4 курс / Акушерство и гинекология / Кадырова_Л_В_Дифференцировка_Т_лимфоцитов_в_динамике_беременности
.pdf51
CD45RA+CD62Lклеток в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05 в обоих случаях).
Таблица 3.2.1. Содержание центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-
дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности
Показатель |
CD45RA-CD62L+ |
CD45RA-CD62L- |
CD45RA+CD62L- |
|
% |
(Tcm) |
(Tem) |
(Temra) |
|
Группа |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Небеременные |
39,75±1,53 |
23,11±1,58 |
2,48±0,40 |
|
доноры (n=29) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
1 триместр |
37,58±1,50 |
21,76±1,89 |
2,56±0,41 |
|
(n=41) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
2 триместр |
33,97±1,73** |
20,82±1,69 |
3,19±0,53 |
|
(n=39) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
3 триместр |
34,13±1,41*** |
23,36±2,99 |
2,75±1,76 |
|
(n=35) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
В скобках дано число |
проведенных исследований. |
|
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (** - p<0,02;*** - p<0,01).
Сравнение средних значений анализируемых показателей у беременных женщин 3 триместра гестации и небеременных доноров показало, что к концу гестационного процесса в популяции периферических CD4+ клеток сохранялся достоверно сниженный уровень Tcm клеток (p<0,01), при отсутствии достоверных отличий показателей содержания Tem и Temra клеток (p>0,05 в обоих случаях). Нами не было выявлено статистически значимых различий в содержании центральных, претерминально-дифференцированных и терминальнодифференцированных клеток памяти в популяции Т-хелперов периферической крови в зависимости от срока беременности в 1, 2 и 3 триместрах гестации (р>0,05
52
во всех случаях).
Наиболее выраженные изменения в содержании клеток памяти в динамике гестационного процесса при неосложненной беременности отмечались нами в популяции периферических CD8+ лимфоцитов.
В таблице 3.2.2. представлены данные по содержанию центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов в динамике неосложненной беременности.
Таблица 3.2.2. Содержание центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-
дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов в динамике неосложненной беременности
Показатель |
CD45RA-CD62L+ |
CD45RA-CD62L- |
CD45RA+CD62L- |
|
% |
(Tcm) |
(Tem) |
(Temra) |
|
Группа |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Небеременные |
12,26±0,89 |
25,75±1,72 |
28,83±2,44 |
|
доноры (n=36) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
1 триместр |
11,24±0,69 |
21,36±1,42* |
29,23±1,89 |
|
(n=54) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
2 триместр |
8,82±0,57*** ххх |
19,06±1,45*** |
32,22±2,49 |
|
(n=35) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
3 триместр |
10,79± 4,36 |
23,45± 2,76 v |
28,17±1,95 |
|
(n=43) |
||||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
В скобках дано число проведенных исследований. |
|
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой небеременных доноров (*- p<0,05;*** - p<0,01);
х - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 1 триместра гестации (ххх - p<0,01);
v - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой беременных женщин 2 триместра гестации (v - p<0,05).
53
При анализе данных содержания клеток памяти, находящихся на различных этапах дифференцировки, в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови нами было установлено, что в 1 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности достоверно снижался уровень претерминально-дифференцированных клеток по сравнению с показателями в группе небеременных доноров (p<0,05). Содержание центральных и терминальнодифференцированных клеток памяти в популяции периферических ЦТЛ в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05 в обоих случаях). Изменения, отмеченные нами в 1 триместре беременности в пуле периферических ЦТЛ в виде достоверного снижения уровня Tem клеток, сохранялись и во 2 триместре гестации, но были более выраженные при сравнении с аналогичным показателем небеременных доноров (p<0,01). Кроме того, во 2 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности наблюдалось достоверное снижение содержания центральных клеток памяти при сравнении, как с группой доноров, так и с группой беременных женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (p<0,01 в обоих случаях). Уровни претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток в популяции CD8+ лимфоцитов периферической крови во 2 триместре неосложненной беременности достоверно не отличались от аналогичных показателей 1 триместра неосложненной беременности (p>0,05 в обоих случаях). Нами не было выявлено статистически значимых отличий в содержании клеток памяти, находящихся на различных этапах дифференцировки, в 3 триместре гестации в популяции периферических CD8+ лимфоцитов по сравнению c группой небеременных доноров (р>0,05 во всех случаях). Однако в 3 триместре гестации в группе женщин с неосложненным течением беременности в популяции периферических ЦТЛ достоверно повышался уровень Tem клеток (p<0,05), при отсутствии достоверных различий показателей содержания Tcm и Temra клеток относительно аналогичных параметров группы женщин 2 триместра гестации (p>0,05 в обоих случаях).
54
Для оценки состояния иммунной системы дополнительно к стандарту иммунологического обследования беременной женщины в динамике гестационного процесса рекомендуется проводить оценку характера дифференцировочного процесса Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови. Для этого мы провели ретроспективный анализ уровня наивных клеток, центральных, претерминально-диффренцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях CD4+ и CD8+ лимфоцитов периферической крови у 85 женщин с неосложненным течением беременности лонгитудинально в 1 триместре (5-8 недель гестации), 2 триместре (16-20 недель гестации) и 3 триместре (28-32 недели гестации). На основании полученных данных был произведен расчет нормативных показателей содержания наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминальнодифференцированных (Tem) и терминально-дифференцированных (Temra) клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов на основе 95% доверительного интервала. Полученные данные представлены в таблицах 3.2.3., 3.2.4., 3.2.5.
Таблица 3.2.3. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,
претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в 1 триместре неосложненной беременности
Показатель, % |
CD4+ лимфоциты |
CD8+ лимфоциты |
|
|
|
CD45RA+CD62L+ (Tn) |
35,7-42,7 |
33,1-43,4 |
|
|
|
CD45RA-CD62L+ (Tcm) |
34,1-40,7 |
8,4-11,5 |
|
|
|
CD45RA-CD62L- (Tem) |
17,6-26,1 |
17,1-24,4 |
|
|
|
CD45RA+CD62L- (Temra) |
1,6-3,4 |
26,4-35,7 |
|
|
|
55
Таблица 3.2.4. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,
претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов во 2 триместре неосложненной беременности
Показатель, % |
CD4+ лимфоциты |
CD8+ лимфоциты |
|
|
|
CD45RA+CD62L+ (Tn) |
37,3-46,9 |
34,9-45,0 |
|
|
|
CD45RA-CD62L+ (Tcm) |
30,5-37,5 |
7,7-10,0 |
|
|
|
CD45RA-CD62L- (Tem) |
17,4-24,2 |
16,1-22,0 |
|
|
|
CD45RA+CD62L- (Temra) |
2,1-4,3 |
27,2-37,3 |
|
|
|
Таблица 3.2.5. Нормативные значения содержания наивных клеток, центральных,
претерминально- и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяциях периферических Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов в 3 триместре неосложненной беременности
Показатель, % |
CD4+ лимфоциты |
CD8+ лимфоциты |
|
|
|
CD45RA+CD62L+ (Tn) |
36,2-44,3 |
32,6-41,9 |
|
|
|
CD45RA-CD62L+ (Tcm) |
33,8-39,4 |
8,5-13,0 |
|
|
|
CD45RA-CD62L- (Tem) |
17,8-25,1 |
20,7-26,8 |
|
|
|
CD45RA+CD62L- (Temra) |
1,9-3,3 |
24,0-32,6 |
|
|
|
Таким образом, при неосложненной беременности в периферической крови женщин изменения в содержании клеток памяти определялись снижением содержания центральных клеток памяти в популяции ЦТЛ во 2 триместре и Т- хелперов во 2 и 3 триместрах гестации, а также снижением уровня
56
претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции ЦТЛ в 1 и 2 триместрах гестации и повышением пула этих же клеток в 3 триместре гестации относительно 2 триместра беременности.
3.3. Особенности дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов периферической крови женщин с развившимся впоследствии
самопроизвольным выкидышем
Развитие невынашивания беременности сопровождается повышением проницаемости плаценты и ведет к усиленному поступлению антигенов плода в кровоток беременной женщины, что может определять дифференцировку клеток памяти [9, 184]. Переход клеток на новую стадию дифференцировки изменяет их функциональные свойства [105]. Нарушение дифференцировки лимфоцитов может вести к изменению процессов иммунорегуляции, определяя неадекватный иммунный ответ матери на антигены плода, способствуя формированию патологии беременности [171, 9, 182, 47]. Для уточнения иммунных механизмов развития самопроизвольного выкидыша нами было проведено исследование особенностей дифференцировки Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови женщин с неоложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.
В таблице 3.3.1. представлены данные по содержанию наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических Т- хелперов женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.
Анализ данных содержания клеток, находящихся на различных этапах дифференцировки, в популяции периферических CD4+ лимфоцитов в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем выявил
57
достоверное повышение уровня наивных клеток и терминальнодифференцированных клеток памяти и достоверное снижение содержания центральных клеток памяти (p<0,05 во всех случаях) по сравнению с аналогичными показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации. Содержание претерминальнодифференцированных клеток в популяции периферических Т-хелперов в сравниваемых группах не имело достоверных различий (p>0,05).
Таблица 3.3.1. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-
дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD4+ лимфоцитов беременных женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем
|
Неосложненное течение |
Развившийся выкидыш |
|
Показатель (%) |
беременности |
||
(n=9) |
|||
|
(n=54) |
||
|
|
||
|
|
|
|
CD45RA+CD62L+ (Tn) |
38,98±1,58 |
46,99±2,93* |
|
|
|
|
|
CD45RA-CD62L+ (Tcm) |
37,58±1,50 |
27,74±3,57* |
|
|
|
|
|
CD45RA-CD62L- (Tem) |
21,76±1,89 |
23,27±2,60 |
|
|
|
|
|
CD45RA+CD62L- (Temra) |
2,56±0,41 |
13,11±4,28* |
Вскобках дано число проведенных исследований.
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (*- p<0,05).
Втаблице 3.3.2. представлены данные по содержанию наивных клеток (Tn), центральных (Tcm), претерминально-дифференцированных (Tem) и терминальнодифференцированных (Temra) клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности 1 триместра гестации и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем.
58
Таблица 3.3.2. Содержание наивных клеток, центральных, претерминально-
дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов беременных женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем
|
|
Неосложненное течение |
Развившийся выкидыш |
|
Показатель (%) |
беременности |
|||
(n=9) |
||||
|
|
(n=54) |
||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
CD45RA+CD62L+ |
(Tn) |
38,18±1,97 |
38,98±5,15 |
|
|
|
|
|
|
CD45RA-CD62L+ |
(Tcm) |
11,24±0,69 |
8,85±2,61 |
|
|
|
|
||
CD45RA-CD62L- (Tem) |
21,36±1,42 |
15,00±2,70 |
||
|
|
|
||
CD45RA+CD62L- (Temra) |
29,23±1,89 |
37,22±2,90* |
Вскобках дано число проведенных исследований.
* - коэффициент достоверности разности результатов по сравнению с группой женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (*- p<0,05).
Как видно из приведенных результатов, в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем в популяции периферических CD8+ лимфоцитов достоверно повышалось содержание терминальнодифференцированных клеток памяти (p<0,05) при сравнении с аналогичным параметрам группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации.
Нами не было выявлено статистически значимых отличий в содержании наивных клеток, центральных и претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови в группе женщин с развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем по сравнению с соответствующими показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации (р>0,05 во всех случаях) (таблица
3.3.2.).
59
Для оценки возможности использования показателя содержания наивных лимфоцитов с фенотипом CD45RA+CD62L+ в популяции периферических Т- хелперов для прогнозирования самопроизвольного выкидыша у беременных женщин мы провели ретроспективный анализ уровня Tn клеток у 67 беременных женщин 1 триместра гестации. На основании полученных данных был разработан способ прогнозирования самопроизвольного выкидыша по относительному содержанию CD45RA+CD62L+ лимфоцитов в популяции Т-хелперов периферической крови у беременных женщин 1 триместра гестации (положительное решение о выдаче патента от 14 мая 2014г). Способ основан на определении относительного (процентного) содержания CD45RA+CD62L+ клеток в CD4+ лимфоцитарном гейте на проточном цитометре, и при его значении равном или более 46,7% прогнозируют развитие самопроизвольного выкидыша. По заявленному способу у 17 беременных прогнозировался самопроизвольный выкидыш, прогноз подтвердился у 10 беременных женщин. Таким образом, точность способа – 85,1%, чувствительность – 76,9%, специфичность – 88,9%. Преимуществами заявляемого способа являются: высокая точность, хорошая воспроизводимость метода, простота в интерпретации результатов обследования.
Способ позволяет в определенные сроки беременности (6-12 недель гестации) прогнозировать самопроизвольный выкидыш у беременных женщин, как при наличии клинических проявлений данной патологии, так и при ее отсутствии на момент обследования, что дает возможность своевременно выбрать правильную тактику ведения женщин с риском развития данной акушерскогинекологической патологии и избежать неблагоприятных исходов беременности.
Полученные данные представлены на рисунке 3.3.1.
|
|
|
Ra_62L_ |
|
|
60 |
A |
|
|
|
|
|
|
1 |
|||
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
70 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
60 |
|
|
80 |
|
|
|
|
|
|
|
Sensitivity |
|
|
|
|
|
|
50 |
<=46,7 |
60 |
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
Sens: 88,9 |
||
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
40 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Spec: 76,9 |
|
|
40 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
30 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
20 |
|
|
|
|
|
20 |
|
|
0 |
|
|
|
|
|
10 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
20 |
40 |
60 |
80 |
100 |
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100-Specificity |
|
|
1 |
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
Показатель |
|
|
Чувствительность, % |
iСпецифичность, % |
|||
|
CD45RA+CD62L+ |
|
|
76,9 |
88,9 |
|||
|
лимфоциты |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|||
|
Рис. 3.3.1. ROС - анализ показателя CD45RA+CD62L+ лимфоцитов в популяции |
|||||||
|
Т-хелперов периферической крови беременных женщин 1 триместра гестации с |
|||||||
|
|
развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем |
Таким образом, в периферической крови женщин с неосложненным на момент обследования течением беременности и развившимся впоследствии самопроизвольным выкидышем направленность дифференцировки, как в популяции CD4+ лимфоцитов, так и в популяции CD8+ лимфоцитов, характеризовалась увеличением уровня терминально-дифференцированных клеток памяти по сравнению с показателями группы женщин с неосложненным течением беременности 1 триместра гестации. Кроме того, у женщин с развившемся впоследствии самопроизвольным выкидышем в популяции периферических Т-хелперов отмечалось увеличение содержания наивных клеток на фоне снижения центральных клеток памяти относительно показателей женщин с неосложненным течением беременности 1триместра гестации.