целей применялась и энтеральная живая вакцина (иммуноген). Лечебное действие вакцины заключается в усилении иммуногенеза и десенсибилизации. В настоящее время эти препараты не используются.
Для коррекции дисбиотических нарушений применяют пробиотические препараты (бифидобактерин, колибактерин, бификол, бактисубтил и др.).
Госпитализации подлежат лица с тяжелым течением, люди пожилого возраста, дети до 1 года, лица с тяжелыми сопутствующими заболеваниями. Выписка больного из стационара осуществляется после трехкратного отрицательного результата бактериологического исследования.
Профилактика. Плановая специфическая профилактика при шигеллезах не проводится. По эпидемическим показаниям (работа в баклабораториях, в сфере общественного питания, выезд в регионы с высоким уровнем заболеваемости дизентерией) используется вакцина Шигеллвак. Она представляет собой раствор липополисахарида S. sonnei, очищенного физико-химическими методами. Через 2-3 недели после введения вакцины обеспечивается невосприимчивость к инфекции в течение 1 года. Вакцина вводится подкожно или внутримышечно однократно. Возможна ежегодная ревакцинация (рисунок 3.59).
Рисунок 3.59 - Вакцина Шигеллвак.
Для экстренной профилактики дизентерии в очагах инфекции применяют дизентерийный бактериофаг.
186
Неспецифическая профилактика предусматривает раннее выявление больных и бактерионосителей, соблюдение санитарно-гигиенических правил приготовления, хранения и реализации пищевых продуктов, контроль качества питьевой воды, соблюдение правил личной гигиены, санитарно-просветительную работу среди населения.
Вопросы для контроля усвоения материала
1.Таксономическое положение и классификация шигелл.
2.Морфологические и тинкториальные признаки шигелл.
3.Культуральные и биохимические свойства шигелл.
4.Факторы патогенности шигелл.
5.Патогенез и клиника шигеллезов.
6.Лабораторная диагностика шигеллезов.
7.Профилактика и лечение шигеллезов.
Тренировочные тесты
1. Возбудители бактериальной дизентерии относятся к роду, названному в честь (один правильный ответ):
1.1А. Шантемесса
1.2К. Шига
1.3С. Флекснера
1.4Т. Эшериха
1.5К. Зонне
2. Возбудители бактериальной дизентерии относятся к роду (один правильный ответ):
2.1Escherichia
2.2Shigella
2.3Salmonella
2.4Yersinia
2.5Klebsiella
3.Род шигелл включает виды (несколько правильных ответов): 3.1 S. dysenteriae
3.2 S. flexneri
3.3 S. boydii
3.4 S. sonnei
3.5 S. newcastle
4.К возбудителям бактериальной дизентерии относятся (несколько правильных ответов):
4.1 S. dysenteriae
4.2 S. flexneri
4.3 S. typhi
187
4.4S. paratyphi
4.5S. boydii
5.Shigella flexneri вызывает (один правильный ответ): 5.1 брюшной тиф 5.2 паратиф 5.3 дизентерию
5.4 сальмонеллез
5.5 чуму
6.Возбудителем дизентерии является (один правильный ответ): 6.1 S. sonnei
6.2 S. paratyphi A
6.3 E. coli
6.4 S. typhi
6.5 Y. pestis
7.Возбудителями бактериальной дизентерии являются (несколько правильных ответов):
7.1 S. dysenteriae
7.2 S. flexneri
7.3 S. boydii
7.4 S. sonnei
7.5 S. typhi
8.Видовую принадлежность шигелл определяют по следующим признакам
(несколько правильных ответов):
8.1морфологические
8.2тинкториальные
8.3ферментативная активность
8.4особенности О-антигенов
8.5особенности Н-антигенов
9. Наиболее вирулентной для человека является (один правильный ответ):
9.1S. dysenteriae
9.2S. flexneri серотип 1
9.3S. flexneri серотип 4
9.4S. boydii
9.5S. sonnei
10. Селективной средой для выделения шигелл является (один правильный ответ):
10.1МПА
10.2висмут-сульфитный агар
10.3среда Плоскирева
10.4среда Левенштейна-Йенсена
10.5молочный агар
188
11.Для шигелл характерно (несколько правильных ответов): 11.1 наличие оксидазной активности 11.2 отсутствие оксидазной активности 11.3 окраска колоний в желтый цвет
11.4 образование слизистого налета на поверхности среды
11.5 отсутствие разложения лактозы
12.Для выделения шигелл из фекалий используют питательные среды (несколько правильных ответов):
12.1 Эндо
12.2 висмут-сульфитный агар
12.3 Плоскирева
12.4 желточно-солевой агар
12.5 щелочной агар
13. Возбудители бактериальной дизентерии (один правильный ответ):
13.1строгие анаэробы
13.2микроаэрофилы
13.3термофилы
13.4не требовательны к питательным средам
13.5нуждаются в дополнительных факторах роста
14. Для шигелл характерно (один правильный ответ):
14.1отсутствие подвижности
14.2образование спор
14.3наличие жгутиков
14.4образование сероводорода
14.5гидролиз мочевины
15.Для шигелл характерно (несколько правильных ответов): 15.1 образование спор 15.2 отсутствие жгутиков
15.3 положительная окраска по Граму
15.4 наличие выраженной капсулы
15.5 отрицательная окраска по Граму
16.Шигеллы относятся к (несколько правильных ответов): 16.1 представителям нормальной микробиоты кишечника 16.2 условно-патогенным микроорганизмам 16.3 патогенным микроорганизмам 16.4 сапрофитам 16.5 возбудителям кишечных инфекций
17.Для бактериальной дизентерии характерно (несколько правильных ответов): 17.1 зоонозная инфекция 17.2 кишечная инфекция
189
17.3воздушно-капельная инфекция
17.4природно-очаговая инфекция
17.5регистрируется во всех возрастных группах
18.К факторам патогенности шигелл относятся (несколько правильных ответов): 18.1 жгутики 18.2 белки наружной мембраны
18.3 пили
18.4 эритрогенный токсин
18.5 эндотоксин
19.Механизм действия токсина Шига (один правильный ответ):
19.1образование пор в мембране клеток
19.2ингибирование синтеза белка на рибосомах
19.3нарушение целостности ЦПМ
19.4активирование аденилатциклазной системы
19.5блокирование передачи нервных импульсов
20. Источники инфекции при бактериальной дизентерии (несколько правильных ответов):
20.1дикие животные
20.2больные с острыми формами
20.3больные с хроническими формами
20.4бактерионосители
20.5домашние животные
21. Источники инфекции при шигеллезе (один правильный ответ):
21.1птицы
21.2грызуны
21.3больные люди
21.4домашние животные
21.5дикие животные
22. Пути передачи при бактериальной дизентерии (один правильный ответ):
22.1воздушно-пылевой
22.2алиментарный
22.3трансплацентарный
22.4трансмиссивный
22.5воздушно-капельный
23. Пути передачи при бактериальной дизентерии (несколько правильных ответов):
23.1воздушно-пылевой
23.2алиментарный
23.3контактно-бытовой
23.4трансплацентарный
23.5половой
190
24. Инфицирование шигеллами происходит при (несколько правильных ответов):
24.1трансфузиях
24.2несоблюдении правил личной гигиены
24.3употреблении в пищу некачественной воды
24.4травмировании кожи
24.5инъекциях
25.Наиболее частый путь инфицирования шигеллами Флекснера (один правильный ответ):
25.1 контактно-бытовой
25.2 водный
25.3 пищевой
25.4 половой
25.5 трансплацентарный
26.Наиболее частый путь инфицирования шигеллами Зонне (один правильный ответ):
26.1 пищевой
26.2 водный
26.3 контактный
26.4 шприцевой
26.5 трансмиссивный
27. Для бактериальной дизентерии характерно (несколько правильных ответов):
27.1образование карбункула
27.2воспаление слизистой толстой кишки
27.3формирование бактерионосительства
27.4внутриклеточное размножение возбудителя
27.5бактериемия
28. Входными воротами для Shigella sonnei является (один правильный ответ):
28.1поврежденная кожа
28.2слизистая мочеполового тракта
28.3желудочно-кишечный тракт
28.4слизистая верхних дыхательных путей
28.5конъюнктива
29. Продолжительность инкубационного периода при дизентерии (один правильный ответ):
29.16 - 8 часов
29.224 - 48 часов
29.32 - 4 дня
29.41 - 2 недели
29.51 - 6 месяцев
30. Возбудитель дизентерии в организме больного (несколько правильных ответов):