2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Санитарно_бактериологический_контроль_и_микробиологические_методы

Т ем а 5. М Е Т О Д Ы И ЗУ Ч Е Н И Я А Н Т И М И К РО БН О ГО Д Е Й СТ В И Я А Н Т И БИ О Т И К О В

А нтиб иотики занимаю тведу щ ееместосреди химиотерап евтических

механизмаантиб актериального действия и числачу вствительных к ним

ф осф атдву замещ енный. Среду готовятиз су хогоп орош кавсоответствии

дозы разных антиб иотиков. Посевы инку б иру ю тп ри 37 °Сдоследу ю щ его дня. По диаметру зон задерж ки ростаисследу емой ку льту ры б актерий су дятоеечу вствительности к антиб иотикам.

Д ля п олу чения достоверных резу льтатов необ ходимо п рименять стандартные диски и п итательные среды, для контроля которых исп ользу ю тся эталонные ш таммы соответству ю щ их микроорганизмов. М етод дисков не дает надеж ных данных п ри оп ределении чу вствительности микроорганизмов к п лохо диф ф у ндиру ю щ им в агар п олип еп тидным антиб иотикам (нап ример, п олимиксин, ристомицин). Е сли эти антиб иотики п редп олагаетсяисп ользовать длялечения, рекоменду ется

растворителе или б у ф ерном растворе. И з него готовятвсе п оследу ю щ ие разведениявб у льоне(воб ъ еме1 мл), п ослечего к каж дому разведению

доб авляю т0,1 млисследу емой б актериальной су сп ензии, содерж ащ ей 106 - 107 б актериальных клеток в1 мл. В п оследню ю п роб ирку вносят 1 мл б у льона и 0,1 мл су сп ензии б актерий (контроль ку льту ры). Посевы инку б иру ю т п ри 37 °С до следу ю щ его дня, п осле чего отмечаю т

средой у казываетназадерж ку ростаисследу емой ку льту ры б актерий п од влиянием содерж ащ ейсявней минимальной ингиб иру ю щ ейконцентрации (М И К ) антиб иотика(таб л. 4).

34

Таблица 4. О п ределениечу вствительности б актериальной ку льту ры

кантиб иотнку методом серийных разведений

О ценку резу льтатов оп ределения чу вствительности микроорганизмовк антиб иотикам п роводятп отаб лице, котораясодерж ит п ограничные значения диаметровзон задерж ки ростаД ля у стойчивых,

которых п одавляется п ри концентрациях п реп арата, об нару ж иваемых в сывороткекрови б ольногоп ри исп ользовании об ычных дозантиб иотиков. К у меренноу стойчивым относятсяш таммы, дляп одавленияростакоторых треб у ю тся концентрации, создаю щ иеся всыворотке крови п ри введении максимальных доз п реп арата. У стойчивыми являю тся микроорганизмы, росткоторых неп одавляетсяп реп аратом вконцентрациях, создаваемых в организмеп ри исп ользовании максимальнодоп у стимых доз.

О пр ед ел ениеспо со бно ст и S. а urеus пр о д уцир о ва т ьбет а -л а кт а ма зы

п енициллин. По радиу сам дискап етлей засеваю тисследу емыеку льту ры.

Посевы инку б иру ю тп ри 37 °С до следу ю щ его дня, п ослечего отмечаю т резу льтаты оп ыта. О сп особ ности исследу емых б актерий п роду цировать

А Н Т И СЕ ПТ И К О В , Д Е ЗИ Н Ф Е К Т А Н Т О В , М Е Т О Д О В СТ Е РИ Л И ЗА Ц И И

Т ема6.1. СТ Е РИ Л И ЗА Ц И Я Д ля у ничтож ения микроорганизмов на различных п редметах,

исп ользу емых вмедицинеи б ыту , п рименяю тдвасп особ а: стерилизацию и дезинф екцию .

Ст ер ил иза ция п редп олагает п олну ю инактивацию микроб ов на п редметах, п одвергаю щ ихсяоб раб отке. Су щ еству ю ттри основных метода стерилизации: теп ловая, лу чевая, химическая.

Тепл о ва я ст ер ил иза ция основананачу вствительности микроб овк

высокой темп ерату ре. При 60 °С и наличии воды п роисходитденату рация б елков, втом числе ф ерментов, вследствие чего вегетативные ф ормы

п роизводятвсу хож аровых ш каф ах, или п ечах Пастера. О б еззараж ивание

материала в нем п роисходит п ри 160-170 °С в течение 60-120 мин. Н едостатком этого методаявляется то, что столь высоку ю темп ерату ру выдерж иваю т только некоторые стерилизу емые п редметы, нап ример,

Продолж ительность стерилизации вавтоклавеп ри 120 °Ссоставляет15-20 мин., п ри 115 °С – 20-30 мин; материал, загрязненный сп орами микроб ов,

стерилизу ю т до 2 часов п ри 120 °С. Ст ер ил иза ция т екучим па р о м

п роизводитсявап п аратеК оха, называемом теку чеп аровым ап п аратом, или вавтоклаве п ри не завинченной крыш ке и открытом вып у скном кране. Стерилизация втеку чеп аровом ап п арате длится от 30 мин. до 1 часав зависимости от характера и п редп олагаемой загрязненности стерилизу емогооб ъ екта. В теку чеп аровом ап п аратестерилизу ю тглавным об разом п итательные среды, у которых изменяю тся их свойства п ри

темп ерату ревыш е100 °С. Стерилизациятеку чим п аром всегдап роводится

п овторно, так как однократное п рогревание п ри темп ерату ре 100 °С не об есп ечивает п олного об есп лож ивания. Т акой метод стерилизации п олу чил название д р о бно й ст ер ил иза ции: об раб отку стерилизу емого материалатеку чим п аром п роводятп о 15-20 мин. еж едневно втечение3 дней. В п ромеж у тках меж ду стерилизациями материалвыдерж иваетсяп ри комнатной темп ерату ре. В овремяп ервогоп рогреванияп роисходитгиб ель содерж ащ ихся вматериалевегетативных ф орм б актерий, вто время как сп оры сохраняю т ж изнесп особ ность. В п оследу ю щ ие су тки, во время

36

выдерж ивания стерилизу емого материала п ри комнатной темп ерату ре, часть сп ор п рорастаетип ревращ аетсяввегетативныеф ормы, п огиб аю щ ие п ри п овторных п рогреваниях. Тинд а л иза ция - дроб ная стерилизация с п рименением низкой темп ерату ры. Прогревание стерилизу емого материалап роизводитсявводянойб ане, снаб ж еннойтерморегу лятором, 5-

6 дней п одрядп ри 56 - 58 °Свтечение2 часоввп ервый день и п о1 часу в п оследу ю щ ие 4-5 дней. В п ромеж у тках меж ду п рогреваниями об раб атываемый материалвыдерж иваетсяп ри комнатной темп ерату редля

об есп лож иванияматериалов, свойствакоторых изменяю тсяп оддействием б олее высокой темп ерату ры, нап ример ж идкости, содерж ащ ей всвоем составеб елок.

Т еп ловая стерилизация - наиб олее надеж ный, экологически

токсичных газов: окиси этиленаи ф ормальдегида. Стерилизация газами

осу щ ествляетсявп рису тствии п арап ри 60 - 80 °Свсп ециальных камерах. Л учева я ст ер ил иза ция являетсяальтернативой газовой стерилизации

высокой темп ерату ры вб ольш их количествах вп ромыш ленных у словиях (нап ример, одноразовыеш п рицы, системы дляп ереливаниякрови).

Е щ е одним сп особ ом стерилизации является фил ьт р о ва ние с п омощ ью различных ф ильтров(керамических, асб естовых, стеклянных) и

стерилизации, как п равило, заменяю тконтролем раб оты стерилизаторовс п омощ ью ф изических, химических и б иологических сп особ ов.

Ф изические мет о д ы п реду сматриваю т контроль раб оты п риб оров,

только то, что п орош ок расп лавилсяи, значит, необ ходимаятемп ерату ра достигну та, нонельзяб ыть у веренным, чтоонаб ылатакой нап ротяж ении всеговремени эксп озиции.

Х имический ко нт р о л ь осу щ ествляется косвенно п о изменению окраски химических индикаторов (индикаторных б у маж ек, п орош ков,

37

ж идкостей - б ензойной кислоты, мочевины, зап аянных вамп у лы), которые п омещ аю тсянап оверхности и вглу б инестерилизу емого об ъ екта. М етод

микроб иологического контроля об ъ ектов, п одвергш ихся стерилизации,

термостатесвидетельству етостерильностип редмета. Н едостаток методав том, что ответ п олу чаем только сп у стя 48 часов, аматериалсчитается стерильным п ослеавтоклавированиявб иксевтечение48 часов. Значит, материалисп ользу ю тся ещ е до п олу чения ответаиз б актериологической лаб оратории.

об ъ ектах внеш ней среды. Д езинф ициру ю тп редметы, которыеневозмож но

дезинф екции и стерилизации исп ользу ю тодни и теж е методы, которые различаю тся качественно и количественно. В ыб ор метода зависит от дезинф ициру емогоматериала.

Тепл о ва я д езинфекция вклю чает воздействие горячей водой и

насыщ енным п аром: п ри 80 °С - 10 мин; п ри 85 °С - 3 мин; п ри 90 °С - 1 мин. При этом реж име п огиб аю т все вегетативные ф ормы б актерий и

М едицинский инстру ментарий и дру гие п редметы часто п одвергаю тся п редстерилизационной дезинф екции. И сп ользу ю т такж е и детергенты, которые растворяю т б елки и ж иры нап оверхности п редмета, у лу чш ая качестводезинф екции.

Разновидностью теп ловой дезинф екции является па ст ер иза ция, п редлож енная ф ранцу зским у ченым Л .Пастером (1822 - 1895 гг) и

применяемая для об раб отки восновном молока, атакж е соков, винаи

пива. При исп ользу емом реж име60 - 70 °Свтечение20 - 30 мин. п огиб ает б ольш инствовегетативных ф орм б актерий.

38

хлорсодерж ащ им соединениям - хлорамин Б, дезам, дихлор-l, су льф охлорантин, хлорцин, хлордезин; к ф енольным соединениям - лизоли хлор-Р- наф тол, гексахлороф ен. Персп ективну ю гру п п у дезинф ициру ю щ их соединений составляю тп оверхностно-активныевещ ества, относящ иесяк четвертичным аммониевым соединениям и амф олитам и об ладаю щ ие б актерицидными, мою щ ими свойствами и низкой токсичностью (ниртан, амф олан и др.). К п ерекисным соединениям п ринадлеж атп ергидроль (З%- ый водный раствор п ерекиси водорода) и дезоксон-l. Д ля дезинф екции п рименяю тсятакж екислоты, альдегиды (ф ормальдегид, глю таральдегиди др.). Примером химической дезинф екции является хлорирование воды.

дезинф ектантовнеодинаковадляразличных микроорганизмовизависитот темп ерату ры, рН и дру гих у словий.

Ул ьт р а фио л ет о во ео бл учениеп роизводятс п омощ ью сп ециальных

Т ема6.3. А СЕ ПТ И К А И А Н Т И СЕ ПТ И К А Д ля п роф илактики вну триб ольничных и особ енно хиру ргических

инф екций п рименяю т асеп тику и антисеп тику . Д о введения методов асеп тики и антисеп тики п ослеоп ерационная смертность достигала80 %: б ольные у мирали от гнойных, гнилостных и гангренозных п роцессов. О ткрытая в1863 г. Л у и Пастером п риродагниения и б рож ения, став стиму лом развития микроб иологии и п рактической хиру ргии, п озволила у тверж дать, что п ричиной многих раневых ослож нений такж е являю тся микроорганизмы.

О сновоп олож ником а септ ики являетсяанглийский хиру ргД .Л истер (1827-1912 гг), который ввелеевхиру ргическу ю п рактику как комп лекс мер, нап равленных нап реду п реж дениеп оп аданиявозб у дителяинф екции в рану и органы б ольного п ри оп ерациях, лечеб ных и диагностических п роцеду рах. Э ти мероп риятия вклю чаю т стерилизацию и сохранение стерильности инстру ментов, п еревязочноrо материала, оп ерационного

оп ерационной и дру гих п омещ ений, п рименение сп ециальной одеж ды, масок. М етоды асеп тики такж е п рименяю т на микроб иологических и

п реду п реж дениеилиликвидацию восп алительногоп роцесса. Е еп ринцип ы

40

оп осредованно через организм человека. Т ак, п реиму щ ественно на микроорганизм или его токсины действу ю т: 1) антиб иотики - вещ ествас выраж енными б актериостатическими илиб актерицидными свойствами; 2) б актериоф аги; 3) антитоксины, вводимые, как п равило, в виде сывороток (п ротивостолб нячная, п ротиводиф терийнаяидр.).

О п осредованно через организм, п овыш ая его имму нитет и, тем самым, у силивая защ итные свойства, действу ю т вакцины, анатоксины, п ереливаниекрови и п лазмы, введениеимму нных глоб у линов, п реп аратов метилтиоу рацилаи др. Протеолитическиеф ерменты лизиру ю тмертвыеи неж изнесп особ ные ткани, сп особ ству ю т б ыстрому очищ ению ран и лиш аю т микроб ные клетки п итательных вещ еств. По наб лю дениям эти ф ерменты, меняясреду об итаниямикроб ови разру ш аяих об олочку , могу т делать микроб ну ю клетку б олеечу вствительнойк антиб иотикам.

А сеп тика и антисеп тика п редставляю т соб ой единый комп лекс мероп риятий, их нельзяразделить.

За д а нuед л я вы nо л ненuя л а бо р а т о р но йр а бо т ы

1. О п ределить антимикроб ное действие антисеп тических и дезинф ициру ю щ их вещ еств.

М ет о д ическиеука за ния

Д иски из ф ильтровальной б у маги смочить растворами исследу емых вещ естви п оместить нап оверхность п итательного агаравчаш кеПетри, засеянной (газоном) тест-ку льту рой стаф илококкаили киш ечной п алочки.

Ч аш ку инку б ировать втечение су ток п ри 37 °С. О б антиб актериальном действии исследу емых вещ ествсу дятп о зонам задерж ки ростаб актерий, об разу ю щ имсявокру гдисков.

микр о био л о гии - раннееоб нару ж ениеп атогенной микроф лоры вовнеш ней среде. О сновным резерву аром возб у дителяявляетсячеловек (б ольной или б актерионоситель), атакж еп тицы, млекоп итаю щ ие. Подавляю щ еечисло возб у дителей п ередается возду ш но-кап ельным и ф екально-оральным п у тем.

Санитарная микроб иология изу чает микроф лору воды, возду ха, п очвы, п ищ евых п роду ктови дру гих об ъ ектоввнеш ней среды, оп ределяя

анализов, 3) п овторность отб орап роб . О сно вны ена пр а вл ения са нит а р но -