57. Тинкториальные свойства бактерий. Цели и методы окраски

Тинкториальные свойства – отношение микроорганизмов к красителям. Окраску мазка производят простыми или сложными методами.

Способы окраски
негативные	позитивные
окрашивается фон мазка, на котором хорошо видны НЕОКРАШЕННЫЕ м/о	ОКРАШИВАЮТСЯ м/о, которые хорошо видны на неокрашенном фоне
окрашивание капсул бактерий по Бурри-Гинсу	окрашивание холерного вибриона по Граму

По количеству красителей
простые	сложные
использ. 1 краситель, малоинформативен	используются 2 и более красителей

По назначению
дифференциально-диагностические	специальные
метод Грама/ метод Циля-Нильсена	Окраска: спор, капсул, жгутиков, включений

Дифференциальные методы окраски бактерий

при использовании этих методов окраски последовательно применяют красители контрастного цвета и обесцвечивающие (дифференцирующие) вещества (спирт или кислоту).

По Граму стафилококки, стрептококки и пневмококки окрашиваются положительно, а менингококки и гонококки – отрицательно. Гонококки под влиянием химиопрепаратов могут менять свойства и образовывать грамположительные формы.

Специальные методы окраски – по Бурри-Гинсу для выявления капсул.

Менингококки и гонококки хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, фуксином, бриллиантовым зеленым и др.).

Специальные методы окраски бактерий

Источник: Mikrobiologia_Zverev, khoroshie_lektsii_po_mikre

58. Типы и механизмы питания бактерий. Классификация бактерий по используемым источникам углерода и энергии. Прототрофы и ауксотрофы

Прототрофы - микроорганизмы, не требующие (в отличие от ауксотрофов) для своего развития готовых витаминов, аминокислот или др. факторов роста, а синтезирующие их из минеральных или органических соединений.

Ауксотрофы - микроорганизмы, в противоположность прототрофам утратившие способность к самостоятельному синтезу какого–либо метаболита (аминокислоты, витамины и т. д.) в результате мутации и потери способности к образованию соответствующих ферментов.

59. Токсины бактерий, их природа и свойства. Получение и применение экзо- и эндотоксинов.

Токсины способствуют развитию инфекционного процесса.

По биологическим свойствам бактериальные токсины делятся:

• экзотоксины – белковые токсины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов:

o 1-й тип- мембранотоксины - гемолизины, лейкоцидины;

o 2-й тип- функциональные блокаторы, или нейротоксины (тетаноспазмин, ботулинический токсин). Они блокируют передачу нервных импульсов в синапсах (в клетках спинного и головного мозга);

o 3-й тип- термостабильные и термолабильные энтеротоксины - они активизируют клеточную аденилатциклазу, что приводит к нарушению энтеросорбции и развитию диарейного синдрома. Такие токсины продуцируют холерный вибрион (холероген), энтеротоксигенные кишечные палочки;

o 4-й тип- цитотоксины - это токсины, блокирующие синтез белка субклеточном уровне. К ним относятся: энтеротоксин золотистых стафилококков, дерматонекротоксины стафилококков, палочек сибирской язвы, сине-зеленого гноя и возбудителя коклюша, а также антиэлонгаторы. Последние препятствуют элонгации (наращиванию) или транслокации, т. е. передвижению и-РНК вдоль рибосомы, и тем самым блокируют синтез белка. К антиэлонгаторам относят дифтерийный гистотоксин, токсин синегнойной палочки;

o 5-й тип- эксфолиатины, образуемые некоторыми штаммами золотистого стафилококка, и эритрогенины, продуцируемые пиогенным стрептококком группы А. Они влияют на процесс взаимодействия клеток между собой и с межклеточными веществами, и полностью определяют клиническую картину инфекции. В первом случае возникает пузырчатка новорожденных, во втором - скарлатина.

Механизм действия - повреждение жизненно важных процессов в клетке:

• повышение проницаемости мембран,

• блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками.

• Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и индуцируют образование в организме антитоксинов.

По степени связи с бактериальной клетки экзотоксины делятся условно на три класса.

• Класс А - токсины, секретируемые во внешнюю среду;

• Класс В - токсины частично секретируемые и частично связанные с микробной клеткой;

• Класс С - токсины, связанные и с микробной клеткой и попадающие в окружающую среду при разрушении клетки.

Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксиныи применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток.

По отношению к t различают:

o термолабильные

o термостабильные белковые токсины.

Экзотоксины состоят из 2х составных частей:

1 ая- рецептор и служит для фиксации молекулы токсина на соответствующей « клетке- мишени»

2ая- собственно токсический фрагмент- проникает внутрь клетки, блокирую жизненно важные метаболические реакции.

Эндотоксины - липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки.

Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, диссеминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК).

Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами.

При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин.

Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной хромосомами, гены, привнесенные плазмидами и умеренными фагами.

Получение экзотоксинов:

1) выращивание токсигенной (образующей экзотоксин) культуры в жидкой питательной среде;

2) фильтрование через бактериальные фильтры (отделение экзотоксина от бактериальных клеток); можно использовать другие способы очистки.

Экзотоксины используют затем для получения анатоксинов.

Получение эндотоксинов:

Используются различные методы разрушения микробной клетки, а затем проводят очистку, т.е. отделение эндотоксина от других компонентов клетки.

Так как эндотоксины – это липополисахариды, их можно извлечь из микробной клетки путем ее разрушения ТХУ (трихлоруксусная кислота) с последующим диализом для очистки от белков.