6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Группы крови человека

Landsteiner и Wiener [408] и усовершенствован Boorman, Dodd и Mollison [179].

В СССР метод агглютинации в солевой среде был внедрен в Центральном институте переливания крови М.А. Умновой [113] и его применяют до настоящего времени.

Метод отличается точностью и четкостью результатов, однако при его выполнении необходимо отмывать исследуемые эритроциты, готовить из них взвеси и длительно (1 ч) инкубировать взвеси с сывороткой. Перечисленные манипуляции требуют специального оснащения: термостата, центрифуги, микропробирок, что усложняет исследование и увеличивает его продолжительность.

В связи с этим усилия многих исследователей были направлены на упрощение этого метода. Однако многочисленные модификации метода солевой агглютинации, в частности капиллярные методики (Chown [215], Chown, Lewis [217, 220]), пробы с применением центрифугирования (Poole, Williams [534], Harvey [337], Majsky [455]) или выполняемые на плоскости (Wootton [723]), были по существу сведены к упрощению отдельных технических элементов. В целом же определение резус-фактора этим методом продолжает оставаться до настоящего времени относительно сложным и продолжительным лабораторным исследованием. К этому следует добавить и то обстоятельство, что сыворотки с полными антителами, необходимые для метода агглютинации в солевой среде, редко встречаются и их количество ограничено. Однако с внедрением технологий получения моноклональных антител это ограничение было снято.

Более перспективными оказались методы, включающие использование сывороток с неполными антителами. Благодаря относительной простоте и доступности тестовых сывороток они нашли широкое применение как за рубежом, так и в России.

Наибольший практический интерес из этой группы методов представляют конглютинационные пробы, основанные на использовании различных коллоидных жидкостей, которые либо добавляют к тестовой сыворотке, либо взвешивают в них исследуемые эритроциты.

Первая конглютинационная проба с применением в качестве коллоидной среды плазмы крови была предложена Diamond иAbelson [262].

В СССР аналогичный метод был разработан независимо от указанных выше авторов в Ленинградском институте переливания крови Н.И. Блиновым и Н.Д. Дробышевой [21] и впоследствии усовершенствован Т.Г. Соловьевой [104]. Этот метод, получивший название – определение резус-фактора в сывороточной среде на чашках Петри, основан на использовании эритроцитов, взвешенных в собственной сыворотке. Взвесь эритроцитов и тестовых сывороток наносят на чашку Петри, которую затем помещают в водяную баню при температуре 45–48  оС. Результат учитывают после 10-минутной инкубации взвеси по наличию или отсутствию агглютинации эритроцитов. «Чашечный» метод прост и удобен, однако его недостатком является невозможность исследования свежей цельной крови, так как в условиях указанной температуры она свертывается.

291

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Для устранения этого недостатка Е.C. Копосов [67, 68] рекомендовал использовать смесь свежей цельной крови с одногруппной стандартной изогемагглютинирующей сывороткой.

А.Я. Ашкенази [13] предложила другой, более удачный, прием устранения отмеченного недостатка «чашечного» метода. Автор рекомендовала добавлять в тестовую сыворотку гепарин, что позволило определять резус-фактор свежей крови, взятой непосредственно от обследуемого. Тем не менее «чашечный» метод, так же как и другие конглютинационные пробы, основанные на использовании плазмы или сыворотки, нуждался в существенной доработке. Дело в том, что плазма и сыворотка, в которой взвешивают исследуемые эритроциты, обладают относительно низкой конглютинационной активностью, в силу чего агглютинация эритроцитов в большинстве случаев выражена недостаточно сильно. Поиски коллоидных сред с более выраженными конглютинационными свойствами привели исследователей к использованию других естественных и синтетических коллоидов.

Diamond и Denton [263] впервые отметили, что агглютинация эритроцитов выражена в значительно большой степени, если плазму, в которой они были взвешены, заменить раствором альбумина. Позднее эти данные были подтверждены, и альбумин стал широко применяться при определении резус-фактора

(Р.М. Уринсон [118], Tuck [663], Stratton [633], Lawrence [414]).

Fisk и Mc Gee [286] обратили внимание на высокие конглютинационные свойства раствора желатина и предложили использовать его в качестве коллоидной среды при определении резус-фактора и выявлении неполных резусантител. Впоследствии этот метод был модифицирован А.Г. Башлай [15] и до настоящего времени с успехом применяется во многих серологических лабораториях Российской Федерации.

О.В. Успенская [123] привела данные, свидетельствующие о том, что применение раствора желатины при определении резус-фактора позволяет сократить продолжительность этого исследования.

Grubb [324], изучая конглютинационные свойства синтетического плазмозаменителя – декстрана, показал, что титры сывороток антирезус при разведении их декстраном значительно превышают результаты титрования в изотоническом растворе натрия хлорида.

Продолжая начатые Grubb исследования, Jones [382] и Bonnel [178] установили, что декстран по сравнению с изогемагглютинирующими сыворотками и альбумином также обладает более выраженными конглютинационными свойствами.

И.И. Забалуева [54], изучив конглютинационные свойства декстрана, указала на возможность его применения в качестве стандартного разводителя, позволяющего увеличить ресурсы дефицитных сывороток антирезус. Кроме того, использование декстрана при определении резус-фактора значительно повысило демонстративность реакции (А.Я. Ашкенази [9], О.В. Успенская [123]).

292

Наряду с перечисленными коллоидами широкое применение в серологических реакциях нашел также другой синтетический плазмозаменитель – поливинилпирролидон, который не уступает по своим конглютинационным свойствам растворам декстрана (McNeil, Trentelman [474], Stroje и соавт. [637]).

Замена плазмы другими коллоидными разводителями позволила существенно улучшить качество конглютинационных методов, в частности повысить четкость результатов исследования, сократить его продолжительность.

Дальнейшее совершенствование конглютинационных проб способствовало созданию методов, пригодных для определения резус-фактора без нагревательных приборов. Интересные данные получили Eldon [273] и Drachmann [264], Они показали, что сыворотки антирезус, разведенные высокомолекулярным декстраном, приобретают способность специфически агглютинировать эритроциты в условиях комнатной температуры.

Вслед за этим были предложены методы определения резус-фактора без подогрева с использованием альбумина (Murray [499]; Hrubisko, Hrabinska [354]; Sturgeon [640]) и гепарина (А.Я. Ашкенази [13]; Daszynski [250]). Наи­ больший практический интерес представляет метод, разработанный Hrubisko и Hrabinska. При определении резус-фактора этим методом каплю тестовой сыворотки в комбинации с альбумином наносят на предметное стекло и добавляют 5–10 % взвесь эритроцитов в собственной сыворотке. Стекло оставляют на 10 мин при комнатной температуре, после чего учитывают результат.

Таким образом, применение коллоидных растворов с более выраженным, чем у плазмы, конглютинационными свойствами позволило не только сократить продолжительность определения резус-фактора и повысить четкость результатов этого исследования, но и существенно упростить его.

Нами совместно с Р.М. Уринсон и Е.А. Зотиковым [34, 49] был разработан экспресс-метод определения резус-фактора на плоскости без подогрева, основанный на использовании сывороток антирезус в комбинации с альбумином или полиглюкином. Этот метод позволил определять одновременно резус-фактор, его разновидности и группу крови. Благодаря своей простоте и доступности он широко применялся в лечебно-профилактических учреждениях России в период с 1966 г. до конца 1980-х гг., пока не уступил место еще более простым методам с использованием моноклональных антител.

Также перспективным в плане разработки более совершенных методов определения резус-фактора оказалось еще одно направление, а именно использование в серологических реакциях протеолитических ферментов.

Первые сообщения о принципе ускорения реакции антиген – антитело с помо-

щью ферментов появилось в 1946–1947 гг. (Pickles [525], Morton, Pickles [490]).

Вскоре после этого различными авторами был предложен целый ряд серологических методов выявления антигенов и антител с использованием протеолитических ферментов животного, растительного и бактериального происхождения: трипсина

(Morton,Pickles[489],Willert[718],Young[727]),папаина(Löv[449],Gilbey[303]),

293

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

бромелина (Pirofsky и соавт. [528], Moore и соавт. [479], Majsky [456]), протелина

(Р.С.Сахаров[95]),фицина(С.И.Донсков[36])идругихферментов.

Разработка этих методов имела большое практическое значение, так как позволила повысить чувствительность реакции. Более того, с помощью ферментов некоторым авторам удалось создать методы определения резус-фактора, не требующие нагревательных приборов (Р.С. Сахаров [95], С.И. Донсков [36]).

При определении резус-фактора методом, разработанным Hekker с соавт. [344], тестовую сыворотку, папаин, активированный солянокислым цистеином, и взвесь исследуемых эритроцитов наносят на предметное стекло и выдерживают в течение 15 мин при комнатной температуре. После этого стекло покачивают и учитывают результат. Morganti [488] и Esche [274] дали высокую оценку этому методу, подчеркивая его быстроту и наглядность результатов. То же самое можно сказать о методе, предложенномTribedi, Crosbie [662] и Р.С.Сахаровым [95].

Таким образом, была показана принципиальная возможность определения резус-фактора с помощью сывороток в сочетании с высокомолекулярными коллоидами или протеолитическими ферментами и созданы первые методы, такие же быстрые, удобные и простые как определение группы крови.

Моноклональные антирезус-антитела

Для производства моноклональных антител применяют метод гибридизации иммунных лимфоцитов (полученных от иммунизированных людей) с клетками мышиной миеломы или трансформации иммунных лимфоцитов вирусами. Вместо миеломных клеток мыши используют также лимфобластоидные клеточные линии человека. Гетеро- и аллогибридомы обладают способностью к самоподдержанию, присущей опухолевым клеткам, и одновременно способностью продуцировать антитела.Существуетнесколькоспособовгибридизациииммунныхлимфоцитов:

––прямая гибридизация, когда лимфоциты иммунизированного лица сливают с клетками миеломы в расчете, что среди слившихся клеток могут оказаться лимфобласты, продуцирующие моноклональные антитела. Этот способ менее эффективен, поскольку вероятность слияния опухолевых и антителопродуцирующих клеток очень мала; ––реиммунизация in vitro, когда перед слиянием с миеломными клетками иммунные лимфоциты выдерживают с эритроцитами, содержащими соответствующий антиген, то есть иммунизируют их вторично. Этот прием позволяет повысить концентрацию лимфобластов или лимфобластоподобных­ клеток во взвеси иммунных лимфоцитов и таким образом увеличить веро- ятностьполучениятребуемогогибрида-продуцента; ––трансформация иммунных лимфоцитов вирусом Эпштейна – Барр. Этот

способ не требует использования мышиной миеломы. Эффект превращения короткоживущих иммунных лимфоцитов в самоподдерживающуюся линию достигается тем, что встроившийся в геном клетки вирус придает ей способность к безудержной пролиферации.

294

Вирусную трансформацию лимфоцитов, придающую им опухолегенные, малигнизирующие свойства, можно рассматривать как своеобразную гибридизацию ДНК лимфоцитов и ДНК вирусов. В результате такой гибридизации лимфоциты или лимфобластоподобные клетки преодолевают апоптоз (управляемую гибель клеток) и становятся практически бессмертными.

Первые моноклональные анти-D-антитела были получены Bron и соавт. [184], Lowe и соавт. [450], Thompson и соавт. [652] и другими авторами [291, 402, 555]. Вскоре были получены антитела анти-C [651], анти-с [555, 651],

анти-E [651], анти-e [182, 292, 651], анти-G [290, 651], анти-C W [653], антиRh17, анти-Rh29 и анти-Rh46 [580, 659].

Первые в России моноклональные антитела анти-D и анти-DC получены в Центральном НИИ гематологии и переливания крови профессором И.Л. Чертковым с сотрудниками [17, 18, 31].

И.В. Дубинкиным с соавт. получены штаммы гетерогибридом человек × мышь, продуцирующие моноклональные антитела к антигенам D, c, C W, E и др., пригодныедляпромышленногопроизводствадиагностическихреагентов[51,52,53].

Для этого лимфоциты периферической крови доноров, продуцирующих соответ- ствующиеантитела,гибридизировалисклеткамимышиноймиеломыX-63иNS1.

Полученные антитела тестировали по панели стандартных эритроцитов ГНЦ РАМН (табл. 4.40). Класс иммуноглобулинов устанавливали с помощью мышиных моноклональных антител к иммуноглобулинам человека в реакции непрямой иммунофлюоресценции. Титр антител определяли посредством реакции в солевой и коллоидной среде, а также непрямой реакции Кумбса в зависимости от принадлежности антител к тому или иному классу иммуноглобулинов

(табл. 4.41).

Таблица 4.40

Протокол испытания моноклональных антител со стандартными эритроцитами

Оптимальным разводителем моноклональных антител анти-Rh, позволившим получать активные и специфичные тестовые реагенты, явились растворы с низкой ионной силой в комбинации с коллоидами полисахаридной природы. В настоящее время эти реагенты широко применяют в лечебнопрофилактических учреждениях России.

295

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Инструментальные методы выявления антител

История инструментальных автоматизированных методов иммуносерологического исследования начинает свой отсчет с 1960-х годов.

В 1963 г. в США McNeil и соавт. [473] предложили для определения группы крови анализатор «Техникон», применявшийся для биохимических исследований. В основу прибора положен принцип движущихся порций эритроцитов, отделенных друг от друга воздушной перемычкой, по спирально извитым пластиковым трубкам, в которые подают тестовые стандартные сыворотки. Длина трубок и скорость проталкивания образцов были рассчитаны таким образом, чтобы тестовые сыворотки успевали прореагировать с антигенами исследуемых эритроцитов. Результаты учитывали фотометрическим методом: измерением разности светопоглощения реагирующей смеси до и после реакции.

Анализатор McNeil представлял собой одноканальный прибор, что не позволяло проводить несколько исследований параллельно.

Для повышения чувствительности анализатора Sturgeon и соавт. [641] предложили предварительную обработку эритроцитов протеолитическими ферментами растительного происхождения. Наиболее эффективным для этих целей оказался бромелин – фермент, выделяемый из млечного сока стеблей ананасов.

Далее Sturgeon и соавт. [643] применили многоканальные варианты прибора, анализирующие образец крови одновременно по нескольким параметрам, что существенно расширило возможности анализатора и его пропускную способность. Авторы сконструировали 8-канальный прибор, определяющий группу крови АВО и резус.

Затем были сконструированы 10–15-канальные системы (Peoples и соавт. [518], Moore, Fernandes и соавт. [478]), что позволило автоматизировать не только определение антигенов эритроцитов АВО и резус, но и проводить реакции на сифилис (Shoeter и соавт. [610]) и австралийский антиген (Berkman и соавт. [166], Moore, Fernandes [478]).

296

Широкое применение нашел БМЦ-тест (бромелинметилцеллюлозный), который повысил чувствительность приборов при выявлении антител Rh-Hr, Lewis, Kell, Daffy.

Заметным прогрессом в развитии автоматизированных методов серологического исследования явилась предложенная Lalezari [407] методика с использованием полибрена, с помощью которой выявляли антигены и антитела системы Daffy, Kell, Kidd, МNSs в тех случаях, когда ферментная техника оказывалась неэффективной.

Протеолитические ферменты существенно активируют реакцию связывания антигенов и антител системы резус, однако, по мнению некоторых авторов, разруша-

ютантигеныKell,Daffy(Nevaulinna,Pircola[505],А.А.Рагимов,Н.Г.Дашкова[92]). Habibi и соавт. [332] применили одновременно несколько ферментных тестов: ПМЦ-тест (папаинметилцеллюлозный), ТМЦ-тест (трипсинметилцеллюлозный) и полибреновый тест, что дало возможность проводить скрининг антител различного характера с максимально широкой специфичностью, улавливать те разновидности антител, которые выявляют исключительно каким-

либо одним методом.

Более того, была автоматизирована антиглобулиновая проба Кумбса (Valeri и соавт. [675]), что создало предпосылки для внедрения оборудования, предназначенного для повседневного автоматизированного скрининга антител различной специфичности (Cotton, Ray [239], Moore [477]), в том числе аутоантител, фиксированных на эритроцитах (Gorska и соавт. [310]), а также послужило основой автоматизации пробы на индивидуальную совместимость донора и реципиента при переливании эритроцитов (Wattar и соавт. [699]).

Rowe и соавт. [586] предложили полностью автоматизированную многоканальную систему «Техникон М-16» с микропроцессорным оснащением для интерпретации результатов серологических реакций и ввели в систему сканирующее лазерное устройство, идентифицирующее исследуемые образцы крови по бар-коду. Впервые бар-код в анализаторах групп крови был применен во французских приборах «Групаматик».

Одновременно с созданием в США анализаторов групп крови «Техникон» во Франции с 1963 по 1969 год под руководством Matte [465] была разработана принципиально отличающаяся автоматизированная система «Групаматик»

(Groupamatic-50, -250, -360 соответственно на 50, 250, 360 определений в 1ч).

Вотличиеотаппаратов«Техникон»вприборах«Групаматик»былпримененкомпьютер, что обеспечило автоматическую интерпретацию результатов и вывод их на печать. Наиболее производительный вариант прибора представлял собой 12-каналь- нуюсистему,рассчитаннуюнаисследование360образцовкровив1ч(Soulier[621]).

Другое немаловажное отличие системы «Групаматик» от системы «Техникон» заключалось в способе учета результатов серологических реакций. Визуальный учет результатов в автомате был заменен оптическим способом регистрации: фотометрией жидкой части смеси и осадка (Unger, Ramgren [672]).

297

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Вприборах «Групаматик» для повышения чувствительности реакции было применено центрифугирование реагирующей смеси с последующим ресуспендированием посредством встряхивания. Это важная деталь в проведении иммуносерологических реакций.

Весьма существенным также было то, что выдачу ошибочных результатов (не укладывающихся в закономерности групповой дифференцировки крови людей) прибор блокировал.

Последующее техническое усовершенствование автоматов «Групаматик» позволило увеличить объем исследований, выполняемых при апробации донорской крови, а именно: ввести исследование сыворотки крови доноров на сифилис, гепатит, а также идентифицировать дозы крови при их выдаче потребителю, что при обычном, не автоматизированном, выполнении этой процедуры было источником ошибок (Р.А. Авдеева, Л.П. Лаврова [5]).

Ваппаратах«Групаматик»успешноприменяютсятежеметоды,чтоиваппаратах «Техникон»: бромелинметилцеллюлозная техника (Garetta и соавт. [297]), трипсинполибренцитратная техника (Confida и соавт. [235]), антиглобулиновый метод (Matte [466]), реакция конглютинации в коллоидных средах (Habibi и соавт. [333]). Базовой серологической методикой приборов «Групаматик» является бромелиновая техника, обеспечивающаяоптимальноеопределениенаиболеезначимыхфактороввклинической трансфузиологии – группы крови АВО и резус-принадлежности (Haahty [330], О.К.Гавриловидр.[25],Р.А.Авдееваидр.[4,5],Л.П.Лавроваидр.[73,74]).

Приборы «Групаматик» нашли применение в США, Англии, Японии, Швеции, Австрии. По своим техническим характеристикам – пропускной способности, чувствительности реакций, надежности получаемых результатов – они выгодно отличались от других автоматов (Soustelle и соавт. [623]).

Известны модификации приборов для определения групп крови: «миниГрупаматик» (Reviel, Emblin [562]) и варианты прибора «Техникон» (Severns и соавт. [603]), позволяющие выполнять реакцию в микроплатах, что существенно сокращает расход реагентов (Descamps и соавт. [260]).

Обращает на себя внимание предложенный в 1986 г. метод агглютинации в геле [261], который представляет собой комбинацию двух методов: агглютинации и гель-фильтрации*.

Попытки создания автоматических анализаторов групп крови были предприняты и в нашей стране. В 1990 г. в Гематологическом научном центре Российский Академии медицинских наук совместно с научно-исследовательским и конструкторским институтом медицинской лабораторной техники Минмедпрома СССР

был разработан и успешно прошел лабораторные испытания первый отечественный анализатор групп крови – АГК-01 (А.Н. Алипов и др. [7], Р.С. Каландаров [63]). Прибор представлял собой полуавтоматическую систему, в которой были автоматизированы отдельные этапы реакции: разведение пробы, перемешивание

*Метод подробно описан в книге А.А. Рагимова и Н.Г. Дашковой: «Основы трансфузионной иммунологии» [91].

298

ингредиентов реакции (эритроцитов и сывороток), центрифугирование смеси, учет результатов реакции, вывод результатов на печать. Производительность прибора – 48 образцов крови в час.

Понашемумнению,реакцияагглютинацииэритроцитовкакспецифическийфе- номен–быстропротекающийпроцесс,имеющийсложныебио-физико-химические составляющие. Этот взгляд нашел подтверждение в работах Р.С. Каландарова [63], атакжедругихавторов(Wardlawисоавт.[698],В.С.Андреев[8]).

Поискновыхфизическихпринциповоценкиреакцииагглютинациипредставляет чрезвычайныйинтересдлятеорииипрактикииммуносерологическихисследований.

Впоследние годы получены интересные данные о своеобразном действии ультразвука на взвесь корпускулярных частиц (Н.Н. Князьков [65]). Ультразвук нарушает суспензионную стабильность эритроцитов и приводит к их быстрому оседанию (С.И. Донсков и др. [43], Р.С. Каландаров и др. [63, 64]).

Втечение нескольких секунд после подачи ультразвука взвесь эритроцитов расслаивается, образуются видимые агрегаты эритроцитов, которые после отключения ультразвука начинают быстро оседать на дно пробирки. Как отмечают Н.Н. Князьков [65] и Р.С. Каландаров [63], ультразвук может найти применение в анализаторах серологических реакций нового поколения.

Впоследние годы Narayanan и соавт. [503] разработали новую технологию типирования крови, основанную на спектроскопии в видимой и ультрафиолетовой части спектра. Группу крови определяют по изменению оптической плотности взвеси эритроцитов в присутствии агглютинирующих антител. Оптическая плотность ниже 665 нм соответствует отрицательному результату, выше 1000 нм – положительному. С помощью этого метода удалось с достаточно высокой степенью совпадения определять группу крови и резус-принадлежность.

Несмотрянаочевидныеуспехивразвитииавтоматизированныхсерологических методовисследования,возможностиихсовершенствованиядалеконеисчерпаны.

Идеология конструирования анализаторов серологических реакций первого поколения (приборы «Техникон», «Групаматик», «Контифло») базировалась на принципе полной автоматизации без участия оператора, чтобы исключить ошибки, связанные с так называемым человеческим фактором. Процесс определения, согласно этой идеологии, должен быть поточным (конвейерным) и по возможности универсальным, пригодным для определения максимального спектра антигенов и антител, отличающихся своими серологическими и физико-химическими характеристиками. Такое оборудование предназначалось для крупных банков крови, имеющих огромную производительность. Однако за всем этим не усматривались потребности небольших, но наиболее многочисленных, особенно для Российской Федерации, структур – отделений и кабинетов переливания крови. Их в Российской Федерации насчитывается более 1000.

Специальное малогабаритное оборудование разработанное Н.И. Васильевым [24], адаптировано для проведения пробы на индивидуальную совместимость

299

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

крови донора и реципиента в условиях отделения переливания крови, в непосредственной близости от постели больного.

Оценка чувствительности инструментальных методов выявления антител

Как указывают многие исследователи, вновь создаваемые методы определения антител должны быть по уровню чувствительности не ниже классической непрямой пробы Кумбса с использованием раствора низкой ионной силы (LISS) (Voak [679, 680], Bruce и соавт. [185], BCSH (Британский комитет по стандартизации в гематологии) [557], Poole и соавт. [533]).

Weisbach и соавт. [701] сравнили результаты определения антиэритроцитарных антител с помощью микрокапиллярных колонок и непрямой пробы Кумбса и нашли, что чувствительность микрокапиллярного метода в отношении клинически значимых антител несколько выше, чем непрямой реакции Кумбса. Однако авторы не могли выявить анти-Jk а-антитела обоими сравниваемыми методами в 4 из 12 случаев.

Уместно подчеркнуть, что определение антител с помощью микрокапиллярных колонок включало инкубацию реагирующей смеси в течение 15 мин, а в непрямой реакции Кумбса инкубация составляла 10 мин, что весьма существенно.

Fitzsimmons и Morel [287] установили, что увеличение времени инкубации реагирующей смеси повышает чувствительность непрямой реакции Кумбса. Дополнительные 5 мин инкубации могут быть решающими в выявлении более слабых антител.

Voak и соавт. [682] также привели данные о том, что продолжительность инкубации важна для выявления некоторых образцов слабых антител анти-Jk а, анти-Fy b и анти-K при использовании 1,5–2 % суспензии эритроцитов в растворе низкой ионной силы.

Bromilow и соавт. [183], Kretschmer и соавт. [399] считают, что тесты на ми-

крокапиллярныхколонкахDiaMed (Швейцария)чувствительнее,ноVoakисоавт. [681], Phillips и соавт. [524], Pinkerton и соавт. [527] отмечают, что этот тест не бо-

лее чувствителен, чем хорошо выполненная непрямая проба Кумбса с LISS.

На наш взгляд, возможные причины того, что методы, основанные на использовании микрокапиллярных колонок, дают лучшие результаты, чем непрямая проба Кумбса с LISS, могут заключаться, в следующем:

––микрокапиллярные гелевые технологии включают центрифугирование реагирующих ингредиентов непосредственно во время реакции, что существенно усиливает агглютинацию эритроцитов. Центрифугирование при выполнениинепрямойпробыКумбсаиспользуюттолькодляотмывания эритроцитов и это никак не сказывается на выраженности агглютинации. В то же время, если использовать центрифугирование на стадии взаимодействия сенсибилизированных эритроцитов с антиглобулиновой сывороткой, то выраженность реакции можно существенно усилить;

300