107. Возбудители сальмонеллезов. Биологические свойства, факторы вирулентности. Особенности патогенеза.
Сальмонеллез - острая кишечная зоонозная инфекция, вызываемая многочисленными бактериями из рода сальмонелл, характеризующаяся преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, реже – генерализованных форм.
Семейство Enterobacteriaceae Род Salmonella. Вид Salmonella enterica Подвид Еnterica subs. Серовары Enteritidis, Typhimurium, Choleraesuis, Haifa, Heidelberg, Derby, Gallinarium и др.
Морфология
Мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, подвижны (перитрихи).
Антигенная структура сальмонелл –сложная, имеются О-, Н-, Vi-, М-антигены.
· О –соматический антиген, липополисахарид клеточной стенки, термостабильный,
· (выдерживает кипячение в течение 2часов, автоклавирование при 1200С –30 мин.),
· чувствительны к формальдегиду, групповой –(классификация Кауфмана-Уайта-67 серогрупп (А, В, С, Д…).
· Н –жгутиковый антиген, белок флагеллин, термолабильный (разрушается при нагревании 1000С, под действием соляной кислоты, спирта,
протеолитических ферментов), типовой (схема Кауфмана-Уайта).
· Vi-АГ –поверхностный полисахаридный антиген S.typhi, являющийся разновидностью К-АГ, термолабильный (разрушается при кипячении), чувствительный к соляной кислоте и спирту, является рецептором для бактериофагов.
· М-АГ –слизистый, водонерастворимый, разрушается под действием кислот и спиртов.
Факторы патогенности.
1.Токсины:
· эндотоксин –липополисахаридоклеточной стенки, высвобождается при гибели возбудителей, оказывая пирогенное и токсическое действие;
· возбудители сальмонеллезов выделят экзотоксины –термолабильный белковый энтеротоксин, сходный с холерогеном (увеличивают в клетках эпителия тонкого кишечника содержание цАМФ, что приводит к повышенному выходу воды из клеток и развитию диареи) + цитотоксическое действие, вызывая гибель энтероцитов.
2.Ферменты патогенности: гиалуронидаза, фибринолизин, лецитиназа, муциназа, протеаза, супероксиддисмутаза (инактивирует суперактивные радикалы О2, что придает устойчивость к фагоцитозу).
3.Структурные и химические компоненты клетки: * пили I и II типов; * микрокапсула у S. typhi; * белки наружной мембраны –инвазины (обеспечивающие инвазию к слизистой и резистентность к фагоцитозу, позволяющую сальмонеллам сохраняться и размножаться внутри фагоцитов).
Патогенез
Попав в организм через рот, сальмонеллы проникают в пищеварительный тракт. При этом значительная часть бактерий погибает и освобождается эндотоксин, который может проникнуть в кровь. Появляются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта и общего токсикоза. Заболевание длится не более 4-5 дней; иногда переболевшие становятся носителями сальмонелл. Выделяют следующие формы и варианты течения:
1. Гастроинтестинальная (локализованная) форма:
· - гастритический вариант,
· - гастроэнтеритический вариант,
· - гастроэнтероколитический вариант.
2. Генерализованная форма:
· - тифоподобный вариант
· - септический вариант.
3. Бактериовыделение:
· - острое,
· - хроническое,
· - транзиторное.
При всех формах и вариантах заболевания инкубационный период составляет от нескольких часов до 2 дней.
Методы лабораторной диагностики I.Бактериологический метод: 1.Материал для исследования: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод. 2.Микроскопия:
· методы окраски:простой метод, по Граму;
· микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно;
· грамотрицательные;
· спор не образуют;
· капсулу не образуют;
· подвижны (за исключением S.pullorum).
3.Культивирование:
· посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др, накопительные;
· особенности выделения возбудителя:
1. факультативные анаэробы;
2. оптимальная температура 37oС;
3. срок культивирования 18-20 часов.
культуральные свойства:Все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки;
1. на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка, 2.на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии, 3.на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина – светло-фиолетовые колонии.После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).
Биохимические свойства:
1. обладают высокой сахаролитической активностью; для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса) при этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;
2. дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;
3. сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;
4. дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра – желтое окрашивание среды.
IIСерологический метод:
1. используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;
2. используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;
3. у сальмонелл различают соматический термостабильный антиген и жгутиковый термолабильный антиген;
4. культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами – РИФ