6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Внутренние_болезни_Лабораторная_и_инструментальная_диагностика_Ройтберг

раствора тромбина и по секундомеру определяют время образования сгустка. В норме тромбиновое время составляет 15–

18 с.

Определение тромбинового времени позволяет оценить конечный этап свертывания крови (превращение фибриногена в фибрин). Тромбиновое время, таким образом, зависит от концентрации фибриногена, его свойств и наличия в крови ингибиторов тромбина (гепарин, антитромбин III).

Причинами удлинения тромбинового времени являются:

1.Афибриногенемия и гипофибриногенемия.

2.ДВС-синдром и другие патологические

состояния, сопровождающиеся феноменом паракоагуляции с нарушением процесса полимеризации фибрина и нарастанием концентрации в крови продуктов деградации фибрина (ПДФ).

3.Тяжелые поражения белковосинтетичекой функции печени, сопровождающиеся снижением синтеза фибриногена.

4.Острый фибринолиз (см. ниже).

5.Увеличение в крови концентрации ингибиторов

тромбина (антитромбина III, гепарина).

Определение тромбинового времени используется для контроля за лечением гепарином и фибринолитиками.

Аутокоагуляционный тест (АКТ)

Метод заключается в исследовании динамики образования и инактивации тромбина в разведенной в 20 раз и гемолизированной крови пациента при добавлении гипотонического раствора кальция хлорида.

Оценивается свертывающая активность гемолизаткальциевой смеси с помощью гемокоагулографа (рис. 1.97).

Рис. 1.97. Внешний вид гемокоагулографа

Гемолизированные эритроциты обеспечивают контактную и фосфолипидную активацию процесса свертывания (подобно каолину и кефалину при исследовании активированного частичного тромбопластинового времени). Таким

образом, аутокоагуляционный тест оказывается чувствительным к нарушениямвнутреннего механизма свертывания. Аутокоагулогра мма и определение некоторых ее параметров показано на рис.

1.98. В табл. 1.15 представлены нормальные величины этих показателей.

Рис. 1.98. Аутокоагулограмма здорового человека.

По оси ординат — свертывающая активность гемолизат-кальциевой смеси в процентах, по оси абсцисс — время инкубации гемолизат-кальциевой смеси в минутах

Таблица 1.15

Основные показатели аутокоагулограммы у здоровых людей

Запомните

Увеличение значений T1 и Т2, а также уменьшение А и МА свидетельствуют о гипокоагуляции, которая может быть обусловлена:

1)дефицитом факторов внутреннего механизма свертывания (XII, XI, IX, VIII);

2)дефицитом факторов X и V (―проактиватора протромбина‖);

3)дефицитом факторов конечного этапа коагуляции (I и II);

4)избытком ингибиторов тромбина (гепарин, антитромбин III и др.).

Тромбоэластография

Широкое распространение в клинической практике получил метод тромбоэластографии, который позволяет регистрировать свертывание крови и изменения упругости сгустка крови во времени (ретракцию и лизис).

Основной частью любого типа тромбоэластографа (гемокоагулографа) является кювета, в

которую вносят исследуемую кровь (рис. 1.99). В кювету погружают стержень с диском или пластиной на конце, которая не касается ее стенок. Стержень связан с регистрирующим устройством тромбоэластографа. Специальное устройство придает кювете колебательновращательные движения, которые могут передаваться на

стержень (и регистрирующее устройство), только когда в кювете, заполненной кровью, начнется образование нитей фибрина. По мере образования и уплотнения сгустка амплитуда колебаний стержня увеличивается и достигает максимума (рис. 1.100, а).

Рис. 1.99. Устройство тромбоэластографа (схема). Объяснение в тексте

Предложено множество количественных показателей тромбоэластограммы, три из которых заслуживают внимания:

1.Время реакции (R) — время от начала исследования до начала свертывания крови (первых отклонений тромбоэластограммы от прямой линии).

2.Время коагуляции (К) — время от начала движений стержня прибора до момента, когда амплитуда тромбоэластограммы составит 20 мм.

3.Максимальная амплитуда (МА)тромбоэластограммы.

Считается, что время R характеризует в основном первую фазу коагуляции, а время К — интенсивность образования фибрина. Нормальные величины приведенных трех показателей тромбоэластограммы обычно устанавливают эмпирически для

каждого прибора. В среднем у здоровых людей время реакции (R) составляет 4-10 мин, время коагуляции (К) — 5-7 мин, а максимальная амплитуда (МА) — 45-65 мин.

Запомните

Для гиперкоагуляции крови характерно укорочение R, К и увеличение МА (рис. 1.100, б), а для гипокоагуляции — удлинение R и К и уменьшение МА (рис. 1.100,

в).

Рис. 1.100. Тромбоэластограмма в норме (а), при гиперкоагуляции (б) и гипокоагуляции (в). Схема

Следует отметить, что в целом чувствительность тромбоэластографии к нарушениям гемокоагуляции достаточно низкая, сопоставимая с чувствительностью времени свертывания крови, а тромбоэластографические показатели лишь весьма приблизительно отражают отдельные стадии процесса коагуляции. Тем не менее, тромбоэластография

может использоваться в клинике для динамического контроля за лечением антикоагулянтами.

Принципы оценки базисных методов диагностики нарушений коагуляционного гемостаза

Оценка свертывания крови с помощью описанных базисных тестов позволяет составить общее ориентировочное представление о процессе коагуляции крови. При этом следует иметь в виду, что такие показатели как время свертывания крови и время рекальцификации плазмы обладают весьма низкой чувствительностью и специфичностью, и, следовательно, информативностью: они изменяются, как правило, лишь при выраженных нарушениях коагуляции крови и не позволяют судить (хотя бы предположительно) о повреждениях отдельных ее механизмов и этапов.

Преимуществом в этом отношении обладают три базисных теста: 1) тромбиновый, 2) протромбиновый, 3) АЧТВ или АКТ (их изменения сходны). Они позволяют судить не только о состоянии всей свертывающей системы в целом, но и о возможной недостаточности отдельных факторов свертывания.

1.При дефиците фактора VII (проконвертина), участвующего только во внешнем механизме свертывания, удлиняется только протромбиновое время, а тромбиновый тест и АЧТВ остаются без изменения.

2.При дефиците факторов XII, XI, IX, VIII и

прекалликреина, участвующих только во внутреннем механизме коагуляции, изменяются АЧТВ (и АКТ), а

протромбиновое и тромбиновое время свертывания остаются нормальными.

3. При дефиците факторов X, V, II, на которых замыкаются оба механизма свертывания, нарушения обнаруживаются как

в протромбиновом тесте, так и в АЧТВ. Тромбиновое время при этом не изменяется.

4.Наконец, при нарушениях количества, структуры и свойств фибриногена (фактор I) изменения выявляются при выполнении всех трех базисных тестов. При этом целесообразно также оценить уровень фибриногена в сыворотке крови (см. ниже).

5.При дефиците фактора XIII показания всех трех базисных тестов оказываются нормальными.

Дальнейшее уточнение механизмов нарушения коагуляции крови производят с помощью дифференцирующих тестов, подробно описанных в специальных руководствах.

Определение фибриногена

Наибольшее распространение в клинической практике получили два метода определения фибриногена.

Гравиметрический метод заключается в высушивании и взвешивании сгустка, который образуется при добавлении в плазму 0,2 мл стандартного раствора тромбина. Колориметрический метод также основан на превращении фибриногена в фибрин путем добавления в плазму раствора тромбина. Фибриновый сгусток подвергают гидролизу, а в гидролизат добавляют биуретовый реактив (см. выше)

и колориметрируют, определяя концентрацию белка.

Оба метода дают близкие результаты. Содержание фибриногена в плазме здорового человека составляет 2–4 г/л.

Уменьшение концентрации фибриногена наблюдается:

1.при врожденной недостаточности фибриногена (афибриногенемия, гипофибриногенемия, некоторые варианты дисфибриногенемии);

2.при тяжелых заболеваниях паренхимы печени (цирроз, рак, гепатит);

3.при ДВС-синдроме;

4.при остром фибринолизе (см. ниже).

Нередко встречается увеличение концентрации фибриногена. Наиболее частыми причинамигиперфибриногенемии являются:

1.острые инфекционные заболевания;

2.острые и хронические воспалительные заболевания;

3.злокачественные новообразования;

4.тромбозы и тромбоэмболии, в том числе у больных острым инфарктом миокарда, ишемическим инсультом и т. п.

Определение высокомолекулярных производных фибриногена

Наиболее важными в практическом отношении высокомолекулярными производными фибриногена являются: 1) растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК) и 2) продукты деградации фибриногена (ПДФ).

РФМК представляет собой высокомолекулярные растворимые комплексы фибрин-мономера с фибриногеном и с продуктами расщепления фибриногена/фибрина. В норме РФМК не обнаруживаются. Появление РФМК в плазме свидетельствует о нарушении процесса нормальной полимеризации фибринмономеров. РФМК плохо коагулируют под влиянием тромбина, обладая относительной тромбинрезистентностью.

ПДФ в небольших количествах образуются и в норме в результате расщепления фибрина, присутствующего в плазме и в отложениях, под влиянием плазмина (см. ниже).

Повышение содержания ПДФ — признак усиливающегося внутрисосудистого свертывания крови или массивных тромбоэмболий, сопровождающихся активацией фибринолитической системы.

Определение растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК). Для выявления РФМК в клинике чаще используются так называемыепаракоагуляционные тесты. Они основаны на феномене неферментативного свертывания РФМК: при добавлении к плазме, в которой содержатся РФМК, 50% раствора этанола или 1% раствора протамина сульфата из растворимых комплексов фибрин-мономера с продуктами расщепления фибриногена/фибрина и фибриногеном высвобождаются фибрин-мономеры, которые затем полимеризуются с образованием геля.

Проба с 50% раствором этанола является более чувствительной. В пробирку набирают 0,15 мл 50% этанола и 0,5 мл плазмы. Пробирку встряхивают и помещают в штатив при комнатной температуре. Проба расценивается

как положительная, если через 1–10 мин в пробирке образуется гель. Помутнение или появление небольшой зернистости является признаком отрицательной пробы (нормальный показатель).

Проба с протамина сульфатом позволяет выявить не только полимеризацию фибрин-мономеров, высвобождающихся из РФМК, но и обнаружить осаждение ранних продуктов расщепления фибриногена/фибрина.

Перед началом исследования предварительно готовят 5 разведений 1% раствора протамина сульфата (в 5, 10, 20, 40 и 80 раз). В каждое из приготовленных разведений добавляют 0,2 мл плазмы. Пробирки оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Оценка результатов проводится так же, как и в пробе с этанолом. В норме отрицательный результат обнаруживают во всех разведениях протамина сульфата. Если хотя