6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Лабораторная_диагностика_Котловский_Ю_В_ред_

- 2 -

Красноярский государственный медицинский университет – ректор, профессор И.П. Артюхов Центральная научно-исследовательская лаборатория – заведующий, профессор Ю.В. Котловский

Лабораторная диагностика (методическое пособие для врачей)

Составитель:

Под общей редакцией проф., д.м.н. Ю.В. Котловский к.м.н. А.Г. Гитлина к.м.н. Т.А. Соколова к.м.н. С.В. Машковская с.н.с. О.Я. Оседко врачи: Е.Н. Копсяева Е.Н. Сизова Р.Р. Торопова Т.Г. Пахомова

секретарь: В.В. Горашева

Консультанты:

Тихонова Е.П. – д.м.н., проф., зав. кафедрой инфекционных болезней. Лобынцева Т.К. – к.м.н., доцент кафедры акушерства и гинекологии ФУВ Удовицина Т.И. – к.м.н., доцент кафедры лабораторной диагностики

В пособии содержится информация о медицинском оборудовании и технологиях ЦНИЛ, представлен перечень медицинских услуг, цели исследования. Пособие предназначено для практических врачей любых специальностей.

- 3 -

Посвящается памяти основателей ЦНИЛ и наших учителей д.м.н. проф. К.С. Лобынцева и д.м.н., проф. Л.Б. Захаровой.

- 4 -

РЕЦЕНЗИЯ

На «Методическое пособие для врачей», представленное Центральной научно-

исследовательской лабораторией.

Общеклинические и биохимические исследования – наиболее часто назначаемые лабораторные анализы. Большинство пациентов в поликлиниках и стационарах направляются на эти анализы. Эти исследования позволяют обнаружить заболевания на ранних стадиях, дать врачу информацию о локализации, виде и стадии патологического процесса. В то же время,

несмотря на массовость проводимых исследований, имеется много разночтений. При химическом, биохимическом, микроскопическом исследованиях много субъективизма,

связанного с разной подготовкой врачей лабораторной диагностики. В некоторых случаях бывает низок уровень подготовки по интерпретации лабораторных исследований и у врачей поликлиник, назначающих лабораторные исследования.

Цель данного методического пособия – предоставить возможности лабораторных исследований, в соответствии с достижениями современной медицинской науки, предложить стандартизованный подход при проведении лабораторных анализов, предоставить современные возможности лабораторных технологий. В данном пособии 17 глав, в которых представлены современные методы диагностики различных заболеваний, их этиологии патогенеза, интерпретации результатов, выделены показатели, являющиеся клинической нормой, а также изменения, возникающие при патологии.

Также представлены главы:

1.Молекулярно-генетическое установление биологического родства и идентификации личности.

2.Лечебные и профилактические процедуры, проводимые в ЦНИЛ.

3.Методы функциональной диагностики.

Материал изложен на основании результатов работы коллектива Центральной научно-

исследовательской лаборатории и сформирован в качестве методического пособия в помощь врачам для облегчения диагностики и назначения лечения.

Данные методическое пособие может быть рекомендовано для повышения качества работы практических врачей.

- 5 -

РЕЦЕНЗИЯ

На «Методическое пособие для врачей, представленное Центральной научно-

исследовательской лабораторией.

Цель методического пособия – ознакомить врачей-лаборантов и врачей поликлиник с алгоритмами выполнения современных клинических и биохимических методов исследования различных биологических жидкостей человека, предоставить современные возможности лабораторных технологий.

В данном пособии 17 глав, в которых представлены современные методы диагностики различных заболеваний, их этиологии, патогенеза, интерпретации результатов, выделены показатели, являющиеся клинической нормой, а также изменения,

возникающие при патологии.

В пособии показана самая современная аппаратура, на которой выполняются методы исследования. Кроме того в главе методы функциональной диагностики указаны методы,

которые применяются в ЦНИЛ: также в ЦНИЛ предлагают лечебные и профилактические процедуры. Очень актуальна тема: молекулярно-генетическое установление отцовства и идентификация личности.

Материал изложен на основании результатов работы коллектива Центральной научно-исследовательской лаборатории и сформирован в качестве методического пособия для врачей для облегчения диагностики, так как, несмотря на массовость проводимых исследований, имеется много разночтений в интерпретации результатов. При клинических и биохимических исследованиях много субъективизма.

Данное методическое пособие может быть рекомендовано для повышения качества работы практических врачей.

- 6 -

III.Исследования, выполняемые при заболеваниях желудочно–кишечного тракта, инфекционной этиологии:

a)Копрология

b)Кал на простейшие

c)Кал на яйца глистов по Като

d)Кал на скрытую кровь

1.Диагностика краснухи

2.Диагностика токсоплазмоза

3.Диагностика цитомегаловируса

4.Диагностика микоплазма пневмоника

5.Диагностика хламидиоза пневмоника

6.Диагностика туберкулеза

1.Исследования гормонов щитовидной железы

2.Исследования гормонов гипофиза

3.Исследования гормонов коры надпочечников и половых желез

4.Исследования гормонов паращитовидной железы

1.Овариальные антитела с определением типа (комплекс IgG, IgA, IgM)

2.Спермальные антитела

3.Антифосфолипидный скрининг – качественный тест, количественный тест

1.Остеоденситометрия

2.Полиморфизмы генов остеопороза (ген VDR и ген CоLLаα)

1.Иммунный статус

2.Циркулирующие иммунные комплексы

3.Фагоцитарная активность нейтрофилов, лейкоцитов

4.Подбор иммуностимуляторов

5.Диагностика аллергии Ig E (общий) и 44 вида аллергенов

6.Диагностика аллергии к лекарственному препарату

1.Анализ функционального состояния сердечно-сосудистой системы организма (ЭКГ)

2.Генетическая оценка наличия мутаций, определяющих функциональное состояние сердечно-сосудистой системы

3.Определение активности воспалительного и атеросклеротического процесса сердечно

– сосудистой системы

1.Контрацепция

2.Удаление остроконечных кондилом, бородавок и папиллом

3.Криодеструкция

4.Прогрев - уретральный, вагинальный, ректальный

5.Магнитофорез – интрауретральный, вагинальный, ректальный

6.Магнитотерапия

7.Массаж предстательной железы

- 8 -

Введение

Котловский Ю.В., д.м.н. профессор. Заведует Центральной научно-исследовательской лабораторией с 1986 г.

Центральная научно-исследовательская лаборатория организована в конце 1965 года на базе Красноярского государственного медицинского института. В лаборатории работают высококвалифицированные медицинские работники, профессор, научные сотрудники (среди сотрудников 12 докторов наук, 18 кандидатов наук).

ЦНИЛ КГМИ оказала помощь в выполнении более 60 докторских и 350 кандидатских диссертаций. Самими сотрудниками ЦНИЛ защищены 6 докторских и 20 кандидатских диссертаций, получено 18 изобретений и внедрено более 150 отраслевых и местных рационализаторских предложений. Опубликовано более 800 статей в печати.

ЦНИЛ - имеет лицензию Министерства здравоохранения РФ на право деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний человека, и выполнения работ с микроорганизмами 3-4 групп патогенности. В ЦНИЛ выполняется 350 методов исследования. Качество исследований гарантируется внутрилабораторным и федеральным контролем, осуществляемым федеральным Центром внешнего контроля качества клинических лабораторных исследований.

ЦНИЛ КрасГМУ - первая лаборатория в крае, разработавшая и внедрившая в практику качественное и количественное определение инфекционных заболеваний и их мутагенную принадлежность ПЦР - методом, и единственная лаборатория в крае, выполняющая сложные методы молекулярной ПЦР - диагностики лейкозов, определения биологического отцовства и идентификации личности.

В настоящее время в лаборатории имеются отделы:

a)Иммуно-ферментного анализа

b)ПЦР - диагностики, вирусных, бактериальных и протозойных инфекций

c)Молекулярно-генетического анализа, синтеза праймеров и сиквенирования ДНК

d)Клинической ГЗЖ – хроматографии

e)Клинической компьютерной диагностики

f)Клинической биохимии

g)Клинической гистологии и морфологии

h)УЗИ - диагностика всех органов

i)Остеоденситометрии

Основные научные направления ЦНИЛ:

соответствуют тематике приоритетных исследований КрасГМУ, а также ведутся разработки и внедрение инновационных методов диагностики заболеваний.

1. Генетическая идентификация личности человека и молекулярно-генетический анализ биологического родства и отцовства. Мы работаем в составе краевой судмедэкспертизы с

- 9 -

кафедрой судебно-медицинской экспертизы (заведующий Донской А.В.) Нами проводилась сложнейшая молекулярно-генетическая экспертиза по идентификации 5 пропавших детей в г. Красноярске. Результат экспертизы был подтвержден экспертным бюро МВД России. Получена высокая оценка экспертизы из Республиканского центра СМЭ Росздрава, а также международного центра Великобритании. Всего нами проведено более 400 сложнейших исследований. За высокое качество молекулярно-генетических исследований, способствующих раскрытию особо тяжких преступлений, имеются благодарности от Краевой Прокуратуры. В настоящее время все выделения по ПЦР проводятся автоматизировано на автоматической станции для выделения и оценки нуклеиновых кислот.

2.Молекулярно-генетический анализ вирусных, бактериальных, протозойных инфекций. Нами проводится комплексная диагностика бактериального вагиноза, генодиагностика гепатита С по 4 аллельным вариантам, Helicobacter pylory по 3 аллельным вариантам и т.д. Всего проведено около 500432 исследований. Имеются благодарности от Красноярского краевого фонда обязательного медицинского страхования.

3.Заболевания сердечно-сосудистой системы. Мы проводим диагностику, лечение, реабилитацию и прогноз. Нами совместно с кафедрами университета проводится выявление роли состояния 17 полиморфизмов генов, ассоциирующих с нарушениями липидного обмена и экспрессии цитокинов воспаления в патогенезе ИБС, установление генетически обусловленных общих закономерностей и механизмов нарушения сердечнососудистых заболеваний. Определение новых путей коррекции, нормализующих функциональную активность сердечно-сосудистой системы.

4.Комплексная диагностика острых и хронических лейкозов, включающая молекулярногенетический анализ (ПЦР - диагностика) и цитогенетический анализ хромосомных аберраций в костном мозге и периферической крови. ЦНИЛ КрасГМУ является дипломантом ВК «Красноярская ярмарка 2000,» Российской выставки «Енисей-Медика 2007» в направлении молекулярно-генетической диагностики хронических и острых лейкозов на территории Восточной Сибири. А также дипломантом Всероссийского форума «Реализация приоритетного национального проекта в сфере здравоохранения 2008», дипломантом Второй общегородской ассамблеи «Красноярск. Технологии будущего 2009» и дипломантом ВК «Красноярская ярмарка 2009». С помощью мультиплексной ПЦР диагностики, способной выявить мутацию в 63 точках ДНК, ЦНИЛ осуществляет точную постановку молекулярно-генетического диагноза острых лейкозов, что помогает уточниться с тактикой лечения больных, продлить ремиссию заболевания и отследить наличие посттерапевтического остаточного мутантного клона лейкозной клетки.

- 10 -

5. Производство наборов для ПЦР - диагностики. В нашей лаборатории освоена технология синтеза и очистки праймеров, имеется необходимое оборудование, и мы можем синтезировать любую последовательность праймеров. Разработаны собственные праймеры (6 пар) для ПЦР - диагностики трихомониаза. Подобраны оптимальные условия ПЦР. Проведена сравнительная диагностика трихомониаза на положительном контроле и пациентах с использованием коммерческих и разработанных нами праймеров. Подбираются условия для мультипраймерной диагностики трихомониаза. Совместно с кафедрой дермато-венерологии КрасГМУ разрабатываются праймеры для идентификации модифицированных под действием лекарственных препаратов участков генома трихомонад. Разработаны и синтезированы праймеры для диагностики хламидиоза (5 пар) Разработка метода находится на стадии оптимизации условий ПЦР. Разработаны и синтезированы праймеры для диагностики лейкозных транслокаций t(11;14)(q23;24), t(11;14)(q13;32)

Центральная научно-исследовательская лаборатория имеет хорошие перспективы в реализации приоритетных научных направлений КрасГМУ и окажет лабораторнодиагностическую, лечебно-консультативную помощь населению Красноярского края и научно-исследовательскую помощь в выполнении на нашей базе кандидатских и докторских диссертаций.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В ЦНИЛ

1.Диагностика заболеваний с использованием иммуноферментного анализа (ИФА)

Воснове иммуноферментного анализа лежит образование комплекса антигенантитело. Одна составляющая комплекса иммобилизована на стенках лунки (пробирки), другая присутствует (или не присутствует) в исследуемой сыворотке крови, которую заливают в лунку (или пробирку). Наличие комплекса антиген-антитело определяют фотометрически по изменению цвета содержимого лунки. Анализ, как правило, длится 2-4 часа.

Впоследнее время для диагностики различных заболеваний используются наборы, которые позволяют проводить анализ за 15 мин. В этом случае наличие комплекса определяется по включению флуоресцентной метки в комплекс и регистрация результата производится на флуориметре. Метод иммунодиагностики, проводится с использованием автоматического анализатора Elecsus. Образованный иммунный комплекс связывается с микрочастицей, которая под действием магнитного поля оседает на электрод. В основе метода лежит электрохемилюминесценция.